本文選題：丙烯酰胺　切入點：NB-細胞　出處：《毒理學(xué)雜志》2015年02期

【摘要】：目的構(gòu)建人神經(jīng)母細胞瘤NB-1細胞神經(jīng)元突觸損傷的細胞模型,探討丙烯酰胺(acrylamide,ACR)對神經(jīng)突觸損傷的機制。方法將NB-1細胞通過二丁酰環(huán)腺苷酸(db-c AMP)誘導(dǎo)為成熟神經(jīng)元后,MTT檢測ACR不同劑量(0、25、50、100、150、200和250μg/ml)和不同染毒時間(24、48和72 h)對NB-1細胞相對存活率的影響;免疫印記(western blot)技術(shù)檢測神經(jīng)元突觸損傷前后突觸素I(Synapsin I)磷酸化和非磷酸化蛋白表達變化,光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡記錄神經(jīng)元突觸損傷前后形態(tài)、結(jié)構(gòu)變化,免疫共沉淀試驗確定神經(jīng)元突觸損傷前后N-甲基馬來酰胺敏感因子(NSF)附著蛋白受體(SNARE)的結(jié)合/解離的變化。結(jié)果根據(jù)MTT試驗結(jié)果確定ACR染毒劑量為0、25、50和100μg/ml,染毒時間為48 h;隨著ACR染毒劑量的增加Synapsin I磷酸化和非磷酸化蛋白表達降低;在25μg/ml ACR染毒劑量下可見興奮性和抑制性神經(jīng)遞質(zhì),而在50μg/ml染毒劑量下可見抑制性遞質(zhì);隨ACR染毒劑量的增加SNARE復(fù)合體中突觸融合蛋白(syntaxin)和突觸小體相關(guān)蛋白(SNAP-25)呈解離狀態(tài)。結(jié)論 ACR對NB-1細胞突觸損傷后,SNARE復(fù)合體中syntaxin和SNAP-25結(jié)合狀態(tài)與Synapsin I、P-Synapsin I蛋白表達降低呈正相關(guān),與P-Synapsin I/Synapsin I差異性表達呈負相關(guān);突觸內(nèi)特異性神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞和釋放可能與P-Synapsin I/Synapsin I差異性表達所調(diào)控的SNARE復(fù)合體的解離狀態(tài)導(dǎo)致的突觸功能損傷相關(guān)。
[Abstract]:Objective to construct a cell model of synaptic injury in NB-1 cells of human neuroblastoma. To investigate the mechanism of synaptic injury induced by acrylamide acrylamide acrylamide (ACR). Methods NB-1 cells were induced into mature neurons by dibutyryl cyclic adenylate db-c AMP.Methods NB-1 cells were treated with different doses of ACR at different doses (0 25, 50 100150 200 and 250 渭 g / ml) and at different exposure times (24 48 and 72 h). The effect of relative survival rate; The expression of synaptophysin I (I(Synapsin I) phosphorylated and non-phosphorylated protein in neurons before and after synaptic injury were detected by Western blot technique. The morphological and structural changes of synaptic neurons before and after synaptic injury were recorded by optical microscope and electron microscope. The immunoprecipitation assay was used to determine the binding / dissociation of NMSF-NSFR receptor before and after synaptic injury. Results according to the results of MTT test, the dose of ACR was determined to be 0 ~ 2550 渭 g / ml and 100 渭 g / ml, respectively. The expression of Synapsin I phosphorylation and non-phosphorylated protein decreased with the increase of the dose of ACR. Excitatory and inhibitory neurotransmitters were observed at the dose of 25 渭 g/ml ACR and inhibitory neurotransmitters at the dose of 50 渭 g/ml. The synaptic fusion protein syntaxin (syntaxin) and synaptosome associated protein (SNAP-25) in the SNARE complex were dissociated with the increase of the dose of ACR. Conclusion there is a positive correlation between the expression of syntaxin and SNAP-25 in the SNARE complex after synaptic injury of NB-1 cells induced by ACR and the decrease of the expression of Synapsin Iron-Synapsin I protein. The transmission and release of specific neurotransmitters in the synapses may be related to the synaptic function damage caused by the dissociation of the SNARE complex regulated by the differential expression of P-Synapsin I/Synapsin I.
【作者單位】： 河北聯(lián)合大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;中國疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所;中國疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所化學(xué)安全與健康重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81273110) 公益性行業(yè)科研專項(201402021) 國家科技支撐計劃(2014BAI12B00)
【分類號】：R114

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1686132