本文選題：氰戊菊酯 + 精子畸形��； 參考：《南京醫(yī)科大學》2012年博士論文

【摘要】：氰戊菊酯（fenvalerate，F(xiàn)EN），是國內最常用的Ⅱ型擬除蟲菊酯類殺蟲劑之一，具有擬雌激素和抗雄激素樣作用，被認為是一種環(huán)境內分泌干擾物。目前的研究提示氰戊菊酯有內分泌干擾效應和雄性生殖功能損害作用，但其作用機制還有待深入研究。本課題選擇氰戊菊酯這一代表性的環(huán)境內分泌干擾物，運用模式動物染毒實驗，研究其在不同暴露水平下的雄性生殖毒性作用，再運用蛋白質組學的研究方法，探討低劑量氰戊菊酯染毒影響雄性生殖系統(tǒng)的作用機制。我們選擇8-10w雄性SD大鼠，連續(xù)灌胃染毒，每天一次，每周6天，共染毒8周，染毒劑量分別為0、0.00625、0.125、2.5、30mg/kg/d共5組。染毒結束后分別運用計算機輔助精子分析、吖啶橙染色、CTC染色、HE染色方法觀察氰戊菊酯對雄性大鼠生殖系統(tǒng)的影響。根據(jù)染毒實驗的結果，選擇對照組與低劑量組的精子、睪丸蛋白進行蛋白質組學研究。計算機輔助精子分析（CASA）對染毒大鼠附睪尾部精子的計數(shù)、活動率及前向運動比率進行分析，結果顯示染毒各濃度組與對照組無統(tǒng)計學差異；運用吖啶橙染色的方法觀察精子DNA損傷各組無統(tǒng)計學差異；運用CTC染色的方法觀察精子獲能及自發(fā)性頂體反應的情況，各組獲能率無統(tǒng)計學差異，自發(fā)性頂體反應率0.00625mg/kg/d組與對照組相比有所增加，有統(tǒng)計學差異；用HE染色觀察精子畸形率顯示各組與對照組相比均有明顯增加，并有統(tǒng)計學差異，將精子畸形分類計算頭部、頸部及尾部畸形率顯示各染毒組尾部畸形率與對照組均有統(tǒng)計學差異，2.5、30mg/kg/d組的頭部及頸部畸形率與對照組有統(tǒng)計學差異。睪丸HE染色示各組睪丸大體形態(tài)上無明顯差異。根據(jù)染毒實驗的結果，采用雙向凝膠電泳和質譜技術這兩種蛋白質組研究的主要技術手段，選擇0mg、0.00625mg兩組的精子和睪丸蛋白進行二維電泳，比較染毒后精子、睪丸蛋白的改變，得到差異蛋白質。實驗結果顯示精子蛋白二維電泳共鑒定出55個差異點，1.5倍以上38個，對應34種蛋白質，有多個與精子結構相關的蛋白，選擇其中部分蛋白進行Western Blot驗證,趨勢一致；睪丸蛋白二維電泳共鑒定出63個差異點，1.5倍以上46個，對應43種蛋白質，，選擇關鍵的差異蛋白進行Western Blot驗證,并做睪丸免疫組化進行定位研究。對低劑量氰戊菊酯導致精子異常的作用機制進行進一步探討，我們閱讀文獻后發(fā)現(xiàn)睪丸差異蛋白中有多個和P53表達增加相關，而已有文獻顯示中等程度超表達P53的轉基因雄性小鼠表型為畸形活精子癥， Realtime PCR顯示染毒組P53mRNA水平表達增加，Western Blot結果提示染毒后P53蛋白水平表達也有增加，其灰度值比較有統(tǒng)計學差異。Realtime PCR檢測P53下游基因ccna1mRNA表達水平也有增高。因此我們推測低劑量氰戊菊酯影響雄性大鼠生殖功能的分子機制可能是通過以P53表達增加這一通路作用的。本研究為進一步探討氰戊菊酯導致男性不育的分子機制提供了一定基礎。
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【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R114

【參考文獻】

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本文編號：1745665