本文關(guān)鍵詞： 氯化三丁基錫 內(nèi)分泌干擾作用 圍產(chǎn)期 芳香酶 甲基化　出處：《山東大學》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景 有機錫化合物(Organotin compounds, OTs)廣泛用于船舶表面防生物附著涂料、殺蟲劑、防腐劑(木材、纖維及皮革)、工業(yè)殺菌劑、塑料制品穩(wěn)定劑等。由于應用廣泛、環(huán)境中殘存時間長,OTs已對全球環(huán)境(尤其是水體)造成了嚴重的污染。三丁基錫(Tributyltin, TBT)是OTs中最重要的一種,被認為是迄今為止由人為因素大量引入海水環(huán)境中最毒的化學品之一。它是一種確定的內(nèi)分泌干擾物(ED),已有研究顯示TBT對哺乳動物可產(chǎn)生免疫毒性、神經(jīng)毒性、生殖毒性等。但這些研究所采用的染毒劑量都較大,而許多研究表明ED的危害并不呈線性劑量-反應關(guān)系,低劑量時的危害有可能要高于其高劑量時的危害。我們課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)圍產(chǎn)期低劑量氯化三丁基錫(TBTCl)暴露可導致子鼠睪丸中雌激素水平紊亂,附睪中精子數(shù)量減少及精子活度降低,睪丸組織出現(xiàn)病理性變化,并伴隨著芳香酶含量的下降。目前又(?)TBTCl導致子代雄性小鼠發(fā)生以上變化的機制并不清楚,本研究在前期研究的基礎(chǔ)上以子代雄性小鼠為主要研究對象,并添加己烯雌酚(DES)組作為陽性對照,對TBTCl影響妊娠結(jié)果、子鼠性發(fā)育及身體發(fā)育和血清中激素水平及其機制在分子和基因水平上做初步的探索。為研究TBTCl對人類的內(nèi)分泌干擾作用及作用機制提供參考和借鑒。 研究目的： 探討圍產(chǎn)期低劑量TBTCl暴露對妊娠結(jié)果、子鼠發(fā)育和血清中激素水平的毒性作用,并且對其作用機制做初步的探索。 研究方法： 將受孕的KM小鼠隨機分為陰性對照組(玉米油)、10、100μg/kgTBTCl組和陽性對照組(5μg/kg DES),每組6只。母鼠妊娠第6天(GD6)起,經(jīng)口灌胃染毒,每天在同一時間染毒1次,染毒劑量為1ml/kg,直到哺乳期結(jié)束,即子鼠出生第21天(Postnatal day, PND21)。GD0、GD6、PND1和PND21時稱量母鼠體重,染毒后開始觀察并記錄母鼠的流產(chǎn)及死亡情況；母鼠生產(chǎn)后,觀察并記錄出生子鼠的數(shù)量及雌雄比例,觀察死亡情況并記錄每組子鼠在哺乳期死亡的數(shù)量。PNDO、1、2、3、4、6、7、14和21時稱量雄性子鼠體重,測量其肛門與生殖器之間的距離(AGD)。PND6時開始觀察長毛情況,PND7時開始觀察門牙萌生情況,PND12時開始觀察睜眼情況,PND13時開始觀察睪丸下降情況及PND28時開始觀察包皮分離情況并分別記錄其日齡。 PND22和100時每組隨機抽取10只雄性子鼠(陽性對照取8只),稱重后摘眼球取血,離心取血清并保存；分離睪丸、附睪、腦、肝臟、脾臟、腎臟和胸腺(PND100時還取腹側(cè)前列腺、精囊),并稱重；將睪丸立即放入液氮中速凍并置于-80℃保存。應用酶聯(lián)免疫吸附試驗方法測定PND22和PND100雄性子鼠血清中雌激素(E2)、睪酮(T)、游離睪酮(F-T)、促卵泡激素(FSH)和黃體生成素(LH)的濃度。采用Real-time PCR法檢測PND22子代小鼠睪丸組織中Cypllal、Cyp17a、 Hsd3b2、Hsdl7b3和CyP19五個基因mRNA相對表達量,并用亞硫酸鹽直接測序法(BSP)檢測調(diào)控芳香酶表達的cAMP反應元件結(jié)合蛋白、泛素/蛋白酶體亞基α2和雌激素受體β基因啟動子區(qū)域CpG島的甲基化情況。 研究結(jié)果 劑量組孕鼠的流產(chǎn)(死亡)率與陽性對照組相比顯著降低,與陰性對照組相比有增加的趨勢；100μg/kg TBTC1組母鼠在PND21時體重較對照組均顯著增加,PND1-21(?)PGD0-PND21母鼠體重增加量與對照組相比均顯著增加,GD6-PND21母鼠體重增加量較陰性對照組顯著升高；劑量組子鼠的數(shù)量較對照組有下降的趨勢；100μg/kg TBTCl組和陽性對照組幼鼠死亡數(shù)與陰性對照組相比均顯著增加,而陽性對照組和100ug/kg TBTCl組幼鼠死亡數(shù)相比沒有統(tǒng)計學意義。 