透明質(zhì)酸既可以作為載體材料又可以作為多種腫瘤細(xì)胞高表達(dá)的CD44受體的天然主動(dòng)靶向配體,具有穩(wěn)定性好、非免疫原性、生物相容性高、生物可降解等優(yōu)良的理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)。但其在體內(nèi)受體分布廣泛,使得透明質(zhì)酸靶向納米制劑在體內(nèi)易于被肝脾所吞噬,造成其在體內(nèi)的不良分布和快速清除,從而導(dǎo)致較差的靶向效率。對(duì)透明質(zhì)酸靶向藥物傳遞系統(tǒng)進(jìn)行PEG化修飾,能夠避免其被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬,延長(zhǎng)納米粒的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間,促進(jìn)納米粒在腫瘤部位的蓄積,從而提高靶向效率,是解決上述問題的有效策略。然而,PEG化存在著抑制細(xì)胞攝取和阻礙納米粒溶酶體逃逸的困境。因而本課題設(shè)計(jì)構(gòu)建了腫瘤微環(huán)境pH響應(yīng)型可斷裂PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米制劑,以期在體循環(huán)中能夠最大程度發(fā)揮PEG化的優(yōu)勢(shì),而在腫瘤微環(huán)境酸性條件下能夠快速脫去PEG水化層,提高納米制劑的主動(dòng)靶向效率和抗腫瘤療效。首先,通過(guò)透明質(zhì)酸聚合物上的羧基基團(tuán)和羥丙基-β-環(huán)糊精的羥基基團(tuán)之間發(fā)生酯化反應(yīng),制備三種不同分子量的透明質(zhì)酸-羥丙基-β-環(huán)糊精主動(dòng)靶向接枝物(HA-CDs,分子量為7,63,102 kDa),并通過(guò)核磁和紅外技術(shù)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。然后,合成芳香亞胺...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
前言
第一章 透明質(zhì)酸羥丙基-β-環(huán)糊精接枝物和金剛烷化聚乙二醇的合成及表征
    第一節(jié) 不同分子量透明質(zhì)酸羥丙基-β-環(huán)糊精接枝物的合成
        1 材料與儀器
            1.1 材料
            1.2 儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 透明質(zhì)酸羥丙基-β-環(huán)糊精接枝物(HA-CD)的合成
            2.2 接枝物的結(jié)構(gòu)確證
        3 結(jié)果與討論
            3.1 透明質(zhì)酸羥丙基-β-環(huán)糊精接枝物(HA-CD)的合成
            3.2 透明質(zhì)酸羥丙基-β-環(huán)糊精接枝物(HA-CD)的結(jié)構(gòu)確證
    第二節(jié) 金剛烷化聚乙二醇的合成及表征
        1 材料與儀器
            1.1 材料
            1.2 儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 非酸敏感的金剛烷化聚乙二醇(AD-O-PEG)的合成
            2.2 酸敏感的金剛烷化聚乙二醇(AD-B-PEG)的合成
            2.3 聚合物化學(xué)結(jié)構(gòu)及酸敏感性質(zhì)表征
        3 結(jié)果與討論
            3.1 金剛烷化聚乙二醇的合成
            3.2 金剛烷化聚乙二醇的核磁結(jié)構(gòu)確證
            3.3 聚合物的酸敏感性質(zhì)表征
    4 本章小結(jié)
第二章 透明質(zhì)酸分子量對(duì)透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒主動(dòng)靶向作用的影響
    第一節(jié) 透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的制備及表征
        1 材料與儀器
            1.1 材料
            1.2 儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的制備
            2.2 粒徑、PDI及Zeta電位測(cè)定
            2.3 形態(tài)觀察
            2.4 包封率和載藥量
            2.5 體外釋放行為考察
        3 結(jié)果與討論
            3.1 透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的制備
            3.2 透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的物理化學(xué)和制劑學(xué)性質(zhì)表征
            3.3 透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的形態(tài)觀察
            3.4 透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的穩(wěn)定性考察
            3.5 透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的體外釋放行為
    第二節(jié) 透明質(zhì)酸分子量對(duì)主動(dòng)靶向納米粒靶向作用的影響
        1 材料與儀器
            1.1 材料
            1.2 儀器
            1.3 細(xì)胞及動(dòng)物
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 試液的配制
            2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3 CD44受體在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)
            2.4 MTT法測(cè)定細(xì)胞毒性
            2.5 細(xì)胞攝取
            2.6 細(xì)胞攝取機(jī)制考察
            2.7 靶向納米制劑對(duì)細(xì)胞親和力的考察
            2.8 靶向納米制劑對(duì)受體的影響
        3 結(jié)果與討論
            3.1 CD44受體在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)
            3.2 透明質(zhì)酸環(huán)糊精靶向納米制劑的細(xì)胞毒考察
            3.3 透明質(zhì)酸環(huán)糊精靶向納米制劑的細(xì)胞攝取
            3.4 透明質(zhì)酸環(huán)糊精靶向納米制劑的細(xì)胞攝取機(jī)制
            3.5 透明質(zhì)酸環(huán)糊精靶向納米制劑對(duì)CD44受體的親和力
