本文關(guān)鍵詞：基于吉西他濱結(jié)構(gòu)改造的前體藥物其體內(nèi)外抗癌活性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的吉西他濱是一種嘧啶類(lèi)核苷類(lèi)似物,通過(guò)干擾DNA的合成來(lái)發(fā)揮抑制腫瘤生長(zhǎng)的效應(yīng),對(duì)多種實(shí)體瘤都有治療作用。目前,吉西他濱在臨床上是作為非小細(xì)胞型肺癌,乳腺癌和胰腺癌的一線用藥,但肝臟和血液中存在的脫氧胞苷脫氨酶會(huì)使吉西他濱脫去4’-氨基而失活,導(dǎo)致吉西他濱體內(nèi)的半衰期減短和生物利用度低。本文通過(guò)前藥策略在吉西他濱糖環(huán)5’-OH連接一系列的磷酸酯長(zhǎng)鏈,通過(guò)增加吉西他濱的脂溶性,提高其膜滲透率及口服生物利用度,在體內(nèi)能夠獲得更加有效的抑制腫瘤生長(zhǎng)的效用。方法通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)方法,使用11種不同的人癌細(xì)胞株中,考察比較吉西他濱和前藥的抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,從多個(gè)前藥中選擇細(xì)胞毒作用最強(qiáng)的候選前藥,以及篩選出對(duì)吉西他濱前藥最為敏感的細(xì)胞株,模擬吉西他濱耐藥的細(xì)胞株,考察化合物-3對(duì)耐藥株的細(xì)胞增殖的抑制作用。建立和優(yōu)化吉西他濱以及候選前藥的定量分析方法,進(jìn)一步考察候選前藥的體外代謝穩(wěn)定性,候選前藥通過(guò)癌細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制,細(xì)胞內(nèi)濃度與其抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)作用的相關(guān)性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分,建立非小細(xì)胞型肺癌H460的異位移植模型,考察前藥經(jīng)口服給藥后對(duì)小鼠腫瘤的抑制作用。結(jié)果體外部分:5個(gè)吉西他濱的前藥都能夠明顯抑制多種癌細(xì)胞的生長(zhǎng),其中非小細(xì)胞型肺癌細(xì)胞(H460,A549),胰腺癌細(xì)胞(Panc-1),前列腺癌細(xì)胞(PC-3,DU145)和結(jié)直腸癌細(xì)胞(HCT-116)對(duì)前藥尤為敏感,化合物-3較其他前藥能夠更有效的抑制多種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)�；衔�-3對(duì)上述6個(gè)癌細(xì)胞中的IC50值均小于1μM,接近吉西他濱的并遠(yuǎn)低于陽(yáng)性前藥LY2334737的IC50值。在模擬的吉西他濱耐藥株中,吉西他濱的IC50值升高了44.5倍,而化合物-3的IC50值僅升高1.3倍。體外代謝結(jié)果表明,化合物-3在各種屬的血漿中均穩(wěn)定,且在人肝S9中沒(méi)有明顯的代謝,而化合物-3能夠經(jīng)堿性磷酸酯酶代謝生成活性產(chǎn)物吉西他濱。在4℃和37℃比較化合物-3進(jìn)入癌細(xì)胞的差異,結(jié)果顯示在4℃條件下進(jìn)入細(xì)胞的量約為37℃的30%~40%,說(shuō)明化合物-3可以通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散和攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體攝取進(jìn)入細(xì)胞。同等條件下,前藥進(jìn)入敏感細(xì)胞株的濃度高于不敏感株的濃度,癌細(xì)胞內(nèi)的前藥濃度與對(duì)各癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率有著明顯的相關(guān)性(R2=0.89)�？诜浞胶Y選結(jié)構(gòu)表明,1%CMC-Na含0.5%Tween 80的混懸劑所獲得的化合物-3和吉西他濱的血漿曝露量最高。使用此口服配方,化合物-3每周2次給藥(40 mg/kg)能夠明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng),2周后,腫瘤生長(zhǎng)的抑制率為65.1%(與輔料對(duì)照組相比,p0.01)。與之相比,每周2次腹腔注射80 mg/kg吉西他濱鹽酸鹽,2周后其腫瘤生長(zhǎng)抑制率為61.1%(與輔料對(duì)照組對(duì)比,p0.01)。結(jié)論基于結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的前藥能夠顯著抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng),最敏感的細(xì)胞株為非小細(xì)胞型肺癌(A549、H460),前列腺癌(DU-145、PC-3)結(jié)直腸癌細(xì)胞(HCT-116)。其中化合物-3為抑制強(qiáng)度最佳的前藥,該化合物較母藥對(duì)吉西他濱耐藥腫瘤細(xì)胞株更加有效�；衔�-3可以通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散和主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)濃度與其癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率相關(guān)�；衔�-3在體外代謝體系中較穩(wěn)定,和吉西他濱相比,口服生物利用度有較大的提高。藥效結(jié)果表明,化合物-3具有口服抑制腫瘤生長(zhǎng)的活性,藥效優(yōu)于高劑量腹腔注射吉西他濱鹽酸鹽。
【關(guān)鍵詞】：吉西他濱 前藥 非小細(xì)胞型肺癌 異種移植
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 序言11-21
• 1.1 前藥簡(jiǎn)介及其臨床應(yīng)用11
• 1.2 前藥設(shè)計(jì)中應(yīng)用的官能團(tuán)11-14
• 1.2.1 酯類(lèi)前藥12-13
• 1.2.2 磷酸酯類(lèi)前藥13