劑量組睪丸下降時間與陽性對照組相比顯著提前,而與陰性對照組相比沒有差異,陽性對照組與陰性對照組相比顯著延遲。PNDO、1時100μg/kg TBTCl組的NAGD較陰性對照組顯著降低,體重顯著升高；PND3、6、14和21時TBTCl組NAGD與對照組相比有降低的趨勢。PND0、1、2、6、7和21時100μg/kg組體重與陰性對照組相比顯著增加,PND4-6、PNDO-7、PND14-21、PNDO-21的體重增加量與陰性對照組相比均顯著增加。PND22時100μg/kg組睪丸臟器系數(shù)較對照組均顯著降低；劑量組肝臟臟器系數(shù)與對照組相比均顯著降低,脾臟重量及臟器系數(shù)與對照組相比顯著增加,腎臟重量及臟器系數(shù)與陰性對照組相比顯著增加。PND100時TBTCl組睪丸重量與陰性對照組相比顯著升高,而與陽性對照組相比則顯著降低；100μg/kg組精囊臟器系數(shù)與陰性對照組相比顯著降低,肝臟臟器系數(shù)與陰性對照組相比顯著升高；胸腺臟器系數(shù)與陰性對照組相比顯著降低,與陽性對照組相比則顯著升高。 子代雄性小鼠血清中激素測量結(jié)果顯示,PND22時100μg/kg組的E2和FSH濃度與對照組相比均顯著降低；PND100時100μg/kg組血清中E2的水平與陰性對照組相比仍顯著降低,而與陽性對照組相比則沒有差異,陽性對照組血清中E2的水平與陰性對照組相比也顯著降低。 PND22子代雄性小鼠睪丸組織中類固醇激素合成途徑關(guān)鍵酶mRNA(?)目對定量結(jié)果顯示,10μg/kg組Cyp17a基因mRNA表達量與對照組相比均顯著升高,Hsd3b2基因mRNA表達量與陰性對照組相比顯著升高,而與陽性對照組相比則沒有統(tǒng)計學差異；100μg/kg組Hsd17b(?)基因和(?)Cyp19(?)基因mRNA表達量與陰性對照組相比顯著降低,劑量組Cyp19基因mRNA表達量有降低的趨勢,而與陽性對照組相比則沒有統(tǒng)計學差異；陽性對照組Hsd17b(?)基因和Cyp19(?)基因的mRNA表達量與陰性對照組相比有降低的趨勢,但是沒有統(tǒng)計學差異；Cypllal基因在各染毒組中mRNA表達量與對照組相比均無統(tǒng)計學差異。 PND22子代雄性小鼠睪丸組織中甲基化克隆測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有cAMP反應元件結(jié)合蛋白(CREB)啟動子區(qū)域基因序列發(fā)生甲基化改變,而泛素/蛋白酶體亞基α2和雌激素受體β基因啟動子區(qū)域序列未發(fā)現(xiàn)甲基化情況。 結(jié)論 圍產(chǎn)期低劑量TBTCl暴露導致母鼠流產(chǎn)增多、導致肥胖及食仔,導致雄性子鼠出現(xiàn)雌性化的趨勢,并影響子鼠生長和器官發(fā)育。TBTCl可通過影響CREB啟動子區(qū)域基因序列發(fā)生甲基化,類固醇激素合成途徑中關(guān)鍵酶mRNA的表達水平改變,而導致血清中激素水平紊亂。
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【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R114

【參考文獻】

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1 李淑玲;馬建章;包軍;;馬鹿的圈養(yǎng)種群糞樣中性激素水平與繁殖行為的關(guān)聯(lián)[J];動物學雜志;2008年04期

2 王慧;李霞;張育輝;;CYP19基因表達與芳香化酶活性調(diào)控因子的研究進展[J];中國組織化學與細胞化學雜志;2010年03期

3 湯寧,董力;環(huán)境內(nèi)分泌干擾物低劑量效應研究進展[J];國外醫(yī)學(衛(wèi)生學分冊);2002年02期

4 丘紅梅;劉桂華;于振花;張慧敏;申治國;黎雪慧;鄧利;;LC-ICP-MS聯(lián)用測定海產(chǎn)品中有機錫[J];實用預防醫(yī)學;2008年05期

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本文編號：1493741