本文關(guān)鍵詞：3-甾酮-9α-羥基化酶基因在分枝桿菌中強(qiáng)化表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：9α-羥基雄烯二酮(9α-OH-AD)是制備倍他米松及地塞米松等甾體類藥物的重要中間產(chǎn)物之一,在工業(yè)應(yīng)用中,常使用谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇等植物甾醇作為底物,通過分枝桿菌等菌種生物轉(zhuǎn)化獲得9α-OHAD。在此過程中,3-甾酮-9α-羥基化酶(KSH)是生物轉(zhuǎn)化植物甾醇為9α-OH-AD的關(guān)鍵酶,該酶由3-甾酮-9α-羥基化酶(Ksh A)和3-甾酮-9α-羥基化酶還原酶(Ksh B)兩個(gè)亞基構(gòu)成。因此,提高3-甾酮-9α-羥基化酶的活性對促進(jìn)9α-OH-AD的合成具有極其重要的作用。為了獲得高效積累9α-OH-AD產(chǎn)物的重組菌株,根據(jù)NCBI提供的基因序列為主,相關(guān)設(shè)計(jì)引物軟件Prime 5和DNAMAN等輔助工具設(shè)計(jì)引物Ksh A和Ksh B,PCR擴(kuò)增,經(jīng)過EcoR I、Nde I和EcoR I、Hind III分別雙酶切Ksh A和Ksh B,同時(shí)與載體p NIT進(jìn)行連接,獲得了含有Ksh A基因和Ksh B基因的重組質(zhì)粒p NIT-Ksh A-Ksh B,最后再將構(gòu)建好的質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化入分枝桿菌中,根據(jù)最小抑菌濃度卡那霉素抗性平板上篩選得到1株陽性轉(zhuǎn)化子M-ks H。發(fā)酵催化積累9α-OH-AD的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)?shù)孜镏参镧薮纪读蠟?0 g/L時(shí),M-ks H積累9α-OH-AD產(chǎn)量相比較出發(fā)菌株提高了0.486 g/L,重組菌的轉(zhuǎn)化率提高了50.78%。研究結(jié)果可為提高甾體類藥物9-OH-AD生產(chǎn)效率提供一定的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 浙江工業(yè)大學(xué)發(fā)酵工程研究所;浙江新銀象生物工程有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 甾體藥物 -甾酮-α-羥基化酶 α-OH-AD 重組質(zhì)粒 植物甾醇 生物轉(zhuǎn)化
【分類號】：TQ464;R91
【正文快照】： 甾體類藥物具有重要的生理活性,臨床上應(yīng)用廣泛。以植物甾醇為原料、利用分枝桿菌等微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)甾體醫(yī)藥中間體9α-羥基雄甾烯酮,是當(dāng)下甾體醫(yī)藥工業(yè)體系的一條重要工藝路線。9-OH-AD化學(xué)結(jié)構(gòu)上9-羥基的存在,可借助常規(guī)甾體化學(xué)合成手段形成C9,11-雙鍵體系,從而很方便地在C

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 梁明祥,袁生,張湘寧,徐尚成;氰基吡啶羥基化轉(zhuǎn)化菌的篩選初報(bào)[J];南京師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2002年04期

2 ;用鈀／膦催化劑進(jìn)行的羥基化方法[J];石油煉制與化工;1994年04期

3 赫崇衡;苯酚的直接催化羥基化及其產(chǎn)物的氣相色譜分析[J];安徽師大學(xué)報(bào)(哲學(xué)社會(huì)科學(xué)版);1995年02期

4 王譯偉;胡啟山;李來才;王欣;田安民;;羥基化氧化鋅催化甲醇裂解反應(yīng)機(jī)理的理論研究[J];化學(xué)學(xué)報(bào);2007年18期

5 鄭朝暉,郭衛(wèi)玲,范金鋼;苯羥基化制苯酚的工業(yè)應(yīng)用前景[J];石油化工;2004年11期

6 任信榮,邵可聲,唐孝炎;高效液相色譜法測定水楊酸及其羥基化產(chǎn)物[J];色譜;2001年02期

7 ;乙炔羥基化合成丙烯酸[J];企業(yè)技術(shù)開發(fā);2002年01期

8 白樺;金棟;;苯直接羥基化制苯酚的技術(shù)新進(jìn)展[J];上�；�;2006年12期

9 崔小明;;苯直接羥基化制苯酚的技術(shù)進(jìn)展[J];杭州化工;2006年04期

10 黃淑惠;徐詩偉;法幼華;;用新月彎孢霉11β-羥基化16α-甲基化合物RS-21醋酸酯[J];微生物學(xué)報(bào);1989年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張麗;李桂英;胡常偉;;苯一步羥基化制備苯酚連續(xù)流動(dòng)反應(yīng)體系研究[A];中國化學(xué)會(huì)第27屆學(xué)術(shù)年會(huì)第11分會(huì)場摘要集[C];2010年

2 尉遲力;沈潤南;夏春谷;李樹本;;可溶性甲烷單加氧酶羥基化酶組分的分離純化及反應(yīng)功能[A];生命科學(xué)與生物技術(shù)：中國科協(xié)第三屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];1998年

3 焦鳳茹;龐振濤;陶文晶;;苯直接羥基化制苯酚工藝研究開發(fā)的進(jìn)展[A];中國化工學(xué)會(huì)2005年石油化工學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

4 班樹榮;牛聰偉;陳文彬;吳思;王晨;席真;;磺酰脲代謝研究:單嘧磺隆類似物羥基化及其對活性的影響[A];中國化學(xué)會(huì)第二十五屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集（上冊）[C];2006年

5 華紹烽;李樹本;辛嘉英;牛建中;夏春谷;唐威;胡宵雪;;甲烷單加氧酶羥基化酶的分離純化及其表征[A];第十三屆全國催化學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

6 茅燕勇;吳晟e

本文編號：466953