本文選題：亞麻籽油　切入點(diǎn)：高脂　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的：1.在能量攝入一致的前提下,探討亞麻籽油顯著改善高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗的適宜攝入量；2.基于脂質(zhì)組學(xué)方法,探討亞麻籽油介導(dǎo)的n-3多不飽和脂肪酸(n-3 polyunsaturated fatty acids, n-3PUFA)狀態(tài)與高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗關(guān)系;3.從肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)、線粒體損傷及自噬功能紊亂的角度探討亞麻籽油改善高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗的分子機(jī)制。方法：1.分組：80只體重為18-20 g的雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為5組：低脂對(duì)照組(2.4%玉米油+1.9%豬油)、高脂模型組(3.2%玉米油+31.9%豬油)、低(10%亞麻籽油+21.9%豬油+3.2%玉米油)、中(20%亞麻籽油+11.9%豬油+3.2%玉米油)和高劑量亞麻籽油替代組(30%亞麻籽油+1.9%豬油+3.2%玉米油)。其中,低脂對(duì)照組脂肪供能比為10%,其它各高脂組脂肪供能比為60%。喂養(yǎng)16周建立高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗模型。2.測(cè)定指標(biāo)：ELISA法和酶學(xué)比色法測(cè)定血清炎性細(xì)胞因子、空腹胰島素水平、空腹血糖、肝甘油三酯(Triglyceride,TG)和總膽固醇(Total Cholesterol, TC)水平;肝臟固定后用于HE染色;肝組織冰凍切片孵育DHE熒光探針檢測(cè)肝臟活性氧(Reactive oxygen species, ROS)水平;硫代巴比妥酸比色法和改良二硫代二硝基苯甲酸比色法分別測(cè)定肝臟丙二醛(Malondialdehyde, MDA)和谷胱甘肽(Glutathione, GSH)的水平：采用固相微萃取及氣相色譜法測(cè)定血清及肝組織總的及亞脂質(zhì)成分包括TG、膽固醇酯(Cholesteryl ester, CE)、甘油二酯(Diglyceride, DG)、游離脂肪酸(Free fatty acid, FFA)、磷脂(Phospholipid, PL)脂肪酸組成：采用差速離心法獲得肝細(xì)胞膜和線粒體,并對(duì)膜脂質(zhì)進(jìn)行提取、固相微萃取和膜脂肪酸組成的測(cè)定；透射電鏡觀察肝線粒體超微結(jié)構(gòu)變化以及線粒體自噬狀態(tài)；采用熒光探針JC-1及氧電極法測(cè)定肝線粒體膜電位及呼吸控制率；Western blot測(cè)定肝胰島素信號(hào)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)、JNK、線粒體自噬及生物合成調(diào)控相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果：1.各實(shí)驗(yàn)組小鼠平均能量攝入無顯著差異(LFD組除外)。中、高劑量亞麻籽油干預(yù)能夠顯著抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠體重、肝體比及睪周脂肪體重比的增加、改善系統(tǒng)水平的胰島素抵抗。2.亞麻籽油干預(yù)能夠抑制高脂誘導(dǎo)的血清炎性因子水平的增加,尤其是以MCP-1的降低最為顯著。3.長(zhǎng)期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)小鼠嚴(yán)重的肝脂肪變及氧化損傷。其中,肝脂質(zhì)沉積主要以TG的增加為主(+88%)。中、高劑量亞麻籽油干預(yù)能夠顯著改善這一變化。4.中、高劑量亞麻籽油干預(yù)顯著上調(diào)急性胰島素刺激狀態(tài)下p-Ser473Akt、 p-Tyr632IRS-1和p-Ser2448 mTOR蛋白表達(dá)水平,表明改善的肝組織胰島素信號(hào)。5.亞麻籽油干預(yù)能夠抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠血清飽和脂肪酸(Saturated fatty acid, SFA)和n-6PUFA增加,并進(jìn)一步降低單不飽和脂肪酸(Monounsaturated fatty acid, MUFA)水平,增加n-3PUFA累積,降低n-6/n-3比值,且具有劑量效應(yīng)關(guān)系。亞麻籽油對(duì)肝組織脂肪組成的影響則表現(xiàn)出類似的變化趨勢(shì)。6.亞麻籽油劑量依賴性地抑制高脂誘導(dǎo)的血清TG、CE和FFA水平的增加,但對(duì)DG和PL含量無顯著影響。亞麻籽油介導(dǎo)的n-3PUFA累積具有脂質(zhì)成分特異性。其中,a-亞麻酸(a-linolenic acid, ALA)、二十碳五烯酸(Eicosapetaenoic acid, EPA)、二十二碳五烯酸(Docosapentaenoic acid, DPA)及二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid, DHA)能夠特異性地累積在TG、FFA和CE脂質(zhì)池中;ALA和EPA累積與亞麻籽油的攝入量呈正比；各干預(yù)組DPA含量無顯著差異；中、高劑量亞麻籽油攝入對(duì)DHA累積具有反饋抑制作用。肝組織脂質(zhì)組學(xué)則表現(xiàn)出與血清類似的的分析結(jié)果。7.長(zhǎng)期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞膜脂質(zhì)重塑。其中,n-3PUFA水平顯著增加,MUFA含量和n-6/n-3比值顯著降低。亞麻籽油干預(yù)顯著降低亞油酸(Linoleicacid, LA)來源的C20：4n-6和C22：4n-6水平,但增加LA、ALA及ALA來源的EPA和DPA累積。8.相關(guān)性分析結(jié)果表明,亞麻籽油顯著改善系統(tǒng)水平胰島素抵抗可能基于ALA、EPA和DPA在血清特定脂質(zhì)成分累積及協(xié)同增效作用。其中,FFA/CE-ALA和EPA,TG-ALA、EPA和DPA以及DG-ALA與亞麻籽油介導(dǎo)的胰島素敏感性增加呈顯著正相關(guān)關(guān)系。9.中劑量亞麻籽油攝入顯著抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及未折疊蛋白反應(yīng)的失活,上調(diào)JNK表達(dá)及磷酸化水平,并伴隨著肝胰島素敏感性的改善。10.中、高劑量亞麻籽油干預(yù)一方面抑制高脂誘導(dǎo)的肝線粒體結(jié)構(gòu)損傷,增加ALA、DPA及DHA在膜磷脂中的累積,降低n-6/n-3比值,改善線粒體膜電位及呼吸控制率；另一方面,中、高劑量亞麻籽油干預(yù)上調(diào)線粒體自噬水平和生物合成調(diào)控,改善肝線粒體穩(wěn)態(tài)失衡。結(jié)論：1.亞麻籽油能夠通過抑制高脂誘導(dǎo)的肝脂肪變,氧化損傷及胰島素信號(hào)異常,改善系統(tǒng)水平的炎癥反應(yīng)和胰島素抵抗。其中,中劑量亞麻籽油干預(yù)已經(jīng)表現(xiàn)出良好的拮抗效應(yīng)。2.中、高劑量亞麻籽油介導(dǎo)的ALA及其代謝產(chǎn)物EPA和DPA在血清及肝組織特定脂質(zhì)成分及細(xì)胞膜中的累積可能參與到對(duì)高脂誘導(dǎo)的脂代謝異常及胰島素抵抗的保護(hù)作用。3.亞麻籽油干預(yù)抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)的失活,上調(diào)JNK表達(dá)和磷酸化水平,改善肝線粒體損傷和自噬功能紊亂,從而拮抗高脂誘導(dǎo)的肝胰島素抵抗。其中,以中、高劑量亞麻籽油干預(yù)最為顯著。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R151

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本文編號(hào)：1693967