本文選題：松茸多糖 + RAW264.7�。� 參考：《西華師范大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：真菌多糖作為一類天然高分子化合物,具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血脂、抗輻射、抗?jié)�、抗衰老、抗氧化、抗病毒、降血糖、抗突變等�?fù)雜多樣的生物活性。因其具有上述多種生物活性現(xiàn)已在醫(yī)藥、保健等行業(yè)受到廣泛關(guān)注,國內(nèi)外不少科研工作者對許多種類的真菌多糖也做了大量相關(guān)研究工作,為天然真菌的開發(fā)和利用提供了大量理論資料。松茸作為天然真菌具有極高的營養(yǎng)價值和藥用價值,其所含成分具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等生物活性,而其所含多糖成分尤為突出。雖然對松茸及其多糖的研究有不少文獻(xiàn)報道,但大多集中在松茸多糖的提取分離純化,粗提取物的生物活性的研究,而松茸多糖的純提取物的結(jié)構(gòu)鑒定及其免疫調(diào)節(jié),抗腫瘤等生物活性的研究相對較少。本研究于實驗前期從松茸子實體里提取分離純化獲得松茸多糖單體(TMP-A),并對其進(jìn)行了體外免疫調(diào)節(jié)活性研究。本研究采用CCK-8法檢測TMP-A對免疫細(xì)胞(Raji細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞、RAW264.7細(xì)胞)的增殖效應(yīng);碘化丙啶染色流式細(xì)胞術(shù)檢測TMP-A對RAW264.7細(xì)胞周期的影響;中性紅法檢測TMP-A對RAW264.7細(xì)胞吞噬能力的影響;經(jīng)典的Griess Reagent法檢測TMP-A對RAW264.7細(xì)胞釋NO水平的影響;ELISA法檢測TMP-A對RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6)釋放量的影響;實時熒光定量PCR法檢測TMP-A對RAW264.7細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子基因(TNF-α、IL-6、IL-1β)及iNOS基因的mRNA相對表達(dá)的影響;Western Blot法檢測TMP-A對RAW264.7細(xì)胞內(nèi)iNOS及其COX-2蛋白表達(dá)的影響。實驗結(jié)果表明:TMP-A在一定濃度范圍內(nèi)能顯著促進(jìn)免疫細(xì)胞(Raji細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞、RAW264.7細(xì)胞)的增殖,細(xì)胞周期實驗結(jié)果表明:TMP-A能夠促使處于S期、G2/M期的RAW264.7細(xì)胞所占百分比的數(shù)量增加,G0/G1期所占百分比的數(shù)量下降,這與TMP-A能夠促使RAW264.7細(xì)胞的增殖相吻合。TMP-A在一定濃度范圍內(nèi)能提高RAW264.7細(xì)胞的吞噬能力,促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞NO及其相關(guān)細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6)的釋放。熒光定量PCR檢測結(jié)果證實TMP-A能提高RAW264.7細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子基因(TNF-α、IL-6、IL-1β)及iNOS基因的mRNA相對表達(dá)。Western Blot法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn):TMP-A對RAW264.7細(xì)胞的內(nèi)參蛋白β-actin的表達(dá)的影響基本不變,iNOS及COX-2蛋白的表達(dá)量顯著增加。綜上所述:TMP-A能夠通過激活T、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)活性。
[Abstract]:As a class of natural polymer compounds, fungal polysaccharides have complex biological activities, such as immune regulation, anti-tumor, anti-lipids, anti-radiation, anti-ulcer, anti-aging, anti-oxidation, anti-virus, hypoglycemic, anti-mutation and other complex biological activities. Because of its various biological activities, it has received extensive attention in medicine, health care and other industries. Many researchers at home and abroad have also done a lot of related research work on many kinds of fungal polysaccharides. It provides a lot of theoretical data for the development and utilization of natural fungi. As a natural fungus, Tricholoma matsutake has high nutritional value and medicinal value, and its components have anti-tumor, immunomodulation and other biological activities, and its polysaccharides are especially prominent. Although there have been many reports on the studies of Tricholoma matsutake and its polysaccharides, most of them focus on the extraction, purification, bioactivity of crude extracts, and the structure identification and immunomodulation of pure polysaccharides from Tricholoma matsutake. There are relatively few studies on anti-tumor biological activities. In this study, the polysaccharides monomers of Tricholoma matsutake were isolated and purified from the fruit body of Tricholoma matsutake in the early stage of the experiment, and their immunomodulatory activity was studied in vitro. In this study, CCK-8 assay was used to detect the proliferation effect of TMP-A on RAW264.7 cells, flow cytometry was used to detect the effect of TMP-A on the cell cycle of RAW264.7, and the effect of TMP-A on the phagocytosis of RAW264.7 cells was detected by neutral red method. The effect of TMP-A on the release of no in RAW264.7 cells was detected by classical Griess Reagent assay and the effect of TMP-A on the release of TNF- 偽 IL-6 in RAW264.7 cells was detected by Elisa. The effect of TMP-A on the relative expression of cytokine gene TNF- 偽 / IL-6 / IL-1 尾 and mRNA of iNOS gene in RAW264.7 cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR assay. The effect of TMP-A on the expression of iNOS and COX-2 protein in RAW264.7 cells was detected by Western Blot assay. The results showed that the proliferation of RAW264.7 cells in Raji cell line was significantly promoted by 1: TMP-A in a certain concentration range. The results of cell cycle test showed that: TMP-A could increase the percentage of RAW264.7 cells in G _ 2 / M phase of S phase, increase the percentage of G _ 0 / G _ 1 phase, and decrease the percentage of G _ 0 / G _ 1 phase. TMP-A can increase the phagocytic ability of RAW264.7 cells and promote the release of no and its related cytokine TNF- 偽 / IL-6 in RAW264.7 cells. The results of fluorescence quantitative PCR showed that TMP-A could increase the relative expression of TNF- 偽 IL-6 and iNOS gene in RAW264.7 cells. Western Blot assay showed that the effect of TMP-A on the expression of 尾 -actin in RAW264.7 cells was almost the same as that of COX-2 eggs. The expression of white increased significantly. It is concluded that: TMP-A can exert its immunomodulatory activity by activating T T B lymphocytes and macrophages.
【學(xué)位授予單位】：西華師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R151

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本文編號：1868576