本文關(guān)鍵詞：組織蛋白酶B敏感的載藥聚合物膠束研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：組織蛋白酶B是一種存在于溶酶體內(nèi)的半胱氨酸蛋白水解酶,在肺癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤組織中,組織蛋白酶B的表達(dá)均成倍高于甚至3-9倍高于鄰近的正常組織。組織蛋白酶B可以選擇性地識(shí)別并降解一些多肽片段,如Val-Cit、Phe-Lys、Gly-Phe-Leu-Gly等�；诮M織蛋白酶B的以上特點(diǎn),對(duì)組織蛋白酶B敏感的多肽通常用于抗體-藥物偶聯(lián)劑(ADCs)及前藥的設(shè)計(jì)中。而且,為了實(shí)現(xiàn)藥物的釋放,對(duì)氨基芐氧羰基(PABC)必不可少。受此啟發(fā),本論文擬構(gòu)建組織蛋白酶B敏感的聚合物膠束載藥系統(tǒng),探究對(duì)氨基芐氧羰基如何調(diào)控該類載藥系統(tǒng)的降解、藥物釋放及毒性。論文首先合成了一種兩親性嵌段聚合物mPEG-VC-PABC-C18,并合成了另一種不含對(duì)氨基芐氧羰基的兩親性嵌段聚合物mPEG-VC-C18作為對(duì)照。通過(guò)溶劑揮發(fā)法制成膠束,并通過(guò)芘熒光探針?lè)y(cè)定了膠束的臨界膠束濃度(CMC),用動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和透射電鏡(TEM)對(duì)膠束的粒徑和形貌進(jìn)行了表征。由于上述兩種嵌段共聚物不溶于氘水,故合成了兩種水溶性的模型化合物mPEG-VC-PABC-C4和]mPEG-VC-C4,并對(duì)其在組織蛋白酶B存在下的降解情況通過(guò)核磁共振氫譜(1H NMR)進(jìn)行了實(shí)時(shí)在線監(jiān)測(cè)。結(jié)果表明,在組織蛋白酶B存在時(shí),兩種模型化合物均可降解。mPEG-VC-PABC-C4和nPEG-VC-C4在24小時(shí)的降解總量分別為50%和33%,說(shuō)明當(dāng)對(duì)氨基芐氧羰基存在時(shí)可加速聚合物的降解,使mPEG-VC-PABC-C4的降解速度明顯高于mPEG-VC-C4.其次,本論文進(jìn)一步研究了兩種嵌段聚合物mPEG-VC-PABC-C18和mPEG-VC-C18在膠束狀態(tài)下的降解情況。通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射監(jiān)測(cè)了兩種膠束在組織蛋白酶B存在條件下的粒徑變化。結(jié)果表明,兩種膠束的粒徑在第一天和第四天變化不大,均保持在200 nm左右,但在第九天時(shí),兩種膠束粒徑均顯著增加,mPEG-VC-PABC-C18和mPEG-VC-C18的粒徑分別增加到704 nm和414 nm,說(shuō)明組織蛋白酶B的存在使膠束發(fā)生了降解,脫去PEG殼層而團(tuán)聚,粒徑增大。另外,mPEG-VC-PABC-C18膠束的粒徑變化比mPEG-VC-C18更加明顯,說(shuō)明PABC的存在加速了膠束的降解。SN-38是抗腫瘤藥物伊立替康在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物,其抗腫瘤活性遠(yuǎn)高于伊立替康。SN-38存在內(nèi)酯環(huán)和羧酸鹽兩種形式,生理?xiàng)l件下其內(nèi)酯環(huán)形式易水解開(kāi)環(huán)生成具有毒性的羧酸鹽形式,為了克服這一缺陷,通過(guò)物理包裹法制得了兩種載帶了SN-38的載藥膠束SN38-VC-PABC-CM和SN38-VC-CM,通過(guò)高效液相色譜(HPLC)對(duì)兩種膠束對(duì)SN-38內(nèi)酯環(huán)形式的保護(hù)作用進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,在生理?xiàng)l件下孵育9小時(shí)后,游離的SN-38內(nèi)酯環(huán)形式的剩余量?jī)H為11.5%,而載藥膠束SN38-VC-PABC-CM和SN38-VC-CM包裹的SN-38在孵育9小時(shí)后內(nèi)酯環(huán)形式的剩余量分別為94.1%和86.9%,兩種膠束對(duì)SN-38的內(nèi)酯環(huán)形式均表現(xiàn)出良好的保護(hù)作用,減少了SN-38羧酸鹽形式帶來(lái)的毒副作用。通過(guò)高效液相色譜還監(jiān)測(cè)了兩種載帶了SN-38的載藥膠束的釋藥情況。結(jié)果表明,在組織蛋白酶B存在時(shí),SN38-VC-PABC-CM和SN38-VC-CM在第四天的釋藥量分別為55%和30%,無(wú)組織蛋白酶B存在時(shí),SN38-VC-PABC-CM和SN38-VC-CM在第四天的釋藥量分別為27%和28%。以上結(jié)果說(shuō)明在組織蛋白酶B存在的條件下,SN-38的釋放量高于無(wú)組織蛋白酶B的對(duì)照組,且PABC的引入加快了膠束的降解,使得SN38-VC-PABC-CM載藥膠束的釋藥量明顯高于SN38-VC-CM載藥膠束的釋藥量。最后,對(duì)兩種空白膠束和兩種載藥膠束進(jìn)行了體外細(xì)胞毒性研究。結(jié)果表明,兩種空白膠束均具有較小的細(xì)胞毒性,當(dāng)藥物濃度達(dá)到最高濃度1μM時(shí),相應(yīng)的空白膠束的對(duì)照組也能保證HCT-116細(xì)胞的存活率高于90%。