本文選題：鉛 + 對(duì)氨基水楊酸鈉��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的研究主要探討鉛誘導(dǎo)體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞損傷、凋亡相關(guān)基因與蛋白表達(dá)的影響,以及對(duì)氨基水楊酸鈉(PAS-Na)的干預(yù)作用效果。方法PC12細(xì)胞經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)代培養(yǎng),分別(1)經(jīng)0、1、10、100、1000μmol·L-1五個(gè)濃度梯度的醋酸鉛單獨(dú)作用24h,(2)單獨(dú)給予0、5、50、100、500μmol·L-1五個(gè)濃度梯度的PAS-Na作用24h,用倒置相差顯微鏡觀察PC12細(xì)胞的形態(tài),使用MTT法測(cè)定各個(gè)組的細(xì)胞存活率。(3)PC12細(xì)胞被隨機(jī)分為正常對(duì)照組、鉛模型組、醋酸鉛+ PAS-Na 20,100和500μmol·L-1劑量干預(yù)組。正常對(duì)照組和正常+PAS-Na500 μmol·L-1組細(xì)胞于正常培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h后棄培養(yǎng)液,前者加入正常培養(yǎng)液、后者加入PAS-Na繼續(xù)培養(yǎng)24 h。醋酸鉛模型組及醋酸鉛+ PAS-Na 20,100和500μmol·L-1組先與醋酸鉛(終濃度10μmol·L-1)共培養(yǎng)24h后棄培養(yǎng)液,再加入相應(yīng)濃度PAS-Na繼續(xù)培養(yǎng)24 h。用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率,試劑盒方法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)含量,Hoechst33342熒光染色及AnnexinⅤ/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PC12細(xì)胞早期凋亡率,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)法測(cè)定P53、Caspase-3、Caspase-9和MAPK14mRNA表達(dá)量,蛋白免疫印跡法(WB)測(cè)定 P53、Bax、Bcl-2、Capsase-3、Caspase-9 及 MAPK 通路的 T-/P-JNK、T-/P-ERK、T-/P-P38 蛋白表達(dá)。結(jié)果(1)鉛可引起PC12細(xì)胞的形態(tài)損傷及存活率呈劑量-反應(yīng)性下降。(2)高濃度(5000μmol·L-1)PAS-Na可使PC12細(xì)胞存活率降低,其它劑量組的存活率與對(duì)照組無(wú)差異。(3)鉛模型組PC12細(xì)胞皺縮、突起稀少。與正常對(duì)照組比較,醋酸鉛模型組細(xì)胞存活率降低(P0.05),細(xì)胞凋亡形態(tài)變化典型、細(xì)胞凋亡率增高(P0.05)、細(xì)胞內(nèi)GSH含量降低(P0.05),P53、Caspase-3、Caspase-9 和 MAPK14mRNA 表達(dá)均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),P53、Bax、activated Capsase-3、activated Caspase-9和p-JNK蛋白表達(dá)均升高,p-ERK和Bcl-2表達(dá)下降;正常+PAS-Na500μmol·L-1組上述指標(biāo)未見(jiàn)明顯變化。(4)與醋酸鉛模型組比較,醋酸鉛+PAS-Na 100和500 μmol·L-1組PC12細(xì)胞存活率增高和細(xì)胞凋亡率降低(P0.05),各PAS-Na干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)GSH含量增高(P0.05),PAS-Na干預(yù)或治療對(duì)上述鉛誘導(dǎo)改變的基因均有不同程度的下調(diào),其中醋酸鉛+PAS-Na 100 和 500 μml·L-組 P53、Caspase-3、Caspase-9 和 MAPK14 mRNA表達(dá)改變下調(diào)較為明顯(P0.05)。PAS-Na干預(yù)可不同程度的上調(diào)p-ERK和 Bcl-2 表達(dá)、下調(diào) P53、Bax、activated Capsase-3、和 p-JNK 蛋白表達(dá)白水平,但對(duì)activated Caspase-9和P38蛋白的表達(dá)影響不大。結(jié)論(1)鉛暴露引起PC12細(xì)胞存活率和凋亡率降低,PAS-NA對(duì)鉛致PC12細(xì)胞存活率下降和細(xì)胞凋亡增加有一定的保護(hù)作用。(2)鉛暴露會(huì)降低PC12細(xì)胞內(nèi)GSH含量,PAS-Na對(duì)鉛致PC12細(xì)胞內(nèi)GSH含量降低具有一定的拮抗作用。(3)鉛暴露引起 PC12 細(xì)胞 P53、Caspase-3、Caspase-9 和 MAPK14 mRNA 表達(dá)水平升高。PAS-Na 對(duì)鉛致 P53、Caspase-3、Caspase-9 和 MAPK14 mRNA表達(dá)水平升高有一定的治療性干預(yù)作用。(4)鉛可能通過(guò)MAPK通路中的JNK、ERK途徑參與細(xì)胞凋亡,以激活JNK磷酸化并降低ERK活性;鉛也可通過(guò)上調(diào)P53、降低Bax/Bcl-2比率,并且激活Caspase-9和Caspase-3,從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。PAS-Na干預(yù)對(duì)MAPK通路和凋亡相關(guān)蛋白改變有一定的拮抗作用。
[Abstract]:The apoptosis rate of PC12 cells was determined by MTT assay , and the survival rate of PC12 cells was determined by MTT assay . ( 4 ) Compared with the normal control group , the survival rate of PC12 cells decreased ( P0.05 ) , the expression of P53 , Bax , activated Capsase - 3 , activated Caspase - 9 and p38 protein decreased significantly ( P0.05 ) . ( 2 ) Lead exposure can decrease the GSH content in PC12 cells , and PAS - Na has an antagonistic effect on the decrease of GSH content in PC12 cells . ( 4 ) The expression of P53 , Caspase - 3 , Caspase - 9 and MAPK14 mRNA in PC12 cells is increased by PAS - Na .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R114

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本文編號(hào)：1881734