本文關(guān)鍵詞： 亞砷酸鈉 HaCaT細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 基因表達(dá)　出處：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:探討砷對皮膚細(xì)胞凋亡及相關(guān)角化基因表達(dá)情況的影響,為進(jìn)一步闡述砷致皮膚早期損傷的研究提供依據(jù)。方法:1、采用MTT還原法檢測細(xì)胞生長情況;確定LC50及染毒濃度,染毒濃度分別為LC50的1/50、1/20、1/10。2、流式細(xì)胞儀檢測Ha Ca T細(xì)胞的凋亡情況。3、將30只健康成年清潔級雄性家兔隨機(jī)分為5組,每組6只,分別為對照組(去離子水)及亞砷酸鈉染毒組。采用自由飲水方式進(jìn)行染毒,連續(xù)染毒12周。染毒劑量分別為LD50的1/100、1/50、1/20、1/10。4、染毒12周結(jié)束后,取家兔同一部位的皮膚進(jìn)行病理學(xué)檢查。5、通過實時熒光定量(Real-Time Quantitative PCR)檢測HaCaT細(xì)胞中和家兔皮膚組織中Nrf2、K1和K10mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果:1、亞砷酸鈉染毒Ha Ca T細(xì)胞24h的LC50為65.00μmol/L,染毒濃度即LC50的1/50為1.30μmol/L,LC50的1/20為3.25μmol/L,LC50的1/10為6.50μmol/L,對照組為0μmol/L。2、1.30μmol/L亞砷酸鈉染毒48h能顯著促進(jìn)HaCaT細(xì)胞增殖;3.25μmol/L亞砷酸鈉染毒96h、6.25μmol/L亞砷酸鈉染毒72h顯著抑制HaCaT細(xì)胞增殖,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3、1.30μmol/L亞砷酸鈉能抑制HaCaT細(xì)胞凋亡,24h時凋亡率最低且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);3.25μmol/L、6.25μmol/L亞砷酸鈉染毒48h、72h可使HaCaT細(xì)胞凋亡率逐漸升高且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、1.30μmol/L亞砷酸鈉染毒HaCaT細(xì)胞24h能促進(jìn)Nrf2mRNA、K1mRNA和K10mRNA的表達(dá)上調(diào),6.25μmol/L的亞砷酸鈉染毒72h可使HaCaT細(xì)胞中Nrf2mRNA、K1mRNA、K10 mRNA表達(dá)顯著下調(diào)且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5、亞砷酸鈉染毒家兔的LD50為13mg/kg,染毒劑量即LD50的1/100為0.13 mg/kg、LD50的1/50為0.26mg/kg、LD50的1/20為0.65mg/kg、LD50的1/10為1.30mg/kg,對照組0 mg/kg。6、與對照組相比,染毒組家兔體重基本呈現(xiàn)增加趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。7、電鏡結(jié)果顯示染毒組家兔皮膚角質(zhì)層有不同程度的改變,1.30mg/kg亞砷酸鈉染毒家兔皮膚出現(xiàn)角化層。8、0.13 mg/kg、0.26 mg/kg亞砷酸鈉染毒家兔能使皮膚組織中Nrf2、K1和K10mRNA的表達(dá)上調(diào);0.65mg/kg、1.30 mg/kg能使皮膚組織中Nrf2mRNA、K1mRNA和K10mRNA的表達(dá)下調(diào),其中0.13mg/kg、1.30mg/kg染毒組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、亞砷酸鈉對Ha Ca T細(xì)胞具有雙向調(diào)節(jié)作用,1.30μmol/L亞砷酸鈉能促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞的凋亡,6.50μmol/L亞砷酸鈉染毒72h能抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。2、亞砷酸鈉染毒能使Ha Ca T細(xì)胞中Nrf2、K1、K10 mRNA表達(dá)發(fā)生改變,1.30μmol/L亞砷酸鈉染毒能使基因表達(dá)上調(diào),隨著染毒時間延長、染毒濃度增加能使基因表達(dá)逐漸下調(diào)。3、亞砷酸鈉對HaCaT細(xì)胞的毒性作用受時間和濃度交互作用的影響,可推測砷暴露隨著染毒時間的延長,染毒濃度的加大對皮膚細(xì)胞的損害越嚴(yán)重。4、長期水砷暴露會引起皮膚的損傷,造成皮膚病理學(xué)的改變,1.30mg/kg亞砷酸鈉染毒3個月會促使家兔皮膚角化。5、長期水砷暴露會引起皮膚組織中Nrf2、K1和K10mRNA的改變,0.13mg/kg能使基因表達(dá)上調(diào),1.30mg/kg能使基因表達(dá)下調(diào)。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of arsenic on the apoptosis of skin cells and the expression of related keratinizing genes, and to provide a basis for the further study on the early injury of skin induced by arsenic. Methods: the growth of cells was detected by MTT reduction method, and the concentration of LC50 and the concentration of LC50 were determined. Apoptosis of Ha Ca T cells was detected by flow cytometry. 30 healthy adult clean grade male rabbits were randomly divided into 5 groups, 6 in each group. The control group (deionized water) and sodium arsenite group were treated with free drinking water for 12 weeks. The dose of LD50 was 1 / 100 / 1 / 50 / 20 / 10. 4 respectively. After 12 weeks of exposure, The expression levels of Nrf2OK1 and K10 mRNA in HaCaT cells and rabbit skin tissues were detected by real-time real-time Quantitative PCR. The results showed that the LC50 of HaCaT cells exposed to sodium arsenite for 24 hours was: 1: 1. 