SN38-VC-PABC-CM和SN38-VC-CM膠束與游離的SN-38相比均顯示出較弱的細(xì)胞毒性,這是因?yàn)镻EG的空間位阻作用減慢了膠束的降解,進(jìn)而導(dǎo)致藥物釋放速度減慢,細(xì)胞毒性降低。另外,SN38-VC-PABC-CM的細(xì)胞毒性顯著強(qiáng)于SN38-VC-CM,這是由于PABC的存在加速了膠束的降解及藥物釋放,從而導(dǎo)致了細(xì)胞毒性的增加。該結(jié)果間接證明,對(duì)氨基芐氧羰基存在時(shí),藥物的釋放速度加快。以上結(jié)果表明,mPEG-VC-PABC-C18作為一種藥物傳遞系統(tǒng),通過(guò)引入連接體纈氨酸-瓜氨酸(Val-Cit)二肽,可以實(shí)現(xiàn)抗腫瘤藥物SN-38在腫瘤部位的定點(diǎn)釋放,而且通過(guò)引入間隔基對(duì)氨基芐氧羰基可以加速膠束的降解和釋藥。
【關(guān)鍵詞】：膠束 對(duì)氨基芐氧羰基 組織蛋白酶B 纈氨酸-瓜氨酸 降解 SN-38
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 論文摘要6-9
• Abstract9-14
• 第一章 緒論14-29
• 1.1 納米技術(shù)在藥物傳遞系統(tǒng)中的應(yīng)用14-20
• 1.1.1 納米給藥系統(tǒng)概述14-15
• 1.1.2 納米技術(shù)在腫瘤靶向中的應(yīng)用15-19
• 1.1.3 靶向納米給藥系統(tǒng)的應(yīng)用前景19-20
• 1.2 聚合物膠束20-24
• 1.2.1 聚合物膠束作為藥物載體的特性21
• 1.2.2 聚合物膠束的制備方法21-23
• 1.2.3 聚合物膠束在腫瘤治療中的研究進(jìn)展23-24
• 1.3 酶敏感的聚合物膠束24-25
• 1.4 對(duì)氨基芐氧羰基在抗體-藥物偶聯(lián)物中的作用25-26
• 1.5 SN-38在癌癥治療中的應(yīng)用26
• 1.6 論文的研究?jī)?nèi)容及意義26-29
• 第二章 組織蛋白酶B敏感的聚合物膠束的制備和表征29-52
• 2.1 引言29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分29-39
• 2.2.1 試劑與純化29-31
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器31
• 2.2.3 聚合物mPEG-VC-PABC-C_(18)的合成31-37
• 2.2.4 聚合物mPEG-VC-C_(18)的合成37-39
• 2.2.5 mPEG-VC-PABC-C_(18)和mPEG-VC-C_(18)膠束的制備39
• 2.3 結(jié)果與討論39-51
• 2.3.1 化合物的結(jié)構(gòu)表征39-43
• 2.3.2 mPEG-VC-PABC-C_(18)和mPEG-VC-C_(18)膠束臨界膠束濃度(CMC)的測(cè)定43-44
• 2.3.3 mPEG-VC-PABC-C_(18)和mPEG-VC-C_(18)膠束的粒徑測(cè)試和形貌觀測(cè)44-46
• 2.3.4 模型化合物mPEG-VC-PABC-C_4和mPEG-VC-C_4的降解性能46-48
• 2.3.5 mPEG-VC-PABC-C_(18)和mPEG-VC-C_(18)膠束的降解性能48-51
• 2.4 本章小結(jié)51-52
• 第三章 載SN-38的MPEG-VC-PABC-C18和MPEG-VC-C18膠束的研究52-62
• 3.1 引言52-53
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分53-56
• 3.2.1 試劑53
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器53-54
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)步驟54-56
• 3.3 結(jié)果與討論56-61
• 3.3.1 載藥膠束的制備和載藥量的測(cè)定56-57
• 3.3.2 膠束對(duì)SN-38內(nèi)酯環(huán)形式的保護(hù)性能評(píng)價(jià)57-58
• 3.3.3 載藥膠束釋藥行為的研究58-60
• 3.3.4 載藥膠束的細(xì)胞毒性60-61
• 3.4 本章小結(jié)61-62
• 第四章 論文結(jié)論、創(chuàng)新及不足62-63
• 參考文獻(xiàn)63-70
• 附錄：碩士在讀期間科研成果70-71
• 致謝71

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1 趙利;劉建濤;蘇偉;李雁群;楊玉玲;王素雅;;天然抑制組織蛋白酶B的生物活性肽[J];中國(guó)乳品工業(yè);2006年07期

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3 鄢榮歆;徐賽濤;叢麗娜;楊冠科;朱蓓薇;;海刺參組織蛋白酶L基因的克隆、重組表達(dá)及活性鑒定[J];大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年06期

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本文編號(hào)：407284