目的探討京尼平對缺氧/復(fù)氧(H/R)損傷后大鼠心肌細(xì)胞凋亡及自噬的影響。方法建立H/R損傷模型,體外培養(yǎng)的大鼠H9c2心肌細(xì)胞行缺氧12 h、復(fù)氧4 h。實驗分為對照組(Con)、京尼平組(GE)、缺氧/復(fù)氧組(H/R)、缺氧/復(fù)氧+京尼平組(H/R+GE)。細(xì)胞計數(shù)試劑盒-8(CCK-8)檢測細(xì)胞存活率,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡,透射電子顯微鏡觀察自噬體,Western blotting檢測Bax、Bcl-2、P62、Beclin1、LC3-Ⅱ、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)和p-mTOR蛋白的表達(dá)。結(jié)果京尼平預(yù)處理增強了H/R損傷后的H9c2心肌細(xì)胞活力,抑制細(xì)胞凋亡及自噬體累積,降低自噬結(jié)構(gòu)斷面積與細(xì)胞質(zhì)斷面積的比值。Western blotting結(jié)果顯示,京尼平預(yù)處理減少了H/R損傷后Bax、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白表達(dá),增加Bcl-2、P62、p-Akt和p-mTOR蛋白表達(dá)。結(jié)論京尼平可以抑制H/R損傷后心肌細(xì)胞凋亡及自噬,其機制可能與上調(diào)Akt/m TOR信號通路有關(guān)。

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圖5京尼平對H/R損傷后Akt/mTOR信號通路的影響(n=3)

圖4京尼平對H/R損傷后H9c2細(xì)胞凋亡、自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響(n=3)Akt/mTOR信號通路對細(xì)胞生長、存活起重要作用[18],mTOR信號通路是細(xì)胞生長的核心調(diào)節(jié)因子，并負(fù)性調(diào)控自噬[19]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，H9c2心肌細(xì)胞H/R后p-Akt、p-mTOR的表達(dá)下降....

圖1京尼平對H/R損傷后H9c2細(xì)胞存活率的影響(n=3)

為篩選京尼平最佳藥物濃度，采用CCK-8法檢測H/R后各組細(xì)胞存活率，結(jié)果顯示，H/R損傷后H/R組與1、5、10、20、40、80μmol/L京尼平組細(xì)胞存活率較對照組明顯降低(P<0.05)，而10、20、40μmol/L京尼平組細(xì)胞存活率較H/R組明顯增強(P<0.05)，....

圖2京尼平對H/R損傷后H9c2細(xì)胞凋亡的影響(n=3)

自噬是把雙刃劍，在心肌缺血再灌注損傷的不同階段扮演不同的角色[13]。有研究報道，自噬在心肌缺血階段被適度激活，對心肌具有保護作用[12]。在心肌再灌注階段，自噬被過度激活，加重心肌細(xì)胞損傷。LC3-Ⅱ、Beclin1、P62是被廣泛使用的自噬標(biāo)志性蛋白，LC3-Ⅱ、Beclin....

圖4京尼平對H/R損傷后H9c2細(xì)胞凋亡、自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響(n=3)

圖2京尼平對H/R損傷后H9c2細(xì)胞凋亡的影響(n=3)圖5京尼平對H/R損傷后Akt/mTOR信號通路的影響(n=3)

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