發(fā)布時間：2023-04-29 20:53

　　本論文利用硒化卡拉膠開發(fā)海藻硒寡糖,建立環(huán)保的生物酶解新工藝技術(shù),生產(chǎn)安全高效的海藻硒寡糖新產(chǎn)品,為其作為腫瘤治療輔助藥品、海洋特醫(yī)食品、食品添加劑和飼料添加劑奠定基礎(chǔ)。本課題從海藻中分離出一株新型硒化卡拉膠降解菌株,并對該硒化卡拉膠酶及其酶制劑的制備工藝、酶學(xué)性質(zhì)、降解特性、細(xì)胞毒性及穩(wěn)定性進行研究。本課題首次對產(chǎn)硒化卡拉膠酶菌株篩選、發(fā)酵工藝及其酶學(xué)性質(zhì)進行研究:篩選得到的產(chǎn)酶菌株經(jīng)16S rDNA鑒定為假交替單胞菌屬(Pseudoalteromonas sp.);對其采用單因素和響應(yīng)面法進行菌株的發(fā)酵工藝研究,最佳工藝條件為:1.59%κ-卡拉膠、3.69 mmol/L Ca²⁺、33℃,所產(chǎn)生的酶活力值可達8.495 U/m L;并考察溫度、pH、金屬離子、表面活性劑、蛋白抑制劑等對其酶學(xué)性質(zhì)的影響。采用真空冷凍干燥法和固定化方法獲得理想的新型硒化卡拉膠酶制劑。首先探討了真空冷凍干燥法制備固體凍干酶制劑的方法,以相對酶活為指標(biāo),得到最佳凍干工藝條件:預(yù)凍溫度-40℃、海藻糖濃度2.0%、酶液厚度5 mm、預(yù)凍時間10 h,所制得凍干酶制劑的剩余酶活達53....

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    1.1 卡拉膠概述
        1.1.1 卡拉膠的來源和結(jié)構(gòu)
        1.1.2 卡拉膠酶的研究進展
    1.2 酶制劑的概況
        1.2.1 酶制劑的定義
        1.2.2 固定化的方法概述
            1.2.2.1 固定化載體
            1.2.2.2 固定化的方法
        1.2.3 酶制劑的應(yīng)用
            1.2.3.1 飼料行業(yè)的應(yīng)用
            1.2.3.2 食品工業(yè)的應(yīng)用
            1.2.3.3 紡織工業(yè)的應(yīng)用
        1.2.4 酶制劑的國內(nèi)外研究熱點
            1.2.4.1 基因工程技術(shù)
            1.2.4.2 模擬酶
            1.2.4.3 抗體酶
    1.3 硒多糖概述
        1.3.1 硒多糖的來源
        1.3.2 硒的存在形態(tài)
        1.3.3 分析方法
    1.4 研究意義
第二章 產(chǎn)硒化卡拉膠酶菌株的篩選及多樣性分析
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試劑
        2.1.2 儀器
        2.1.3 培養(yǎng)基
    2.2 試驗方法
        2.2.1 產(chǎn)硒化卡拉膠酶降解菌株的篩選
        2.2.2 產(chǎn)硒化卡拉膠酶降解菌株的菌種鑒定
        2.2.3 DNS法（3,5-二硝基水楊酸）測定硒化卡拉膠酶活性
            2.2.3.1 半乳糖標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.2.3.2 硒化卡拉膠酶活的測定
        2.2.4 新型硒化卡拉膠降解酶的定位
            2.2.4.1 胞內(nèi)酶的提取
            2.2.4.2 胞外酶的提取
            2.2.4.3 降解酶的定位
    2.3 實驗結(jié)果與分析
        2.3.1 硒化卡拉膠酶活性菌株的篩選與鑒定
        2.3.2 產(chǎn)硒化卡拉膠酶菌株的形態(tài)觀察和菌種鑒定
        2.3.3 新型硒化卡拉膠降解菌株的定位
    2.4 本章小結(jié)
第三章 產(chǎn)硒化卡拉膠酶菌株發(fā)酵條件的優(yōu)化
    3.1 試驗材料
        3.1.1 試劑
        3.1.2 儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 酶活的測定方法
        3.2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化菌株P(guān)seudoalteromonas sp. Xi13發(fā)酵條件
            3.2.2.1 單因素試驗
            3.2.2.2 響應(yīng)面試驗設(shè)計
    3.3 實驗結(jié)果與分析
        3.3.1 單因素實驗
            3.3.1.1 溫度對Pseudoalteromonas sp. Xi13菌株產(chǎn)酶的影響
            3.3.1.2 pH對Pseudoalteromonas sp. Xi13菌株產(chǎn)酶的影響
            3.3.1.3 碳源對Pseudoalteromonas sp. Xi13菌株產(chǎn)酶的影響
            3.3.1.4 氮源對Pseudoalteromonas sp. Xi13菌株產(chǎn)酶的影響
            3.3.1.5 金屬離子對Pseudoalteromonas sp. Xi13菌株產(chǎn)酶的影響
            3.3.1.6 接種量對Pseudoalteromonas sp. Xi13菌株產(chǎn)酶的影響