• 1.2.3 碳酸酯和氨基甲酸酯類(lèi)13-14
• 1.2.4 酰胺類(lèi)前藥14
• 1.2.5 肟類(lèi)前藥14
• 1.3 前藥的主要應(yīng)用14-17
• 1.3.1 增加藥物水溶性14-15
• 1.3.2 改善藥物脂溶性15-16
• 1.3.3 增加載體介導(dǎo)的吸收16-17
• 1.4 前藥在癌癥領(lǐng)域的應(yīng)用17-19
• 1.4.1 酶激活前藥17-18
• 1.4.2 靶向配體結(jié)合前藥18-19
• 1.5 結(jié)語(yǔ)19
• 1.6 本課題的研究思路及研究?jī)?nèi)容19-21
• 第二章 前藥在體外抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)作用的研究21-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分21-23
• 2.2.1 原料與儀器21
• 2.2.2 細(xì)胞以及細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 2.2.3 溶液配置和稀釋22
• 2.2.4 細(xì)胞毒性試驗(yàn)22-23
• 2.3 結(jié)果與討論23-28
• 2.3.1 吉西他濱及前藥對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用23-25
• 2.3.2 吉西他濱、LY2334737、化合物-3 對(duì)多種癌細(xì)胞的IC5025-28
• 第三章 化合物-3 體外穩(wěn)定性的研究28-41
• 3.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>28
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法28-33
• 3.2.1 藥品與試劑28
• 3.2.2 儀器、色譜、質(zhì)譜條件28-30
• 3.2.3 溶液的配置與稀釋30
• 3.2.4 化合物-3 在體外代謝體系中的穩(wěn)定性30-32
• 3.2.5 樣品處理及進(jìn)樣32-33
• 3.3 結(jié)果與討論33-41
• 3.3.1 色譜條件優(yōu)化33-34
• 3.3.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化34-35
• 3.3.3 化合物-3 在體外代謝體系中的穩(wěn)定35-37
• 3.3.4 化合物-3 在牛小腸堿性磷酸酯酶中的代謝37-41
• 第四章 前藥癌細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制評(píng)價(jià)41-46
• 4.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>41
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 4.2.1 原料與儀器41
• 4.2.2 細(xì)胞以及細(xì)胞培養(yǎng)41
• 4.2.3 化合物-3 在 4℃和 37℃條件下的跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)41-42
• 4.2.4 癌細(xì)胞對(duì)化合物-3 敏感性與其跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的相關(guān)性42
• 4.2.5 樣品處理及進(jìn)樣42
• 4.3 結(jié)果與討論42-46
• 4.3.1 化合物-3 在 4℃和 37℃條件下的跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)42-43
• 4.3.2 癌細(xì)胞對(duì)化合物-3 敏感性與其跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的相關(guān)性43-46
• 第五章 化合物-3 的裸鼠體內(nèi)動(dòng)力學(xué)的考察46-53
• 5.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>46
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法46-47
• 5.2.1 原料與儀器46
• 5.2.2 動(dòng)物及動(dòng)物飼養(yǎng)46
• 5.2.3 化合物-3 不同口服制劑的的動(dòng)力學(xué)的考察46-47
• 5.2.4 吉西他濱和化合物-3 生物利用度的試驗(yàn)47
• 5.2.5 血漿樣品處理及數(shù)據(jù)分析47
• 5.3 結(jié)果與討論47-53
• 5.3.1 化合物-3 不同口服制劑的的動(dòng)力學(xué)的考察47-49
• 5.3.2 吉西他濱和化合物-3 的口服生物利用度49-53
• 第六章 化合物-3 的體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)53-58
• 6.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>53
• 6.2 實(shí)驗(yàn)方法53-54
• 6.2.1 動(dòng)物及動(dòng)物飼養(yǎng)53
• 6.2.2 非小細(xì)胞型肺癌H460 腫瘤模型的建立53
• 6.2.3 化合物-3 和吉西他濱對(duì)非小細(xì)胞型肺癌腫瘤的抑制作用53-54
• 6.3 結(jié)果與討論54-58
• 6.3.1 化合物-3 和吉西他濱對(duì)非小細(xì)胞型肺癌腫瘤的抑制作用54-58
• 第七章 總結(jié)與展望58-60
• 7.1 總結(jié)58
• 7.2 展望58-60
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 縮略語(yǔ)說(shuō)明64-65
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文及專(zhuān)利65-66
• 致謝66-67

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本文編號(hào)：388604