腸炎血清型沙門氏菌(Salmonella enterica serovar Enteritidis,SE)是引起腸炎和全身感染重要的沙門氏菌血清型之一,了解沙門氏菌侵襲力表型對(duì)闡明其感染致病機(jī)制至關(guān)重要。傳統(tǒng)慶大霉素保護(hù)試驗(yàn)(GPA)存在通量低、重復(fù)性差等缺點(diǎn)。文中利用96孔細(xì)胞培養(yǎng)和多孔道移液的高通量優(yōu)勢(shì),結(jié)合菌落分區(qū)微量滴板計(jì)數(shù)法改良了傳統(tǒng)GPA試驗(yàn)方案。應(yīng)用改良的GPA方法檢測(cè)了16株SE菌株對(duì)非吞噬細(xì)胞(HT-29)的入侵表型和43株SE菌株對(duì)吞噬細(xì)胞(RAW264.7)的胞內(nèi)復(fù)制表型。通過比較分析SE強(qiáng)、弱菌株JL228和LN248對(duì)吞噬細(xì)胞(RAW264.7)的侵襲力表型發(fā)現(xiàn),改良的GPA得出的數(shù)據(jù)組內(nèi)和組間變異系數(shù)低、數(shù)據(jù)重復(fù)性強(qiáng),胞內(nèi)復(fù)制表型也與顯微觀察結(jié)果相符。通過實(shí)踐應(yīng)用發(fā)現(xiàn),改良的GPA方法具有通量高、重復(fù)性強(qiáng)、結(jié)果可靠兼具省時(shí)、省力等優(yōu)點(diǎn),可作為沙門氏菌菌株侵襲力表型檢測(cè)的更新方案,為進(jìn)一步闡明其致病機(jī)制提供了更科學(xué)有效的方法。

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

沙門氏菌的巨噬細(xì)胞侵襲力決定其全身性感染的能力。應(yīng)用傳統(tǒng)和改良的GPA分別檢測(cè)了小鼠高致病性SE菌株JL228和低致病性菌株LN248的巨噬細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種方法得出類似結(jié)果，在“結(jié)合”表型檢測(cè)中，LN248菌落數(shù)顯著高于JL228(P<0.001)，而在“入侵”和“....

圖1傳統(tǒng)與改良GAP方法檢測(cè)JL228與LN248感染RAW264.7細(xì)胞侵襲表型2.2巨噬細(xì)胞內(nèi)復(fù)制表型驗(yàn)證

應(yīng)用改良GPA試驗(yàn)方案檢測(cè)了43株SE分離菌株對(duì)RAW264.7細(xì)胞的入侵和胞內(nèi)復(fù)制表型，此外，對(duì)16株SE分離株的上皮細(xì)胞HT-29入侵表型進(jìn)行了檢測(cè)。在實(shí)踐操作方面，改良的檢測(cè)方法在單塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上最多可同時(shí)檢測(cè)32株菌株的體外侵襲表型，是傳統(tǒng)方法(24孔板)的4倍，....

圖3JL228與LN248感染RAW264.7細(xì)胞復(fù)制表型的GPA滴板結(jié)果與共聚焦顯微觀察3討論

本文編號(hào)：4010436