65.00 渭 mol / L, 1/50 渭 mol / L of LC50 was 1.30 渭 mol / L, 1/20 of LC50 was 3.25 渭 mol / L, 1/10 of control was 6.50 渭 mol / L, and that of control group was 0 渭 mol / L 路L ~ (-2) mol/L sodium arsenite for 48 h significantly promoted the proliferation of HaCaT cells exposed to 3.25 渭 mol/L sodium arsenite for 96 h, 6.25 渭 mol/L sodium arsenite significantly inhibited the proliferation of HaCaT cells for 72 h. The difference was statistically significant. Sodium arsenite (1.30 渭 mol/L) could inhibit the apoptosis of HaCaT cells at 24 h, and the apoptosis rate was the lowest at 24 h after exposure to sodium arsenite (6.25 渭 mol / L) for 48 h or 72 h. The apoptosis rate of HaCaT cells was increased gradually and the difference was statistically significant (P 0.05N 路4N 1.30 渭 mol/L). Sodium acid exposure to HaCaT cells for 24 hours increased the expression of Nrf2mRNA-K1mRNA and K10mRNA, up-regulated the expression of Nrf2mRNAK1mRNAK1mRNAK10 mRNA in HaCaT cells for 72 h after exposure to 6.25 渭 mol/L, and significantly decreased the expression of Nrf2mRNAK1mRNA-K10 mRNA in HaCaT cells. The LD50 of rabbits exposed to sodium arsenite was 13mg / kg, and the dose of LD50 was LD50. The 1/100 is 0.13 mg / kg LD50 1/50 is 0.26 mg / kg LD50 1/20 is 0.65 mg / kg LD50 1/10 is 1.30 mg / kg / kg, and the control group is 0 mg / kg 路6, compared with the control group, The weight of rabbits in the exposed group showed an increasing trend, However, there was no significant difference (P 0.05). Electron microscopic results showed that the keratinocytes of the skin of rabbits exposed to 1.30mg / kg sodium arsenite had different degrees of change. The keratosis layer appeared in the skin of rabbits exposed to sodium arsenite at 0.13 mg / kg for 0.26 mg/kg, and Nrf2K1 and Nrf2K1 and Nrf2K1 in the skin of rabbits exposed to sodium arsenite for 0.26 mg/kg could be induced by sodium arsenite. The expression of K10 mRNA was up-regulated by 0.65 mg 路kg ~ (-1) 路kg ~ (-1) mg/kg and the expression of Nrf2mRNA-K1 mRNA and K10 mRNA was down-regulated in skin tissue. There was a significant difference between 0.13 mg / kg and 1.30 mg / kg group compared with the control group (P 0.05). Conclusion: sodium arsenite has a bidirectional regulatory effect on Ha Ca T cells, and sodium arsenite of 1.30 渭 mol/L can promote the proliferation of Ha-Ca T cells. Inhibition of apoptosis by sodium arsenite (6.50 渭 mol/L) for 72 h inhibited cell proliferation and promoted apoptosis. Sodium arsenite treatment could change the expression of Nrf2K1K1 K10 mRNA in Ha Ca T cells, and 1. 30 渭 mol/L sodium arsenite could up-regulate gene expression. With the increase of exposure time, gene expression was down-regulated gradually. The toxicity of sodium arsenite to HaCaT cells was affected by time and concentration interaction. It can be inferred that arsenic exposure increases with exposure time. The more serious the damage to skin cells caused by the increase of exposure concentration, the longer water arsenic exposure will cause skin damage. Skin pathological changes caused by exposure to 1.30 mg / kg sodium arsenite for 3 months could induce keratosis in the skin of rabbits. Prolonged exposure to arsenic could induce changes of Nrf2K1 and K10 mRNA in skin tissue. 0.13 mg / kg could up-regulate gene expression and 1.30 mg / kg could down-regulate gene expression.
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄧芙蓉,李艷宏,張華明,郭新彪;亞砷酸鈉和氧苯胂對人皮膚成纖維細(xì)胞縫隙連接通訊的動態(tài)影響及作用特征[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2002年05期

