本文關(guān)鍵詞： 食物過敏 卵清蛋白 宮內(nèi)致敏 表觀遺傳 DNA甲基化　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分 妊娠雌鼠卵清蛋白暴露對仔鼠免疫功能的影響【目的】了解雌鼠不同孕期卵清蛋白暴露對仔鼠免疫功能的影響�！痉椒ā糠謩e在雌鼠孕早期(EP)、孕中期(MP)與孕晚期(LP)腹腔注射卵清蛋白(Ovalbumin,OVA),檢測雌鼠不同孕期卵清蛋白暴露(OVA exposure during pregnancy,OEDP)對仔鼠免疫功能的影響。取5日齡小鼠脾臟淋巴細胞OVA體外培養(yǎng),ELISA檢測IFN-γ及IL-4表達以反映仔鼠對OVA致敏性及Th1、Th2因子在蛋白水平的表達,CCK-8法檢測抗原特異性淋巴細胞增殖反應(yīng)反映淋巴細胞對OVA的致敏性,RT-q PCR檢測IFN-γ和IL-4的m RNA表達水平反映Th1、Th2因子在轉(zhuǎn)錄水平的變化。仔鼠6-8周齡時一次OVA暴露后ELISA檢測OVA特異性Ig E反映仔鼠成年后的OVA致敏性�！窘Y(jié)果】雌鼠孕早期(EP)、孕中期(MP)OVA暴露的5日齡仔鼠脾臟淋巴細胞抗原特異性淋巴細胞增殖反應(yīng)、IFN-γ和IL-4的表達水平無明顯改變,至6-8周齡時仔鼠一次OVA暴露后OVA特異性Ig E亦無明顯上升。雌鼠孕晚期(LP)OVA暴露的5日齡仔鼠抗原特異性淋巴細胞增殖反應(yīng)增強,IFN-γ蛋白表達及m RNA表達水平均下降,IL-4蛋白及m RNA表達水平升高;6-8周齡仔鼠一次OVA暴露后OVA特異性Ig E升高。【結(jié)論】1.LP雌鼠OVA暴露的5日齡仔鼠再次OVA暴露后出現(xiàn)較強的免疫改變,如IFN-γ降低、IL-4升高、抗原特異性淋巴細胞反應(yīng)增高,提示仔鼠宮內(nèi)被OVA致敏,再次證實致仔鼠OVA宮內(nèi)致敏的敏感期為雌鼠孕晚期。2.LP雌鼠OVA暴露的仔鼠6-8周齡時一次OVA再暴露后OVA特異性Ig E升高,提示LP雌鼠OVA暴露致仔鼠OVA致敏性增高可延續(xù)至成年期;3.宮內(nèi)致敏可能是仔鼠發(fā)生過敏性疾病的始動因素,致敏性可延續(xù)至成年期。第二部分 妊娠期雌鼠OVA暴露的成年仔鼠多次OVA再暴露的免疫反應(yīng)【目的】觀察雌鼠妊娠期OVA暴露的仔鼠6-8周齡時多次OVA再暴露后體內(nèi)出現(xiàn)的免疫反應(yīng)。【方法】雌鼠OEDP的仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露,觀察記錄小鼠癥狀變化并評分;ELISA法檢測血清OVA特異性Ig E;提取脾臟原代淋巴細胞體外OVA培養(yǎng)48h后ELISA法檢測培養(yǎng)上清IFN-γ及IL-4表達水平;流式細胞術(shù)檢測脾臟淋巴細胞功能變化�！窘Y(jié)果】1.不同孕期OEDP的仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后均出現(xiàn)不同程度的急性腹瀉,雌鼠孕早期(EP)、孕中期(MP)OVA暴露的仔鼠較晚出現(xiàn)腹瀉,癥狀較輕;雌鼠孕晚期(LP)OVA暴露的仔鼠6-8周齡時最早出現(xiàn)腹瀉,癥狀亦最重;2.所有OEDP仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后OVA特異性Ig E均升高,以LP雌鼠OVA暴露組仔鼠升高為著;3.所有OEDP仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后脾臟淋巴細胞培養(yǎng)上清IFN-γ幾無改變、IL-4均升高、IFN-γ/IL-4均降低,以LP雌鼠OVA暴露組仔鼠升高為著,IFN-γ/IL-4明顯下降;4.