本文關(guān)鍵詞：Sigma-1受體在依賴于BDNF的Trk B受體信號傳導(dǎo)中的調(diào)控作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究sigma-1受體對BDNF-Trk B受體信號傳導(dǎo)通路的調(diào)控作用并進一步探討sigma-1受體調(diào)控作用的分子機制。方法:將Trk B受體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HEK293T細胞24-48 h,分別給予50 ng/m L BDNF和10μM BD1063刺激,western blotting方法檢測p-ERK1/2和p-GSK3β蛋白表達情況;同樣,培養(yǎng)原代神經(jīng)元,給予50 ng/m L BDNF、1μM BD1047、10μM BD1063和100 n M K252a刺激,采用western blotting方法檢測p ERK1/2和p S9-GSK3β蛋白表達情況;原代培養(yǎng)神經(jīng)元,BD1047和BD1063阻斷sigma-1受體后,檢測神經(jīng)元樹突生長情況;Sigma-1受體基因敲除鼠原代培養(yǎng)的神經(jīng)元給予BDNF刺激后,western blotting方法檢測p ERK1/2和p S9-GSK3β蛋白表達情況以及神經(jīng)元樹突生長情況;Trk B受體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HEK293T細胞后,細胞免疫熒光染色實驗觀察sigma-1受體對Trk B受體內(nèi)化的影響;免疫共沉淀方法,檢測阻斷sigma-1受體后,sigma-1受體與Trk B受體結(jié)合情況。結(jié)果:在HEK293T細胞及原代神經(jīng)元中阻斷sigma-1受體后,BDNF-Trk B受體下游信號通路中p ERK1/2和p S9-GSK3β蛋白表達量減少;原代神經(jīng)元中,阻斷sigma-1受體后顯著抑制了神經(jīng)元樹突生長;同樣,在sigma-1受體基因敲除鼠原代神經(jīng)元中,p ERK1/2和p S9-GSK3β蛋白表達受到抑制并且樹突生長受到抑制;用BD1047或BD1063阻斷sigma-1受體后,明顯抑制了BDNF誘導(dǎo)的Trk B受體內(nèi)化;此外,阻斷sigma-1受體后,免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)sigma-1受體與Trk B受體之間的結(jié)合減少。結(jié)論:在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,BDNF-Trk B受體信號通路發(fā)揮生物學(xué)作用必須依賴于sigma-1受體的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：Sigma-1受體 Trk B受體 BDNF 內(nèi)化 樹突生長
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-14
• 實驗材料和方法14-27
• 一、實驗材料14-16
• 1.1 實驗動物14
• 1.2 實驗儀器設(shè)備14-15
• 1.3 實驗試劑15-16
• 二、實驗方法16-27
• 2.1 溶液配制16-18
• 2.2 細胞系培養(yǎng)18
• 2.3 原代神經(jīng)元的培養(yǎng)18-19
• 2.4 Trk B受體質(zhì)粒的構(gòu)建以及表達19-22
• 2.5 Western blotting22-23
• 2.6 免疫沉淀23-24
• 2.7 細胞轉(zhuǎn)染24
• 2.8 細胞免疫熒光染色24-25
• 2.9 神經(jīng)元樹突染色25
• 2.10 Sigma-1 受體轉(zhuǎn)基因鼠基因型鑒定25-26
• 2.11 數(shù)據(jù)處理26-27
• 實驗結(jié)果27-38
• 1、阻斷sigma-1 受體抑制了BDNF-Trk B受體下游信號通路27-30
• 2、阻斷sigma-1 受體抑制了BDNF誘導(dǎo)的神經(jīng)元樹突生長30-32
• 3、Sigma-1 受體敲除后抑制了BDNF-Trk B受體下游信號通路和生物學(xué)功能32-34
• 4、Sigma-1 受體通過調(diào)控Trk B受體內(nèi)化促進BDNF-Trk B受體下游信號應(yīng)答34-35
• 5、阻斷Sigma-1 受體后，BDNF誘導(dǎo)的Sigma-1 受體與Trk B受體間的結(jié)合減弱35-38
• 討論38-41
• 總結(jié)41-42
• 參考文獻42-47
• 綜述47-59
• 參考文獻53-59
• 附錄59-61
• 致謝61-62

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本文編號：464899