本文選題：氰戊菊酯 + 精子畸形�。� 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：氰戊菊酯（fenvalerate，F(xiàn)EN），是國(guó)內(nèi)最常用的Ⅱ型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑之一，具有擬雌激素和抗雄激素樣作用，被認(rèn)為是一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物。目前的研究提示氰戊菊酯有內(nèi)分泌干擾效應(yīng)和雄性生殖功能損害作用，但其作用機(jī)制還有待深入研究。本課題選擇氰戊菊酯這一代表性的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，運(yùn)用模式動(dòng)物染毒實(shí)驗(yàn)，研究其在不同暴露水平下的雄性生殖毒性作用，再運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法，探討低劑量氰戊菊酯染毒影響雄性生殖系統(tǒng)的作用機(jī)制。我們選擇8-10w雄性SD大鼠，連續(xù)灌胃染毒，每天一次，每周6天，共染毒8周，染毒劑量分別為0、0.00625、0.125、2.5、30mg/kg/d共5組。染毒結(jié)束后分別運(yùn)用計(jì)算機(jī)輔助精子分析、吖啶橙染色、CTC染色、HE染色方法觀察氰戊菊酯對(duì)雄性大鼠生殖系統(tǒng)的影響。根據(jù)染毒實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選擇對(duì)照組與低劑量組的精子、睪丸蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究。計(jì)算機(jī)輔助精子分析（CASA）對(duì)染毒大鼠附睪尾部精子的計(jì)數(shù)、活動(dòng)率及前向運(yùn)動(dòng)比率進(jìn)行分析，結(jié)果顯示染毒各濃度組與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；運(yùn)用吖啶橙染色的方法觀察精子DNA損傷各組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；運(yùn)用CTC染色的方法觀察精子獲能及自發(fā)性頂體反應(yīng)的情況，各組獲能率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，自發(fā)性頂體反應(yīng)率0.00625mg/kg/d組與對(duì)照組相比有所增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；用HE染色觀察精子畸形率顯示各組與對(duì)照組相比均有明顯增加，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，將精子畸形分類(lèi)計(jì)算頭部、頸部及尾部畸形率顯示各染毒組尾部畸形率與對(duì)照組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，2.5、30mg/kg/d組的頭部及頸部畸形率與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。睪丸HE染色示各組睪丸大體形態(tài)上無(wú)明顯差異。根據(jù)染毒實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，采用雙向凝膠電泳和質(zhì)譜技術(shù)這兩種蛋白質(zhì)組研究的主要技術(shù)手段，選擇0mg、0.00625mg兩組的精子和睪丸蛋白進(jìn)行二維電泳，比較染毒后精子、睪丸蛋白的改變，得到差異蛋白質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示精子蛋白二維電泳共鑒定出55個(gè)差異點(diǎn)，1.5倍以上38個(gè)，對(duì)應(yīng)34種蛋白質(zhì)，有多個(gè)與精子結(jié)構(gòu)相關(guān)的蛋白，選擇其中部分蛋白進(jìn)行Western Blot驗(yàn)證,趨勢(shì)一致；睪丸蛋白二維電泳共鑒定出63個(gè)差異點(diǎn)，1.5倍以上46個(gè)，對(duì)應(yīng)43種蛋白質(zhì)，，選擇關(guān)鍵的差異蛋白進(jìn)行Western Blot驗(yàn)證,并做睪丸免疫組化進(jìn)行定位研究。對(duì)低劑量氰戊菊酯導(dǎo)致精子異常的作用機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探討，我們閱讀文獻(xiàn)后發(fā)現(xiàn)睪丸差異蛋白中有多個(gè)和P53表達(dá)增加相關(guān)，而已有文獻(xiàn)顯示中等程度超表達(dá)P53的轉(zhuǎn)基因雄性小鼠表型為畸形活精子癥， Realtime PCR顯示染毒組P53mRNA水平表達(dá)增加，Western Blot結(jié)果提示染毒后P53蛋白水平表達(dá)也有增加，其灰度值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Realtime PCR檢測(cè)P53下游基因ccna1mRNA表達(dá)水平也有增高。因此我們推測(cè)低劑量氰戊菊酯影響雄性大鼠生殖功能的分子機(jī)制可能是通過(guò)以P53表達(dá)增加這一通路作用的。本研究為進(jìn)一步探討氰戊菊酯導(dǎo)致男性不育的分子機(jī)制提供了一定基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1745665