HIV膜融合抑制劑是一種多肽類藥物,它通過特異靶向HIV gp41NHR區(qū)域,抑制融合過程中核心六螺旋束的形成,從而阻斷病毒入侵,在感染的初始階段切斷HIV病毒的傳播。2003年,美國FDA批準(zhǔn)了臨床使用的唯一基于HIV表面融合蛋白gp41靶點的抑制劑恩夫韋肽,即T20。該多肽對逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑耐藥及不耐藥病人均具有很好的治療效果,且副作用低,然而T20多肽存在著半衰期短,容易耐藥等問題。理想的膜融合抑制劑應(yīng)具有水溶性好,活性高,穩(wěn)定,價格低廉等特點,因此亟需設(shè)計出一種具有高抗病毒活性,高廣譜活性、高抗耐藥性和較短片段的膜融合抑制多肽藥物。Naito等設(shè)計的SC29EK是一個含有E-K模體(X-EE-XX-KK)的29個氨基酸多肽,其活性和抗耐藥性較T20均明顯提升,為了進(jìn)一步探究SC29EK作用機(jī)制,我們將SC29EK進(jìn)行逐個截短,結(jié)果發(fā)現(xiàn)SC29EK與SC28EK之間,僅相差一個氨基酸Asn但是抗病毒活性存在顯著差異,這是否提示SC29EK的最后一個氨基酸Asn(位于病毒的gp41-145位點)對多肽與病毒結(jié)合有重要作用,據(jù)此我們開展了一系列實驗。本次研究主要是針對gp4...

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圖５：?ＥＬＩＳＡ六聚體競爭實驗??Ａ：包被識別抗體１７Ｃ８，Ｎ３６為Ｎ肽，檢測ＳＣ２９ＥＫ與ＳＣ２８ＥＫ之間差異

的Ｃ肽能通過與Ｎ肽結(jié)合而抑制Ｃ３４－Ｂｉｏｔ的結(jié)合，最終檢測Ｃ３４－Ｂｉｏｔ／Ｎ肽的復(fù)??合物的含量從而反映出Ｃ肽的結(jié)合能力。本次實驗中選用了六聚體識別抗體??ＮＣ－１／１７Ｃ８，二者識別位點略微差異。結(jié)果顯示如下，圖５Ａ中，所用的抗體是??１７－Ｃ８，在與Ｎ３６競爭結(jié)合的過程中....

圖６：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６復(fù)合物在特定條件下形成的晶體??

院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院?碩團(tuán)供氫給１１２４上的０原子，形成一個２．６?Ａ距離的氫鍵。Ｋ１１３２的０原子，形成３．３?Ａ距離的鹽橋。Ｓ１３８的０Ｈ供氫給Ｌ成一個２．６?Ａ距離的氫鍵。Ｃ肽鏈內(nèi)鹽橋結(jié)構(gòu)。Ｋ１２２的ＮＨ基基團(tuán)，二者距離３．９Ａ。??

圖７：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６鏈內(nèi)作用的示意圖??Ａ：圖形顯示是由Ｐｙｍｏｌ軟件展示，氨基酸用ｓｔｉｃｋ模式顯示，ＳＣ２９ＥＫ為綠色ａ螺旋鏈，Ｎ３６為灰白色ａ螺??旋鏈，虛線表示作用力包括鹽橋和氫鍵

圖７：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６鏈內(nèi)作用的示意圖??圖形顯示是由Ｐｙｍｏｌ軟件展示，氨基酸用ｓｔｉｃｋ模式顯示，ＳＣ２９ＥＫ為綠色ａ螺旋鏈，Ｎ３６為灰，虛線表示作用力包括鹽橋和氫鍵。??示鏈內(nèi)作用力，黑色直線為鹽橋作用力，綠色直線為氫鍵。??第二，鏈間作用，我們發(fā)現(xiàn)ＳＣ２９ＥＫ會與相....

圖８：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６鏈間作用力的示意圖??Ａ：圖形顯示是由Ｐｙｍｏｌ軟件展示，氨基酸用ｓｔｉｃｋ模式顯示，ＳＣ２９ＥＫ為綠色ａ螺旋鏈，Ｎ３６為灰白色ｃｔ螺??旋鏈，虛線表示作用力，包括鹽橋和氫鍵

圖８：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６鏈間作用力的示意圖??Ａ：圖形顯示是由Ｐｙｍｏｌ軟件展示，氨基酸用ｓｔｉｃｋ模式顯示，ＳＣ２９ＥＫ為綠色ａ螺旋鏈，Ｎ３６為灰白色ｃｔ螺??旋鏈，虛線表示作用力，包括鹽橋和氫鍵。展示六螺旋束中間區(qū)域的作用力情況。??Ｂ：展示展示六螺旋束末端區(qū)域作用力。?....

本文編號：4027351