本文關(guān)鍵詞： 食物過(guò)敏 卵清蛋白 宮內(nèi)致敏 表觀遺傳 DNA甲基化　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分 妊娠雌鼠卵清蛋白暴露對(duì)仔鼠免疫功能的影響【目的】了解雌鼠不同孕期卵清蛋白暴露對(duì)仔鼠免疫功能的影響�！痉椒ā糠謩e在雌鼠孕早期(EP)、孕中期(MP)與孕晚期(LP)腹腔注射卵清蛋白(Ovalbumin,OVA),檢測(cè)雌鼠不同孕期卵清蛋白暴露(OVA exposure during pregnancy,OEDP)對(duì)仔鼠免疫功能的影響。取5日齡小鼠脾臟淋巴細(xì)胞OVA體外培養(yǎng),ELISA檢測(cè)IFN-γ及IL-4表達(dá)以反映仔鼠對(duì)OVA致敏性及Th1、Th2因子在蛋白水平的表達(dá),CCK-8法檢測(cè)抗原特異性淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)反映淋巴細(xì)胞對(duì)OVA的致敏性,RT-q PCR檢測(cè)IFN-γ和IL-4的m RNA表達(dá)水平反映Th1、Th2因子在轉(zhuǎn)錄水平的變化。仔鼠6-8周齡時(shí)一次OVA暴露后ELISA檢測(cè)OVA特異性Ig E反映仔鼠成年后的OVA致敏性�！窘Y(jié)果】雌鼠孕早期(EP)、孕中期(MP)OVA暴露的5日齡仔鼠脾臟淋巴細(xì)胞抗原特異性淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、IFN-γ和IL-4的表達(dá)水平無(wú)明顯改變,至6-8周齡時(shí)仔鼠一次OVA暴露后OVA特異性Ig E亦無(wú)明顯上升。雌鼠孕晚期(LP)OVA暴露的5日齡仔鼠抗原特異性淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)增強(qiáng),IFN-γ蛋白表達(dá)及m RNA表達(dá)水平均下降,IL-4蛋白及m RNA表達(dá)水平升高;6-8周齡仔鼠一次OVA暴露后OVA特異性Ig E升高�！窘Y(jié)論】1.LP雌鼠OVA暴露的5日齡仔鼠再次OVA暴露后出現(xiàn)較強(qiáng)的免疫改變,如IFN-γ降低、IL-4升高、抗原特異性淋巴細(xì)胞反應(yīng)增高,提示仔鼠宮內(nèi)被OVA致敏,再次證實(shí)致仔鼠OVA宮內(nèi)致敏的敏感期為雌鼠孕晚期。2.LP雌鼠OVA暴露的仔鼠6-8周齡時(shí)一次OVA再暴露后OVA特異性Ig E升高,提示LP雌鼠OVA暴露致仔鼠OVA致敏性增高可延續(xù)至成年期;3.宮內(nèi)致敏可能是仔鼠發(fā)生過(guò)敏性疾病的始動(dòng)因素,致敏性可延續(xù)至成年期。第二部分 妊娠期雌鼠OVA暴露的成年仔鼠多次OVA再暴露的免疫反應(yīng)【目的】觀察雌鼠妊娠期OVA暴露的仔鼠6-8周齡時(shí)多次OVA再暴露后體內(nèi)出現(xiàn)的免疫反應(yīng)�！痉椒ā看剖驩EDP的仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露,觀察記錄小鼠癥狀變化并評(píng)分;ELISA法檢測(cè)血清OVA特異性Ig E;提取脾臟原代淋巴細(xì)胞體外OVA培養(yǎng)48h后ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清IFN-γ及IL-4表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟淋巴細(xì)胞功能變化�！窘Y(jié)果】1.不同孕期OEDP的仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后均出現(xiàn)不同程度的急性腹瀉,雌鼠孕早期(EP)、孕中期(MP)OVA暴露的仔鼠較晚出現(xiàn)腹瀉,癥狀較輕;雌鼠孕晚期(LP)OVA暴露的仔鼠6-8周齡時(shí)最早出現(xiàn)腹瀉,癥狀亦最重;2.所有OEDP仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后OVA特異性Ig E均升高,以LP雌鼠OVA暴露組仔鼠升高為著;3.