2 姚華,王國荃,朱濱,孫悅,景豐香,趙建龍;亞砷酸鈉對生長發(fā)育影響的分子遺傳機(jī)制研究[J];中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2004年01期

3 申旭波;周遠(yuǎn)忠;姜慧;周希雷;賈菲菲;熊云剛;鄒焰;;亞砷酸鈉對人肝細(xì)胞增殖的影響[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2009年01期

4 呂慧;史艷芬;仲苓芝;李玉林;李榮貴;;亞砷酸鈉對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖的影響及其機(jī)制[J];江蘇醫(yī)藥;2010年22期

5 李晶;鄢春亭;;亞砷酸鈉抑制血小板源性生長因子受體β介導(dǎo)的細(xì)胞遷移及其機(jī)制[J];中國老年學(xué)雜志;2012年18期

6 陳保林;孫高峰;謝惠芳;;亞砷酸鈉對人胚肺成纖維細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞周期的影響[J];環(huán)境與健康雜志;2013年07期

7 崔云龍;用不加亞砷酸鈉的α-硫代巴比妥酸法測定唾液酸[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊;1985年01期

8 沈美善;吳國用;;亞硒酸鈉對亞砷酸鈉誘導(dǎo)人外周血中淋巴細(xì)胞姐妹染色單體互換頻率的影響[J];延邊醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1988年02期

9 周德鵬;何憶明;;滅茅藥對牛中毒的探討[J];海南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);1989年03期

10 翟明芬,王茜麗;一起亞砷酸鈉急性中毒的調(diào)查報告[J];職業(yè)與健康;1996年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 趙樸;潘光強(qiáng);蔡文俠;薛阿利;;亞砷酸鈉治療慢性粒細(xì)胞白血病療效分析[A];全國中西醫(yī)結(jié)合血液病學(xué)術(shù)研討會、浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會血液病專業(yè)委員會成立大會首次學(xué)術(shù)年會暨繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

2 楊萍;李愛萍;劉起展;周建偉;;亞砷酸鈉所致興奮性效應(yīng)與脂質(zhì)過氧化的關(guān)系[A];第四屆全國環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)研究生學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

3 章征保;李道傳;牛林梅;陳雯;;組蛋白修飾在亞砷酸鈉抑制細(xì)胞雙鏈斷裂修復(fù)中的作用[A];中國毒理學(xué)會第六屆全國毒理學(xué)大會論文摘要[C];2013年

4 吳順華;姚芹;鄭玉建;湯紅英;;亞砷酸鈉對小鼠谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活力及其基因表達(dá)的影響[A];中國毒理學(xué)會第五次全國學(xué)術(shù)大會論文集[C];2009年