脾臟淋巴細胞功能檢測顯示所有仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后CD4+/CD8+升高,以LP雌鼠OVA暴露仔鼠OVA再暴露后升高為著�！窘Y(jié)論】OEDP仔鼠多次OVA再暴露后出現(xiàn)不同程度的腹瀉,體內(nèi)出現(xiàn)不同程度免疫功能改變,包括OVA特異性Ig E升高、IFN-γ/IL-4下降,CD4+/CD8+T淋巴細胞升高,提示所有仔鼠均出現(xiàn)OVA過敏,以LP雌鼠OEDP仔鼠為著,再次證明雌鼠孕晚期是宮內(nèi)致敏的重要時機,或為 窗口期‖。第三部分 宮內(nèi)OVA暴露仔鼠IFN-γ及IL-4基因甲基化水平【目的】觀察OEDP雌鼠的仔鼠6-8周齡時OVA多次再暴露的脾臟淋巴細胞IFN-γ及IL-4基因甲基化水平�！痉椒ā刻崛EDP雌鼠6-8周齡多次OVA再暴露仔鼠血清,ELISA法檢測血清總Ig E變化;仔鼠的脾臟淋巴細胞DNA,DNA經(jīng)重亞硫酸鹽修飾后進行焦磷酸測序檢測相關(guān)基因位點甲基化改變,采用相關(guān)性分析分析5日齡仔鼠與6-8周齡仔鼠IFN-γ及IL-4基因甲基化改變以及與總Ig E表達、癥狀評分的關(guān)系�！窘Y(jié)果】所有6-8周齡仔鼠多次OVA再暴露后血清總Ig E升高,以l P3仔鼠總Ig E上升為著。OEPD雌鼠的仔鼠5日齡時淋巴細胞IFN-γ及IL-4基因特定位點均無改變,至仔鼠6-8周齡時OVA多次再暴露后淋巴細胞IFN-γ及IL-4基因特定位點發(fā)生甲基化改變,所有仔鼠6-8周齡多次OVA再暴露后出現(xiàn)IFN-γ啟動子Cp G-205、Cp G-190高甲基化,IL-4啟動子Cp G-408、Cp G-393低甲基化,以l P3組相關(guān)位點甲基化改變?yōu)橹�。相關(guān)性分析結(jié)果顯示OEDP雌鼠的仔鼠6-8周齡時多次OVA再暴露發(fā)生過敏癥狀嚴重程度與IFN-γ及IL-4基因特定位點甲基化改變呈顯著相關(guān)。5日齡仔鼠與6-8周齡仔鼠多次OVA再暴露淋巴細胞IFN-γ和IL-4啟動子甲基化改變無相關(guān)性。【結(jié)論】1.OEDP雌鼠的仔鼠5日齡時IFN-γ及IL-4啟動子特定位點未發(fā)生甲基化改變,且與6-8周齡多次OVA再暴露后相關(guān)啟動子特定位點甲基化狀態(tài)改變無關(guān);2.OEDP雌鼠的仔鼠6-8周齡時多次OVA再暴露淋巴細胞IFN-γ啟動子Cp G-205、Cp G-190高甲基化,IL-4啟動子Cp G-408、Cp G-393低甲基化,以LP仔鼠為著,證實表觀遺傳參與OVA過敏的發(fā)生過程;仔鼠發(fā)生OVA過敏癥狀的嚴重性與IFN-γ及IL-4啟動子特定位點甲基化改變狀態(tài)有關(guān);3.關(guān)于IFN-γ及IL-4啟動子位點及其甲基化與表達水平之間的關(guān)系尚需進一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R114

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 羅素芬,黎海芪,鄭惠連;妊娠、哺乳期缺銅對仔鼠發(fā)育的影響[J];中華兒童保健;1993年01期

2 孫秀發(fā);侯曉暉;;硒對高碘仔鼠腦髓化影響的分子機制[J];營養(yǎng)健康新觀察;2004年04期

3 張清林,王愛平,黃春倩,王治喬;膦氧氮丙啶對昆明種仔鼠生長發(fā)育的影響[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;1999年03期

4 李英華,朱惠民,董少霞,張建軍;高碘對仔鼠腦發(fā)育和智力的影響[J];中國地方病防治雜志;2000年01期

5 龍建綱,張燕琴,沈慧,秦海宏,王福O，

本文編號：1486478