黑色素是在黑色素細(xì)胞中經(jīng)酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)催化氧化合成的一種高分子的復(fù)雜復(fù)合物,其含量和分布決定了皮膚所呈現(xiàn)出來的顏色。雖然皮膚中的黑色素有一定的保護(hù)細(xì)胞免受紫外線引起的DNA損傷的作用,但是黑色素異常的產(chǎn)生和積累會(huì)導(dǎo)致一些常見的色素異常沉著病癥,包括曬斑,黃褐斑,炎癥后的皮膚色素沉著過度甚至是黑色素瘤的發(fā)生,對人們構(gòu)成嚴(yán)重的美學(xué)和健康問題。因此,如何預(yù)防和治療皮膚的過度色素沉著已經(jīng)成為該研究領(lǐng)域的重要課題,具有巨大的使用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。相比不良反應(yīng)諸多的天然植物成份及人工合成的黑色素抑制劑,近年來短肽類抑制劑以其高效能、低毒性等特點(diǎn)受到越來越多的重視。但是相比化學(xué)小分子,不佳的透皮生物利用度極大限制了其臨床及商業(yè)應(yīng)用。本研究首先分析研究了肽類黑色素抑制劑的構(gòu)效關(guān)系,進(jìn)而從實(shí)驗(yàn)室已建立的抗氧化肽庫中選擇優(yōu)勢最高的5條作為模板,設(shè)計(jì)出一系列的改造短肽抑制劑。隨后,通過體外多種藥效及毒理模型驗(yàn)證,及體內(nèi)豚鼠皮膚黑色素沉著抑制模型的篩選,最終得到最佳的候選短肽Ansin-2(TRCFRVCS),僅含有8個(gè)氨基酸殘基,Ansin-2具有極強(qiáng)的抗氧化活性,可以有效抑制細(xì)胞內(nèi)...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 皮膚結(jié)構(gòu)與黑色素合成
        1.1.1 皮膚結(jié)構(gòu)
        1.1.2 黑色素的生物合成
        1.1.3 紫外線與黑色素合成調(diào)控
    1.2 常見黑色素生成抑制劑
        1.2.1 酪氨酸酶抑制劑
        1.2.2 抗氧化劑還原黑色素中間體
        1.2.3 抑制黑色素小體轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.2.4 加快黑色素在角質(zhì)層的降解或角質(zhì)脫落
    1.3 蛋白多肽的生物利用系統(tǒng)
        1.3.1 口服給藥系統(tǒng)
        1.3.2 透皮給藥系統(tǒng)
        1.3.3 其他給藥系統(tǒng)
    1.4 研究意義
2 抑制黑色素生成短肽的分子設(shè)計(jì)與優(yōu)化
    2.1 引言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 短肽的分子設(shè)計(jì)
        2.3.2 短肽的化學(xué)合成
        2.3.3 抗氧化活性測定
        2.3.4 酪氨酸酶抑制活性測定
        2.3.5 改造肽對酪氨酸酶抑制的時(shí)間效應(yīng)曲線測定
        2.3.6 細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代
        2.3.7 細(xì)胞毒性檢測
        2.3.8 溶血活性檢測
        2.3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.4.1 改造肽的序列和理化參數(shù)
        2.4.2 改造肽的抗氧化活性結(jié)果與分析
        2.4.3 改造肽的酪氨酸酶抑制活性結(jié)果與分析
        2.4.4 酪氨酸酶抑制的時(shí)間效應(yīng)曲線分析
        2.4.5 細(xì)胞毒性及溶血性
    2.5 本章小結(jié)
3.InVitro改造肽對黑色素合成的影響
    3.1 引言
    3.2 材料與儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代
        3.3.2 檢測改造肽對B16細(xì)胞酪氨酸酶活性的影響
        3.3.3 檢測改造肽對B16細(xì)胞內(nèi)黑色素含量的影響
        3.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 改造肽對B16細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶活性的抑制效果
        3.4.2 改造肽對B16細(xì)胞內(nèi)黑色素含量的影響
    3.5 本章小結(jié)
4 Invivo Ansin-2對UVB誘導(dǎo)的皮膚色素沉著的影響
    4.1 引言
    4.2 材料與儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)耗材與試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 Ansin-2預(yù)防UVB誘導(dǎo)的色素沉著能力檢測
        4.3.2 Ansin-2修復(fù)UVB誘導(dǎo)的色素沉著能力檢測
        4.3.3 Ansin-2的透皮吸收利用度評價(jià)
        4.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.4.1 Ansin-2對UVB誘導(dǎo)的皮膚色素沉著的保護(hù)作用
        4.4.2 Ansin-2對UVB誘導(dǎo)的皮膚色素沉著的修復(fù)作用
        4.4.3 Ansin-2的透皮吸收利用度評價(jià)
    4.5 本章小結(jié)
5 Ansin-2的作用機(jī)制探究與毒理評價(jià)
    5.1 引言
    5.2 材料與儀器
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代
        5.3.2 Westernblotting
        5.3.3 Ansin-2與酪氨酸酶分子對接模擬
        5.3.4 肥大細(xì)胞脫顆粒實(shí)驗(yàn)
        5.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        5.4.1 抑制黑色素生成的信號通路研究
        5.4.2 Ansin-2與酪氨酸酶分子相互作用的結(jié)構(gòu)模擬分析
        5.4.3 Ansin-2的免疫原性檢測
    5.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號：3935056