目的:構(gòu)建含有不同比例apoA-Iwt半胱氨酸突變體及apoA-V的重組脂質(zhì)體,以研究apoA-I半胱氨酸突變體與apoA-V協(xié)同體外的抗動脈粥樣硬化作用。方法:1.從溫度、IPTG誘導(dǎo)濃度、IPTG誘導(dǎo)時間三個方面優(yōu)化apoA-I大腸桿菌原核培養(yǎng)系統(tǒng);2.將大腸桿菌原核系統(tǒng)培養(yǎng)純化的重組高密度脂蛋白(recombinant high-density lipoprotein,rHDL):野生型載脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I wild type,apoA-Iwt)、apoA-Iwt天然半胱氨酸突變體A-I Milano(apolipoprotein A-I Milano,apoA-IM)以及由apoA-Iwt構(gòu)建的半胱氨酸突變體A-I(N74C)(apolipoprotein A-I(N74C),apoAI(N74C)),按1:0、100:1、1:1、1:100及0:1的實(shí)驗(yàn)比例加入載脂蛋白A-V(apolipoprotein A-V,apoA-V),按1:3.35的質(zhì)量比加入二棕櫚酰磷脂酰膽堿(1,2-dihexadecanoyl-rac-glycero-3-pho...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1不同溫度apoA-Iwt蛋白表達(dá)的SDS-PAGE條帶1：低分子量蛋白Marker；2-5：不同溫度（25℃，28℃，32℃，37℃）誘導(dǎo)3h

圖1.1不同溫度apoA-Iwt蛋白表達(dá)的SDS-PAGE條帶蛋白Marker；2-5：不同溫度（25℃，28℃，32℃，37℃濃度對apoA-Iwt表達(dá)的影響同終濃度的IPTG分別為0.5mmol/L、1.0mmol/L、濃度不同，誘導(dǎo)的apoA-Iw....

圖2.1apoA-Iwt經(jīng)鎳柱純化后各組分的SDS-PAGE（12%）凝膠結(jié)果

結(jié)果wt及其半胱氨酸突變體的原核表達(dá)與純化原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的蛋白經(jīng)鎳親和層析柱純化后，用SDS-PA泳鑒定，考馬斯亮藍(lán)染色后顯示有明顯的蛋白條帶，與目的預(yù)期相同。圖2.1為鎳柱純化后各組分buffer所洗脫下的蛋白）凝膠結(jié)果，第2條帶為大體積的未純化蛋白條帶，可見....

圖2.2apoA-Iwt及其半胱氨酸突變體的SDS-PAGE（12%）凝膠結(jié)果

oA-Iwt及其半胱氨酸突變體的SDS-PAGE（12%）蛋白marker；2：apoA-Iwt；3：apoA-IM；4：apoA清實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)測定混合rHDL的脂質(zhì)結(jié)合能力，其對項(xiàng)簡單方便的實(shí)驗(yàn)方法[37]，研究發(fā)現(xiàn)DMPCrystalinetransitiontem....

圖2.3各組混合rHDL加入后DMPC隨時間變化的濁度DMPC與混合rHDL反應(yīng)會使325nm吸光度下降，在40分鐘內(nèi)，每3分鐘記錄325nm處吸光度，繪制成隨時間變化的函數(shù)

23圖2.3各組混合rHDL加入后DMPC隨時間變化的濁度DMPC與混合rHDL反應(yīng)會使325nm吸光度下降，在40分鐘內(nèi)，每3分鐘記錄325光度，繪制成隨時間變化的函數(shù)。A：apoA-Iwt組；B：apoA-IM組；C：apoA-I(N....

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