本文關(guān)鍵詞：低濃度鎘影響血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合成的小分子代謝輪廓研究　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的了解低濃度鎘(Cadmium, Cd)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮(Nitric Oxide,NO)生物合成的影響及內(nèi)源性小分子代謝物的改變,從代謝產(chǎn)物和代謝通路探討低濃度Cd影響血管內(nèi)皮細(xì)胞NO生物合成的相關(guān)機(jī)制,進(jìn)而探討影響內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)的相關(guān)機(jī)制。方法1、以含0、1、5、10 μmol/L CdCl2為終濃度的培養(yǎng)基對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分別染毒12、24、48 h,其中以0 μmol/L CdCl2組為對(duì)照組,其他為實(shí)驗(yàn)組。用CCK-8法測(cè)定人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的相對(duì)存活率；倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的生長形態(tài)；石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Cd含量；比色法測(cè)定培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶活力、丙二醛含量以及細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶活力；酶聯(lián)免疫法測(cè)定培養(yǎng)液中細(xì)胞間粘附因子-1；硝酸還原酶法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中NO的含量。2、以含0、10 μmol/L CdCl2為終濃度的培養(yǎng)基對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞染毒48 h,其中以0 μmol/L CdCl2組為對(duì)照組,10 μmol/L CdCl2組為實(shí)驗(yàn)組。用氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜(GC-TOF-MS)對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)小分子代謝物進(jìn)行分析,得到兩組總離子流色譜圖,結(jié)合主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判別分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)進(jìn)行多元變量統(tǒng)計(jì)分析,尋找兩組間差異代謝物,并結(jié)合生物信息學(xué)尋找代謝通路。并用透射電子顯微鏡觀察與代謝通路有關(guān)的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果1、與對(duì)照組相比,1、5、10μmol/L CdCl2對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的相對(duì)存活率無明顯影響,對(duì)細(xì)胞的生長結(jié)構(gòu)無明顯變化；隨著染毒劑量與時(shí)間的增加,細(xì)胞內(nèi)Cd含量增加；并沒有使細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶活力增加。丙二醛含量有增加趨勢(shì),但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；超氧化物歧化酶活力有下降趨勢(shì),但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。染毒48 h后,5、10μmol/L CdCl2組與對(duì)照組相比,細(xì)胞培養(yǎng)液中細(xì)胞間粘附因子-1的含量增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。不同濃度Cd染毒人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞12、24、48 h后,細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量隨Cd染毒劑量的增加而減少,與對(duì)照組相比各個(gè)時(shí)點(diǎn)1μmol/L CdCl2組的NO含量減少無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而5、10 μmol/L CdCl2組的NO含量減少有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2、GC-TOF-MS共檢測(cè)得到色譜峰433個(gè),共發(fā)現(xiàn)57種差異代謝物。與0 μmol/L CdCl2組相比,10 μmol/L CdCl2組細(xì)胞內(nèi)L-蘋果酸、延胡索酸、3-磷酸甘油酸等15種代謝物含量相對(duì)較低;鳥氨酸、甘氨酸、尿嘧啶等42種代謝物含量相對(duì)較高。差異代謝物與天冬氨酸代謝、三羧酸循環(huán)和甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝的代謝通路顯著相關(guān)(P0.05)。與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組與天冬氨酸代謝、三羧酸循環(huán)和甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝的代謝通路相關(guān)的線粒體、細(xì)胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的超微結(jié)構(gòu)除了有小部分線粒體出現(xiàn)空泡化外,整體上未發(fā)生明顯變化。結(jié)論1、即使低于10 μmol/L的Cd可使內(nèi)皮細(xì)胞NO合成顯著減少,這種抑制NO合成的效應(yīng)伴隨著促炎癥反應(yīng)增加但氧化應(yīng)激正常的狀態(tài)。2、低濃度Cd在未顯著損害內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞器狀態(tài)下影響內(nèi)皮細(xì)胞NO合成穩(wěn)態(tài),其機(jī)制與細(xì)胞的能量代謝、氨基酸代謝、脂質(zhì)和脂肪酸代謝紊亂有關(guān)。3、低濃度Cd可能通過抑制內(nèi)皮細(xì)胞的三羧酸循環(huán)和磷酸戊糖途徑,使還原型輔酶Ⅱ合成減少,進(jìn)而使NO合成減少。
[Abstract]:Objective To investigate the effects of low concentration of cadmium ( Cd ) on the biosynthesis of nitric oxide ( NO ) in human umbilical vein endothelial cells and the changes of endogenous small molecule metabolites . Compared with the control group , there were no significant changes in the NO content in cultured endothelial cells ( P0.05 ) . Compared with the control group , there were no significant changes in NO content in the cells of CdCl2 group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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1 林哲絢;羅紅軍;李慧;張?jiān)?羅文鴻;;幾種重金屬化合物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的毒性研究[J];廣東醫(yī)學(xué);2012年05期

2 李毅;秦儉;;血管內(nèi)皮功能的研究進(jìn)展[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年13期

3 陳玨,金泰^，

本文編號(hào)：1377743