本文選題：丙烯酰胺 + Calpeptin��； 參考：《山東大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的丙烯酰胺(acrylamide/acrylicamide,ACR)是一種水溶性的、乙烯基白色晶體,應(yīng)用廣泛。研究表明,ACR引起以共濟失調(diào)、骨骼肌無力、震顫為主的周圍神經(jīng)退行性變。蛋白激酶A(Protein Kinase A,PKA)、蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)、周期素依賴性蛋白激酶5(Cyclin-dependentkinase5,Cdk5)可磷酸化富含絲氨酸/蘇氨酸的神經(jīng)絲(neurofilament,NFs)蛋白,使NFs結(jié)構(gòu)功能發(fā)生改變,影響細胞骨架形成。鈣蛋白水解酶(calpain)依賴Ca~(2+)激活,可改變PKA、PKC、Cdk5等含量。我們推測,ACR可能通過Ca~(2+)活化calpain,以激活PKA、PKC、Cdk5,改變NFs磷酸化狀態(tài),最終致ACR神經(jīng)病。本實驗建立大鼠ACR亞慢性中毒模型及鈣蛋白酶抑制劑calpeptin(CP)干預(yù)模型,觀察神經(jīng)行為學及病理形態(tài),檢測Ca~(2+)濃度、PKA、PKC、Cdk5含量,探討CP拮抗丙烯酰胺中毒大鼠神經(jīng)絲磷酸化相關(guān)激酶的機制。方法1.模型建立:成年雌性60只Wistar大鼠隨機分為四組,即空白對照組、CP對照組、ACR模型組、ACR+CP干預(yù)組。ACR模型組和ACR+CP干預(yù)組按30mg/kg·bw腹腔注射ACR染毒3次/周,空白對照組給予等體積生理鹽水;CP對照組與ACR+CP干預(yù)組給予200ug/kg·bwCP,6次/周,連續(xù)四周。染毒終止,分離脊髓與坐骨神經(jīng)備用。染毒期間每周進行體重稱量、步態(tài)評分和后肢抓力的測定。2.鈣離子:分離脊髓,鈣離子熒光探針(Fura-2/AM)負載法測定鈣離子濃度。3.蛋白含量:使用SDS-PAGE凝膠電泳和Western blot法對脊髓和坐骨神經(jīng)組織中PKA、PKC、Cdk5含量分析。4.NFs磷酸化:常規(guī)免疫組化法(SP法),觀察脊髓與坐骨神經(jīng)內(nèi)NFs磷酸化水平。5.形態(tài)學:HE和甲苯胺藍染色觀察脊髓與坐骨神經(jīng)病理形態(tài);透射電鏡觀察坐骨神經(jīng)組織內(nèi)有髓神經(jīng)纖維以及g-Ratio變化。結(jié)果1.體重自染毒第二周起,與空白對照組相比,CP對照組無明顯差異(P0.05),ACR模型組同期體重明顯低于空白對照組(P0.05);與ACR模型組相比,ACR+CP干預(yù)組同期體重明顯高于ACR模型組(P0.05)。2.神經(jīng)行為學(1)步態(tài)評分:自染毒第二周起,與空白對照組比,CP對照組無明顯差異(P0.05),ACR模型組得分同期明顯升高(P0.05);與ACR模型組比,ACR+CP干預(yù)組同期得分明顯降低(P0.05)。(2)后肢抓力:自染毒第二周起,與空白對照組比,CP對照組無明顯差異(P0.05),ACR模型組同期抓力明顯降低(P0.05);與ACR模型組比,ACR+CP干預(yù)組同期抓力明顯升高(P0.05)。3.脊髓Ca~(2+)含量與空白對照組比,CP對照組的Ca~(2+)濃度無顯著變化(P0.05),ACR模型組的Ca~(2+)濃度顯著升高(P0.05);與ACR組比,ACR+CP干預(yù)組的Ca~(2+)濃度顯著降低(p0.05)。4.NFs磷酸化相關(guān)激酶與空白對照組比,ACR模型組脊髓組織中PKA含量略有降低(P0.05),PKC含量顯著升高(P0.05),坐骨神經(jīng)組織中PKA、PKC和Cdk5含量均顯著升高(P0.05);與ACR模型組比,ACR+CP干預(yù)組脊髓組織中PKA明顯升高(P0.05),PKC含量顯著下降(P0.05),坐骨神經(jīng)組織中PKA、PKC和Cdk5含量均顯著下降(P0.05)。5.脊髓及坐骨神經(jīng)NFs磷酸化ACR模型組大鼠磷酸化的NFs較空白對照組染色深,而ACR+CP干預(yù)組大鼠染色較ACR模型組染色淺;ACR模型組非磷酸化的NFs較空白對照組染色淺;ACR+CP干預(yù)組較ACR模型組染色深。6.組織形態(tài)學(1)脊髓:與空白對照組比,ACR模型組運動神經(jīng)元減少,核固縮、核膜核仁溶解或消失,尼氏體分布降低;與ACR模型組比,ACR+CP干預(yù)組運動神經(jīng)元較正常、數(shù)量略有增加,尼氏體增加。(2)坐骨神經(jīng):與空白對照組比,ACR模型組的坐骨神經(jīng)截面破損,細胞稀松,髓鞘排列松散,髓鞘板層斷裂和/或向內(nèi)擠壓軸漿,g-Ratio顯著下降(P0.05);與ACR模型組相比,ACR+CP干預(yù)組髓鞘損傷得到緩解,g-Ratio顯著上升(P0.05)。結(jié)論1.CP能夠拮抗ACR中毒引起的大鼠異常神經(jīng)行為功能改變以及脊髓和坐骨神經(jīng)病理形態(tài)學改變。2.CP能夠拮抗ACR引起的鈣離子、神經(jīng)絲磷酸化激酶以及NFs磷酸化水平的改變。3.CP可能通過抑制Ca~(2+)-Calpain-激酶-NFs通路中Ca~(2+)及NF磷酸化相關(guān)激酶拮抗ACR中毒。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R114

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本文編號：1745272