5 高怡;裴秋玲;李國星;韓光;田鳳潔;秦秀軍;;不同劑量亞砷酸鈉染毒大鼠多藥耐藥相關(guān)蛋白2表達(dá)水平的變化[A];中國毒理學(xué)會第四屆全國學(xué)術(shù)會議論文（摘要）集[C];2005年

6 馬智峰;張晶;李云云;李勇;徐文超;田鳳潔;高怡;秦秀軍;聞建華;裴秋玲;;亞砷酸鈉對大鼠紅細(xì)胞影響及N-乙酰-L-半胱氨酸干預(yù)研究[A];低碳生活與健康損害論壇——中國環(huán)境誘變劑學(xué)會風(fēng)險評價專業(yè)委員會全國第十三屆學(xué)術(shù)會議暨第四屆第5次委員會會議論文集[C];2011年

7 徐媛;龐英;劉起展;;HIF-2α在低水平亞砷酸鈉所致人支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用[A];中國毒理學(xué)會第三屆中青年學(xué)者科技論壇暨2011年全國前列腺藥理毒理學(xué)研討會論文集[C];2011年

8 崔建華;趙曉靜;;經(jīng)輸液膠管注入亞砷酸鈉致死一例報告[A];第四次全國法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文集（上卷）[C];1991年

9 凌敏;劉起展;;miR-21在低水平亞砷酸鈉所致人胚肺成纖維細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用[A];中國毒理學(xué)會第三屆中青年學(xué)者科技論壇暨2011年全國前列腺藥理毒理學(xué)研討會論文集[C];2011年

10 許熙國;王大朋;安艷;;不同劑量亞砷酸鈉暴露不同時間對HaCaT細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響[A];中國毒理學(xué)會第六屆全國毒理學(xué)大會論文摘要[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 ;煙草禁用哪些農(nóng)藥[N];云南科技報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 吳麗華;亞砷酸鈉誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的分子機(jī)制研究[D];山西大學(xué);2011年

2 富景奇;亞砷酸鈉對胰島β細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

3 史艷芬;亞砷酸鈉對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的促凋亡作用及分子機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2011年

4 孫鮮策;亞砷酸鈉對人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞氧化應(yīng)激、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡作用的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

5 黃世文;亞砷酸鈉誘引角質(zhì)形成細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化及其機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

6 董雪;亞砷酸鈉血管效應(yīng)及誘導(dǎo)EMT作用研究[D];吉林大學(xué);2011年

7 袁曉華;砷對卵巢顆粒細(xì)胞孕酮分泌的影響及分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

8 李新娜;亞砷酸鈉及保護(hù)劑對血管內(nèi)皮細(xì)胞效應(yīng)中microRNAs的作用研究[D];吉林大學(xué);2013年

9 王毅;香煙煙氣溶液和砷聯(lián)合作用對氧化應(yīng)激和凋亡的影響及其機(jī)制的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

10 吳煒;p38通過磷酸化HPC2調(diào)控次砷酸鈉誘導(dǎo)的U2OS細(xì)胞G2/M期阻滯[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 呂慧;亞砷酸鈉對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖的影響及其機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2010年

2 馬園;低劑量亞砷酸鈉致HaCaT細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中Involucrin表達(dá)變化及其機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

3 楊旭;低劑量亞砷酸鈉致HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中Keap1/Nrf2-ARE信號通路的作用[D];蘇州大學(xué);2015年

4 鄧紅惠;亞砷酸鈉對體外培養(yǎng)的豬卵巢顆粒細(xì)胞增殖活性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

5 劉媛;砷對皮膚細(xì)胞凋亡及角化相關(guān)基因表達(dá)的影響與早期皮膚損傷研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

6 姚芹;亞砷酸鈉對小鼠體內(nèi)谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活力及其基因表達(dá)的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2009年

7 吳順華;亞砷酸鈉對皮膚細(xì)胞損傷的細(xì)胞生物學(xué)探討[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2001年

8 馬艷;亞砷酸鈉對體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞金屬硫蛋白含量及其基因表達(dá)的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2008年

9 李萍;硒對砷中毒保護(hù)作用的實驗研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

10 劉星;氡與亞砷酸鈉對HBE細(xì)胞聯(lián)合毒性作用研究[D];蘇州大學(xué);2013年

，

本文編號：1486362