            3.3.1.7 搖瓶轉(zhuǎn)速對Pseudoalteromonas sp. Xi13菌株產(chǎn)酶的影響
        3.3.2 響應(yīng)面試驗結(jié)果
        3.3.3 響應(yīng)面設(shè)計試驗驗證結(jié)果
    3.4 本章小結(jié)
第四章 硒化卡拉膠酶酶學(xué)性質(zhì)的研究
    4.1 試驗材料
        4.1.1 試劑
        4.1.2 儀器
    4.2 試驗方法
        4.2.1 硒化卡拉膠酶液的制備方法
        4.2.2 硒化卡拉膠酶活力的測定方法
        4.2.3 硒化卡拉膠酶的降解曲線
        4.2.4 硒化卡拉膠酶酶學(xué)性質(zhì)的研究
            4.2.4.1 硒化卡拉膠酶的最適反應(yīng)溫度
            4.2.4.2 硒化卡拉膠酶的最適p H
            4.2.4.3 金屬離子對硒化卡拉膠酶活性的影響
            4.2.4.4 蛋白抑制劑、變性劑及表面活性劑對硒化卡拉膠酶活性的影響
            4.2.4.5 硒化卡拉膠酶的底物特異性
    4.3 實驗結(jié)果與分析
        4.3.1 硒化卡拉膠酶降解曲線
        4.3.2 硒化卡拉膠酶的最適反應(yīng)溫度研究
        4.3.3 硒化卡拉膠酶的最適p H的研究
        4.3.4 金屬離子對硒化卡拉膠酶活性的影響
        4.3.5 蛋白抑制劑、變性劑及表面活性劑對活性的影響
        4.3.6 硒化卡拉膠酶的底物特異性
    4.4 本章小結(jié)
第五章 硒化卡拉膠酶制劑
    5.1 實驗材料
        5.1.1 試劑
        5.1.2 儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 硒化卡拉膠酶制劑的制備流程
            5.2.1.1 硒化卡拉膠酶液的制備
            5.2.1.2 硒化拉膠酶液的除菌
            5.2.1.3 固體酶制劑干燥方法的選擇
        5.2.2 真空冷凍干燥法制備固體酶制劑
            5.2.2.1 真空冷凍干燥工藝研究
            5.2.2.2 固體酶制劑的酶學(xué)性質(zhì)初步研究
            5.2.2.3 固體酶制劑貯存穩(wěn)定性研究
        5.2.3 硒化卡拉膠酶的固定化方法研究
            5.2.3.1 交聯(lián)－包埋－交聯(lián)法
            5.2.3.2 硒化卡拉膠固定化酶制劑的穩(wěn)定性研究
    5.3 實驗結(jié)果與分析
        5.3.1 真空冷凍干燥法制備固體酶制劑
            5.3.1.1 酶液干燥方法的選擇
            5.3.1.2 真空冷凍干燥工藝優(yōu)化
            5.3.1.3 固體酶制劑的酶學(xué)性質(zhì)初步研究
            5.3.1.4 真空冷凍干燥酶制劑貯存穩(wěn)定性
        5.3.2 硒化卡拉膠酶的固定化研究
            5.3.2.1 固定化酶條件選擇
            5.3.2.2 固定化酶顆粒的形態(tài)
            5.3.2.3 硒化卡拉膠固定化酶的穩(wěn)定性研究
        5.3.3 酶制劑的降解性能
    5.4 本章小結(jié)
第六章 新型硒化卡拉膠降解酶制劑的應(yīng)用
    6.1 材料與儀器
        6.1.1 試劑
        6.1.2 儀器
    6.2 實驗內(nèi)容
        6.2.1 生物酶解法制備硒寡糖
        6.2.2 硒寡糖含硒量的測定
            6.2.2.1 實驗原理
            6.2.2.2 硒含量標(biāo)準(zhǔn)曲線
            6.2.2.3 實驗方法
        6.2.3 硒寡糖薄層層析分析
        6.2.4 硒寡糖理化性質(zhì)研究
            6.2.4.1 硒寡糖穩(wěn)定性的測定
            6.2.4.2 硒寡糖黏度測定
            6.2.4.3 硒寡糖溶解性的測定
        6.2.5 檢測硒寡糖對細(xì)胞的作用
    6.3 實驗結(jié)果與分析
        6.3.1 紫外分光光度法的方法學(xué)建立
            6.3.1.1 檢測波長的確定
            6.3.1.2 硒標(biāo)準(zhǔn)曲線
            6.3.1.3 精密度
            6.3.1.4 加標(biāo)回收率實驗
            6.3.1.5 穩(wěn)定性試驗
        6.3.2 硒寡糖含硒量的測定
            6.3.2.1 有機硒和無機硒的分離方法
            6.3.2.2 硒含量的測定
        6.3.3 TLC分析酶解產(chǎn)物
            6.3.3.1 靈敏度
            6.3.3.2 酶解產(chǎn)物
        6.3.4 硒寡糖的理化性質(zhì)
        6.3.5 細(xì)胞試驗
    6.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3805722