發(fā)布時(shí)間：2018-01-13 15:14

  本文關(guān)鍵詞：多重寡核苷酸連接-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-通用基因芯片檢測(cè)食源性致病菌方法的建立　出處：《衛(wèi)生研究》2017年02期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的建立一種基于多重寡核苷酸連接-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(MOL-PCR)的食源性致病菌通用基因芯片檢測(cè)方法。方法針對(duì)細(xì)菌性食物中毒8種常見致病菌,在各自特異性引物之間設(shè)計(jì)一對(duì)首尾相接的上、下游檢測(cè)探針。采用多重PCR富集靶序列并作為模板,通過多重連接酶檢測(cè)反應(yīng)及通用不對(duì)稱PCR標(biāo)記,獲得大量含標(biāo)簽互補(bǔ)序列(Anti-tag)的熒光標(biāo)記單鏈產(chǎn)物,可與芯片上固定的標(biāo)簽序列(Tag)進(jìn)行雜交檢測(cè)。結(jié)果該方法能特異性地鑒別單一和多重目標(biāo)菌感染。純培養(yǎng)物的檢測(cè)靈敏度為(1.1~8.5)×10~2CFU/mL。對(duì)96份食物中毒和臨床腹瀉樣本檢測(cè),芯片結(jié)果與常規(guī)分離與生化鑒定及熒光定量PCR結(jié)果一致。結(jié)論該方法為快速、準(zhǔn)確、靈敏、高通量地鑒定食源性疾病的病原菌提供了一種新型檢測(cè)平臺(tái)。
[Abstract]:Objective to establish a general gene chip method for the detection of foodborne pathogenic bacteria based on multiplex oligonucleotide ligation-polymerase chain reaction (MOL-PCR). A pair of upstream and downstream detection probes were designed between their specific primers. Multiple PCR was used to enrich the target sequence and serve as template. The reaction was detected by multiple ligases and general asymmetric PCR markers were detected. A large number of fluorescent labeled single-stranded products containing complementary tag sequence Anti-tagged were obtained. The method can be used to detect single and multiple target bacteria infection by hybridization with tag sequence fixed on chip. The detection sensitivity of pure culture is 1.1% and 8.5%. 96 samples of food poisoning and clinical diarrhea were detected. The results of microarray were consistent with those of routine isolation, biochemical identification and fluorescence quantitative PCR. Conclusion this method provides a new detection platform for rapid, accurate, sensitive and high-throughput identification of pathogenic bacteria from foodborne diseases.
【作者單位】： 西安市疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：陜西省自然科學(xué)基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015JM3112) 西安市社會(huì)發(fā)展引導(dǎo)計(jì)劃-醫(yī)學(xué)研究項(xiàng)目[No.SF1516(2)]
【分類號(hào)】：R155.3
【正文快照】： 食源性疾病已成為當(dāng)前世界范圍內(nèi)一個(gè)主要公共衛(wèi)生問題[1],在我國細(xì)菌性食物中毒最為普遍且影響最嚴(yán)重[2]。由于能夠引起細(xì)菌性食物中毒的致病菌種類很多,并且不同致病菌常引發(fā)類似的臨床癥狀,因此,建立一種快速、準(zhǔn)確、高通量的食源性致病菌檢測(cè)方法是有效控制和預(yù)防細(xì)菌性食

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