            3.6 透明質(zhì)酸環(huán)糊精靶向納米制劑對(duì)CD44受體分布及存在形式的影響
    4 本章小結(jié)
第三章 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒的體外抗腫瘤活性
    第一節(jié) 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒的制備及表征
        1 材料與儀器
            1.1 材料
            1.2 儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的制備
            2.2 粒徑、PDI及Zeta電位測(cè)定
            2.3 形態(tài)觀察
            2.4 包封率和載藥量
            2.5 體外釋放行為考察
        3 結(jié)果與討論
            3.1 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的構(gòu)建
            3.2 PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的物理化學(xué)和制劑學(xué)性質(zhì)表征
            3.3 PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的形態(tài)觀察
            3.4 PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的穩(wěn)定性考察
            3.5 PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精主動(dòng)靶向納米粒的體外釋放行為
    第二節(jié) 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒的體外抗腫瘤活性
        1 材料與儀器
            1.1 材料
            1.2 儀器
            1.3 細(xì)胞來(lái)源
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 試液的配制
            2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3 MTT法測(cè)定細(xì)胞毒性
            2.4 細(xì)胞攝取
            2.5 細(xì)胞攝取機(jī)制考察
            2.6 共聚焦觀察納米制劑的內(nèi)涵體/溶酶體逃逸
        3 結(jié)果與討論
            3.1 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒的細(xì)胞毒
            3.2 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒的細(xì)胞攝取
            3.3 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒的細(xì)胞攝取機(jī)制
            3.4 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒的溶酶體逃逸能力
    4 本章小結(jié)
第四章 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米制劑的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和荷瘤小鼠組織分布
    第一節(jié) 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米制劑的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)
        1 材料與儀器
            1.1 材料
            1.2 儀器
            1.3 動(dòng)物
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 分析方法
            2.2 溶液的配制
            2.3 給藥方案和樣品采集
            2.4 血漿樣品預(yù)處理
            2.5 數(shù)據(jù)處理
        3 結(jié)果與討論
            3.1 血藥濃度-時(shí)間曲線比較
            3.2 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)計(jì)算
    第二節(jié) 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米制劑的荷瘤小鼠體內(nèi)組織分布
        1 材料與儀器
            1.1 材料
            1.2 儀器
            1.3 細(xì)胞及動(dòng)物
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 4T1細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2 4T1荷瘤小鼠模型的建立
            2.3 4T1細(xì)胞及組織水平的CD44受體表達(dá)
            2.4 載DiR的PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒的制備
            2.5 組織分布實(shí)驗(yàn)
        3 結(jié)果與討論
            3.1 4T1細(xì)胞及組織水平的CD44受體表達(dá)
            3.2 載DiR的PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米粒在荷瘤小鼠體內(nèi)組織分布
    4 本章小結(jié)
第五章 酸敏感PEG化透明質(zhì)酸環(huán)糊精納米制劑的體內(nèi)藥效學(xué)
    1 材料與儀器
        1.1 材料
        1.2 儀器
        1.3 細(xì)胞及動(dòng)物
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 4T1荷瘤小鼠動(dòng)物模型的建立
        2.2 分組和給藥方案
        2.3 藥效學(xué)評(píng)價(jià)方法
    3 結(jié)果與討論
        3.1 納米粒的抗腫瘤效果
        3.2 組織學(xué)染色評(píng)價(jià)
    4 本章小結(jié)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)與不足
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝
學(xué)位論文自愿預(yù)先檢測(cè)申請(qǐng)表



本文編號(hào)：3826166