背景:NEK2,細(xì)胞周期調(diào)控蛋白相關(guān)的絲/蘇氨酸激酶家族成員之一,參與細(xì)胞有絲分裂的進(jìn)程,具有組裝中心體,調(diào)控中心體分離,促進(jìn)染色體凝縮和染色體分離等生物學(xué)功能。NEK2在多種腫瘤中過表達(dá),功能異常的NEK2能誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生和耐藥,而且NEK2的上調(diào)還能促進(jìn)腫瘤惡性程度的轉(zhuǎn)變,同時還與腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)。因此,NEK2這一原癌基因可以作為一個新型的藥物靶向分子,具有巨大的抗腫瘤治療潛力。目的:迄今為止,針對NEK2的抑制劑仍然存在著生物活性低、選擇性差、體內(nèi)抗腫瘤效果不好等問題。雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多新的NEK2上游信號分子和其下游作用靶點(diǎn),但其相關(guān)信號通路尚不是很明確。因此,針對以上兩個問題,本課題旨在通過對一系列阻斷ATP與NEK2結(jié)合位點(diǎn)化合物的篩選,篩選出具有高選擇性和高腫瘤抑制活性的NEK2激酶抑制劑,并在體外分子、細(xì)胞和體內(nèi)動物水平對化合物進(jìn)行整體評價;同時對NEK2的相關(guān)分子作用機(jī)制進(jìn)行更加深入的探究。方法:(1)采用Mobility shift法對MBM-55進(jìn)行酶譜選擇性篩選;(2)MTT法檢測MBM-17和MBM-55對多種腫瘤細(xì)胞的增殖抑制活性;(3)免疫印跡法檢測M...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 前言
    1. NEK2激酶的研究介紹
        1.1 NEK2激酶的結(jié)構(gòu)及表達(dá)特點(diǎn)
        1.2 NEK2的生物學(xué)功能
        1.3 NEK2與腫瘤
            1.3.1 NEK2過表達(dá)誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生
            1.3.2 NEK2與耐藥相關(guān)
            1.3.3 NEK2與腫瘤進(jìn)程和不良預(yù)后相關(guān)
        1.4 NEK2相關(guān)信號通路
            1.4.1 NEK2的主要上游調(diào)控因子
            1.4.2 NEK2的主要下游效應(yīng)分子
        1.5 靶向NEK2的治療
            1.5.1 RNA干擾
            1.5.2 阻斷ATP結(jié)合位點(diǎn)
            1.5.3 干擾蛋白-蛋白相互作用
    2. KDM5B的研究介紹
        2.1 KDM5B的結(jié)構(gòu)
        2.2 KDM5B與H3K4me3的聯(lián)系及其生物學(xué)功能
        2.3 KDM5B與人類腫瘤之間的聯(lián)系
        2.4 靶向KDM5B的腫瘤治療
    3. 研究目的
    4. 研究內(nèi)容
第二章 新型NEK2抑制劑MBM-17和MBM-55的體外抗腫瘤活性研究
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 化合物
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 Mobility shift法檢測酶譜選擇性
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 體外細(xì)胞生長活性檢測
        2.4 免疫印跡法(Western Blot)
        2.5 細(xì)胞周期檢測
        2.6 細(xì)胞凋亡檢測
        2.7 數(shù)據(jù)處理
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
>        3.1 MBM-17和MBM-55對NEK2激酶活性的抑制活性及酶譜選擇性_</li>
        3.2 MBM-17和MBM-55對多種腫瘤細(xì)胞株均有較好的增殖抑制作用
        3.3 MBM-17和MBM-55能夠使細(xì)胞內(nèi)的NEK2蛋白降低
        3.4 MBM-17和MBM-55能夠?qū)⒓?xì)胞阻滯在G2/M期
        3.5 MBM-17和MBM-55具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用
    4. 討論
第三章 新型NEK2抑制劑MBM-17和MBM-55的體內(nèi)抗腫瘤活性研究
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 化合物
        1.5 實(shí)驗(yàn)動物
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 MBM-17和MBM-55體內(nèi)藥代學(xué)實(shí)驗(yàn)
        2.2 體內(nèi)抗腫瘤活性研究
            2.2.1 小鼠腫瘤細(xì)胞皮下接種
            2.2.2 小鼠分組及給藥
            2.2.3 監(jiān)測指標(biāo)
        2.3 數(shù)據(jù)處理
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 MBM-17S和MBM-55S的體內(nèi)藥物代謝動力學(xué)研究
        3.2 MBM-17S和MBM-55S在HCT-116結(jié)腸癌異種移植瘤上的抗腫瘤活性
        3.3 MBM-17S和MBM-55S對HCT-116異種移植瘤模型的毒性探究
    4. 討論
第四章 NEK2激酶調(diào)節(jié)KDM5B/H3K4me3的分子作用機(jī)制研究
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 免疫印跡法(Western Blot)
        2.2 轉(zhuǎn)染
        2.3 q-PCR(實(shí)時熒光定量PCR)實(shí)驗(yàn)
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 MBM-17和MBM-55使H3K4me3蛋白表達(dá)升高KDM5B蛋白表達(dá)降低
        3.2 MDA-MB-468細(xì)胞高表達(dá)NEK2和KDM5B
        3.3 NEK2沉默后使KDM5B蛋白表達(dá)降低
        3.4 NEK2沉默后不改變KDM5B的mRNA水平
    4. 討論
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表文章
致謝



本文編號：3824206