目的:1.合成兩類不同粒徑的新型靶向納米光敏劑scFv-Z@FRT及HANP/Ce6并進行表征,分別評估其穩(wěn)定性、水溶性及ROS生成情況,為二者的進一步研究與應用提供依據(jù)。2.評價scFv-Z@FRT與不同腫瘤組織的結(jié)合能力。探討scFv-Z@FRT介導的PDT在裸鼠雙側(cè)4T1腫瘤模型中CAF及膠原的清除情況,評估PDT后不同粒徑的納米顆粒在腫瘤中的累積和滲透效應。3.探討HANP/Ce6的細胞毒性、靶向性及生物分布情況。評價HANP/Ce6介導的PDT對HT29荷瘤鼠的療效,并探討¹⁸F-FDG PET在其療效評估中的應用價值。方法:1.采用聚合酶鏈反應(PCR)從cDNA擴增FRT DNA區(qū)段,將其連接到pRSF質(zhì)粒上,而后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌XL1-Blue感受態(tài)細胞中。將篩選得到的pRSF/FRT質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中,誘導鐵蛋白產(chǎn)生后進行純化。為獲得抗FAP scFv,我們將相應DNA編碼序列片段插入pOPE101質(zhì)粒中,并轉(zhuǎn)化到具有氨芐青霉素抗性的大腸桿菌JM109中。將PelB信號肽序列插入scFv的N端,誘導抗FAP scFv產(chǎn)生后進行純...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 緒論
第2章 文獻綜述
    2.1 引言
    2.2 光動力治療概述
    2.3 光動力治療的基本原理
    2.4 光動力治療的抗腫瘤機制
    2.5 光動力治療的必需因素
    2.6 光敏劑在光動力治療中的研究進展
        2.6.1 第一代光敏劑
        2.6.2 第二代光敏劑
        2.6.3 第三代光敏劑
    2.7 納米技術(shù)在抗腫瘤光敏劑中的應用
        2.7.1 自身具有光學特性的納米顆粒
        2.7.2 光敏劑納米載體
        2.7.3 增加組織穿透深度
        2.7.4 多功能納米藥物
第3章 scFv-Z@FRT的制備與表征
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗試劑
        3.1.2 實驗儀器及設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 鐵蛋白的制備
        3.2.2 抗FAP scFv的制備
        3.2.3 scFv-Z@FRT的合成、純化與表征
        3.2.4 水溶性及穩(wěn)定性研究
        3.2.5 單線態(tài)氧生成情況研究
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 scFv-Z@FRT的制備與表征
        3.3.2 水溶性及穩(wěn)定性
        3.3.3 單線態(tài)氧生成情況
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 scFv-Z@FRT與腫瘤結(jié)合能力及PDT效果評估
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗試劑
        4.1.2 實驗儀器及設備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 scFv-Z@FRT與不同腫瘤結(jié)合能力的研究
        4.2.2 荷瘤鼠腫瘤模型的建立
        4.2.3 CAF及膠原清除情況研究
        4.2.4 大分子/納米顆粒瘤內(nèi)積聚情況研究
        4.2.5 小鼠腫瘤免疫熒光染色分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 scFv-Z@FRT與不同腫瘤結(jié)合能力的研究
        4.3.2 CAF及膠原清除情況
        4.3.3 大分子/納米顆粒瘤內(nèi)積聚情況
        4.3.4 小鼠腫瘤免疫熒光染色分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 HANP/Ce6 的制備與表征
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗試劑
        5.1.2 實驗儀器及設備
    5.2 實驗方法
        5.2.1 HANP/Ce6 的制備
        5.2.2 Ce6 載量研究
        5.2.3 HANP/Ce6 的表征
        5.2.4 水溶性及穩(wěn)定性研究
        5.2.5 Ce6 釋放及ROS生成情況研究
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 Ce6 載量研究
        5.3.2 HANP/Ce6 的表征
        5.3.3 水溶性及穩(wěn)定性
        5.3.4 Ce6 釋放及ROS生成情況
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第6章 HANP/Ce6 的生物學效應分析及PDT療效評估
    6.1 實驗材料
        6.1.1 實驗試劑
        6.1.2 實驗儀器及設備
    6.2 實驗方法
        6.2.1 HANP/Ce6 靶向性研究
        6.2.2 細胞內(nèi)ROS生成量研究
        6.2.3 細胞毒性研究
        6.2.4 荷瘤裸鼠腫瘤模型的建立
        6.2.5 HANP/Ce6 體內(nèi)分布情況
        6.2.6 PDT療效評估
        6.2.7 ¹⁸F-FDG PET療效監(jiān)測
        6.2.8 組織學分析
        6.2.9 統(tǒng)計學分析
    6.3 結(jié)果
        6.3.1 HANP/Ce6 靶向性
        6.3.2 細胞內(nèi)ROS生成量研究
        6.3.3 細胞毒性研究
        6.3.4 HANP/Ce6 體內(nèi)分布情況
        6.3.5 PDT療效評估
        6.3.6 ¹⁸F-FDG PET療效監(jiān)測
        6.3.7 組織學分析
    6.4 討論
    6.5 小結(jié)
第7章 結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3807651