所有OEDP仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清IFN-γ幾無(wú)改變、IL-4均升高、IFN-γ/IL-4均降低,以LP雌鼠OVA暴露組仔鼠升高為著,IFN-γ/IL-4明顯下降;4.脾臟淋巴細(xì)胞功能檢測(cè)顯示所有仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后CD4+/CD8+升高,以LP雌鼠OVA暴露仔鼠OVA再暴露后升高為著�！窘Y(jié)論】OEDP仔鼠多次OVA再暴露后出現(xiàn)不同程度的腹瀉,體內(nèi)出現(xiàn)不同程度免疫功能改變,包括OVA特異性Ig E升高、IFN-γ/IL-4下降,CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞升高,提示所有仔鼠均出現(xiàn)OVA過(guò)敏,以LP雌鼠OEDP仔鼠為著,再次證明雌鼠孕晚期是宮內(nèi)致敏的重要時(shí)機(jī),或?yàn)?窗口期‖。第三部分 宮內(nèi)OVA暴露仔鼠IFN-γ及IL-4基因甲基化水平【目的】觀察OEDP雌鼠的仔鼠6-8周齡時(shí)OVA多次再暴露的脾臟淋巴細(xì)胞IFN-γ及IL-4基因甲基化水平。【方法】提取OEDP雌鼠6-8周齡多次OVA再暴露仔鼠血清,ELISA法檢測(cè)血清總Ig E變化;仔鼠的脾臟淋巴細(xì)胞DNA,DNA經(jīng)重亞硫酸鹽修飾后進(jìn)行焦磷酸測(cè)序檢測(cè)相關(guān)基因位點(diǎn)甲基化改變,采用相關(guān)性分析分析5日齡仔鼠與6-8周齡仔鼠IFN-γ及IL-4基因甲基化改變以及與總Ig E表達(dá)、癥狀評(píng)分的關(guān)系�！窘Y(jié)果】所有6-8周齡仔鼠多次OVA再暴露后血清總Ig E升高,以l P3仔鼠總Ig E上升為著。OEPD雌鼠的仔鼠5日齡時(shí)淋巴細(xì)胞IFN-γ及IL-4基因特定位點(diǎn)均無(wú)改變,至仔鼠6-8周齡時(shí)OVA多次再暴露后淋巴細(xì)胞IFN-γ及IL-4基因特定位點(diǎn)發(fā)生甲基化改變,所有仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后出現(xiàn)IFN-γ啟動(dòng)子Cp G-205、Cp G-190高甲基化,IL-4啟動(dòng)子Cp G-408、Cp G-393低甲基化,以l P3組相關(guān)位點(diǎn)甲基化改變?yōu)橹�。相關(guān)性分析結(jié)果顯示OEDP雌鼠的仔鼠6-8周齡時(shí)多次OVA再暴露發(fā)生過(guò)敏癥狀嚴(yán)重程度與IFN-γ及IL-4基因特定位點(diǎn)甲基化改變呈顯著相關(guān)。5日齡仔鼠與6-8周齡仔鼠多次OVA再暴露淋巴細(xì)胞IFN-γ和IL-4啟動(dòng)子甲基化改變無(wú)相關(guān)性�！窘Y(jié)論】1.OEDP雌鼠的仔鼠5日齡時(shí)IFN-γ及IL-4啟動(dòng)子特定位點(diǎn)未發(fā)生甲基化改變,且與6-8周齡多次OVA再暴露后相關(guān)啟動(dòng)子特定位點(diǎn)甲基化狀態(tài)改變無(wú)關(guān);2.OEDP雌鼠的仔鼠6-8周齡時(shí)多次OVA再暴露淋巴細(xì)胞IFN-γ啟動(dòng)子Cp G-205、Cp G-190高甲基化,IL-4啟動(dòng)子Cp G-408、Cp G-393低甲基化,以LP仔鼠為著,證實(shí)表觀遺傳參與OVA過(guò)敏的發(fā)生過(guò)程;仔鼠發(fā)生OVA過(guò)敏癥狀的嚴(yán)重性與IFN-γ及IL-4啟動(dòng)子特定位點(diǎn)甲基化改變狀態(tài)有關(guān);3.關(guān)于IFN-γ及IL-4啟動(dòng)子位點(diǎn)及其甲基化與表達(dá)水平之間的關(guān)系尚需進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114

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