發(fā)布時(shí)間：2018-03-06 12:35

  本文選題：TCDD　切入點(diǎn)：神經(jīng)毒性　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:本研究旨在探討環(huán)境中廣泛存在的內(nèi)分泌干擾物2,3,7,8-四氯二苯并-對(duì)-二VA英(TCDD)對(duì)人星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞線粒體的影響,重點(diǎn)關(guān)注TCDD對(duì)兩種細(xì)胞的線粒體形態(tài)、細(xì)胞內(nèi)ATP含量、線粒體相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響,研究TCDD對(duì)人神經(jīng)細(xì)胞線粒體的損傷作用,以探索TCDD對(duì)人神經(jīng)系統(tǒng)的毒性作用機(jī)制。方法:1.采用TCDD對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞進(jìn)行24h染毒處理。用MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)0-1000nM的TCDD染毒處理對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞活性的影響。2.采用透射電鏡觀察0-100nM的TCDD染毒處理24h對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響。3.檢測(cè)0-100nM的TCDD染毒處理24h對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)ATP含量的影響。4.采用PCR Array技術(shù)檢測(cè)0-50nM的TCDD染毒處理24h后,星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞線粒體相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平。5.采用RT-PCR方法檢測(cè)0-100nM的TCDD染毒處理24h后,星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞TSPO、SH3GLB1、TOMM22、TOMM40L、SLC25A10、SLC25A27、MFN1和MFN2基因mRNA的表達(dá)水平。6.采用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)0-100nM的TCDD染毒處理24h后,星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞PBR和MFN2的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.MTS檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)0-1000nM TCDD染毒處理24h對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞和SHSY5Y細(xì)胞活性沒(méi)有明顯抑制作用。2.0-100nM的TCDD染毒處理24h后用透射電鏡觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞和SHSY5Y細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化,發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,兩種細(xì)胞線粒體嵴數(shù)目減少,線粒體出現(xiàn)腫脹和空泡化改變。表明TCDD可影響星形膠質(zhì)細(xì)胞和SHSY5Y細(xì)胞的線粒體正常形態(tài)。3.0-100nM TCDD染毒處理24h后檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)ATP含量發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,TCDD染毒處理使星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ATP含量有上升趨勢(shì),100nM TCDD染毒處理組ATP含量升高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在SH-SY5Y細(xì)胞中,TCDD染毒處理使細(xì)胞內(nèi)ATP含量呈先升高后降低趨勢(shì),100nM TCDD染毒處理使細(xì)胞內(nèi)ATP含量下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.PCR Array檢測(cè)線粒體相關(guān)基因的mRNA表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞中1nM TCDD染毒處理組有12個(gè)基因mRNA表達(dá)水平降低;50nM TCDD染毒處理組有11個(gè)基因mRNA表達(dá)水平降低。SH-SY5Y細(xì)胞中1nM TCDD染毒處理組有12個(gè)基因mRNA表達(dá)水平降低;50n M TCDD染毒處理組有2個(gè)基因mRNA表達(dá)水平降低。5.本次研究選擇8個(gè)基因作為目的基因,采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)目的基因mRNA表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,星形膠質(zhì)細(xì)胞中,100nM TCDD染毒處理組TSPO基因的mRNA表達(dá)水平升高(P0.05)。50nM和100nM TCDD染毒處理組SH3GLB1基因mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組TOMM22基因mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。1nM、10nM、100nM TCDD染毒處理組TOMM40L基因的mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。1nM、10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組SLC25A10基因的mRNA表達(dá)水平均有所下降(P0.05)。50nM和100nM TCDD染毒處理組SLC25A27基因的mRNA表達(dá)水平升高(P0.05)。10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組MFN1基因mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。1nM、10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組MFN2基因的mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。與對(duì)照組相比,在SH-SY5Y細(xì)胞中,1nM、10nM、50nM和100nM TCDD染毒處理組TSPO的mRNA表達(dá)水平升高(P0.05)。1nM、50nM和100nM TCDD染毒處理組SH3GLB1基因mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。1nM和10nM TCDD染毒處理組TOMM22基因mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。10nM和100nM TCDD染毒處理組SH-SY5Y細(xì)胞TOMM40L的mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。50nM和100nM TCDD染毒處理組SLC25A10的mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。100nM TCDD染毒處理組SLC25A27的mRNA表達(dá)水平升高(P0.05)。10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組MFN1基因m RNA表達(dá)水平下降(P0.05)。10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組MFN2基因mRNA表達(dá)水平下降(P0.05)。6.Western Blot檢測(cè)PBR和MFN2的蛋白表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,在星形膠質(zhì)細(xì)胞中,1nM TCDD染毒處理組PBR蛋白表達(dá)水平下降(P0.05),10nM和100nM TCDD染毒處理組PBR蛋白表達(dá)水平上升,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。10nM和100nM TCDD染毒處理組MFN2蛋白表達(dá)水平下降且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與對(duì)照組相比,在SH-SY5Y細(xì)胞中,1nM、10nM和100nM TCDD染毒處理組PBR蛋白表達(dá)水平均有下降趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1nM、10nM和100nM TCDD染毒處理組MFN2蛋白表達(dá)水平下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)TCDD染毒處理對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞的活性無(wú)抑制作用,但對(duì)兩種細(xì)胞的線粒體正常形態(tài)有影響。2.TCDD可以使星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ATP含量升高,通過(guò)增加細(xì)胞間信號(hào)分子ATP的釋放,調(diào)節(jié)自身和神經(jīng)元活動(dòng)。在SH-SY5Y細(xì)胞中,TCDD可以使細(xì)胞內(nèi)ATP含量降低,影響線粒體的正常氧化磷酸化過(guò)程。3.TCDD可以抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞中SH3GLB1、TOMM22、TOMM40L、SLC25A10、MFN1和MFN2基因mRNA的表達(dá),抑制MFN2蛋白的表達(dá),促進(jìn)TSPO和SLC25A27基因m RNA的表達(dá)以及星形膠質(zhì)細(xì)胞中PBR蛋白的表達(dá),表明TCDD對(duì)兩種神經(jīng)細(xì)胞具有損傷影響,可能激活了線粒體的自我保護(hù)機(jī)制,并且影響兩種細(xì)胞線粒體的形態(tài)、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和動(dòng)力學(xué)等過(guò)程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1574862