新生兒缺氧缺血性腦病(neonatal hypoxie-ischemic encephalopathy,NHIE)是指在圍產(chǎn)期窒息而導致腦的缺氧缺血性損傷,NHIE不僅嚴重威脅著新生兒的生命,更是新生兒期后病殘兒中最常見的病因之一。NHIE會導致人類新生兒死亡和慢性神經(jīng)功能障礙,星形膠質細胞參與構成血腦屏障,是遭受缺血危險后第一個受損害的腦細胞,保護受損星形膠質細胞成為治療NHIE的有效策略。因此,基于NHIE的發(fā)生機制,尋找療效可靠的神經(jīng)保護藥物,對治療新生兒缺氧缺血性腦病具有重要的現(xiàn)實意義。近年來,從陸生植物和環(huán)境微生物中發(fā)現(xiàn)新化合物的幾率越來越小,因此,越來越多的科研人員開始關注特殊生境微生物,尤其植物內生菌和海洋微生物。特境微生物更容易產(chǎn)生具有豐富的結構多樣性和生物活性多樣性的次生代謝產(chǎn)物,能夠為新藥研制提供豐富的先導化合物。糖氧剝奪(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)細胞模型常被用來模擬NHIE進行藥物研究,因此,本學位論文建立大鼠原代星形膠質細胞OGD模型體外模擬NHIE。實驗發(fā)現(xiàn),缺氧缺糖6h時模型細胞的凋亡率已超過50%,因此,無糖培養(yǎng)基缺氧...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 SIRT1對神經(jīng)系統(tǒng)損傷的保護作用
    1.1 SIRTI蛋白
    1.2 SIRT1的小分子調節(jié)劑
        1.2.1 SIRT1激活劑
        1.2.2 SIRT1抑制劑
    1.3 SIRT1在腦損傷中的作用
        1.3.1 SIRT1與神經(jīng)退行性疾病
            1.3.1.1 阿爾茨海默病與SRT1
            1.3.1.2 帕金森病與SRT1
            1.3.1.3 亨廷頓舞蹈病與SRT1
        1.3.2 SIRT1在急性腦損傷中的作用
            1.3.2.1 缺血性腦卒中與SRT1
            1.3.2.2 創(chuàng)傷性腦損傷與SRT1
            1.3.2.3 蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷與SIRT1
    1.4 展望
    參考文獻
第二章 特境微生物天然產(chǎn)物對OGD模型大鼠星形膠質細胞保護活性篩選
    2.1 儀器與材料
        2.1.1 實驗儀器
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 藥品與試劑
        2.1.4 待篩選天然藥物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 化合物和溶液的配制
        2.2.2 星形膠質細胞的培養(yǎng)
        2.2.3 OGD模型的建立和實驗分組
        2.2.4 免疫熒光試驗鑒定星形膠質細胞
        2.2.5 化合物對正常大鼠星形膠質細胞的毒性測定
        2.2.6 化合物對OGD模型大鼠星形膠質細胞的保護活性測定
        2.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法
    2.3 實驗結果
        2.3.1 星形膠質細胞的鑒定
        2.3.2 化合物對正常星形膠質細胞的毒性
        2.3.3 化合物對OGD模型星形膠質細胞的神經(jīng)保護活性
    2.4 結論與討論
    參考文獻
第三章 活性化合物對OGD模型大鼠星形膠質細胞保護作用機制研究
    3.1 儀器與材料
        3.1.1 實驗儀器
        3.1.2 實驗動物
        3.1.3 藥品與試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 溶液的配制
        3.2.2 星形膠質細胞培養(yǎng)
        3.2.3 OGD模型的建立和實驗分組
        3.2.4 神經(jīng)元-星形膠質細胞的共培養(yǎng)
        3.2.5 細胞上清液中LDH的測定
        3.2.6 細胞內SOD水平的測定
        3.2.7 細胞內ROS水平分析
        3.2.8 流式細胞術分析細胞凋亡率
        3.2.9 Western Blot法測定蛋白表達水平
        3.2.10 免疫熒光試驗觀察SIRT1和NF-κB的定位
        3.2.11 RT-PCR測定NF-κB和Bax的mRNA表達
        3.2.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法
    3.3 實驗結果
        3.3.1 化合物chaetoglobosin F對OGD模型細胞的神經(jīng)保護作用機制研究
            3.3.1.1 化合物chaetoglobosin F對OGD模型細胞LDH、SOD和ROS水平的影響
            3.3.1.2 化合物chaetoglobosin F對OGD模型細胞GFAP mRNA表達的影響
            3.3.1.3 化合物chaetoglobosin F對OGD模型細胞SIRT1、Hif-1α和Ac-p53蛋白表達的影響
            3.3.1.4 化合物chaetoglobosin F對OGD模型細胞NF-κB蛋白表達的影響
            3.3.1.5 化合物chaetoglobosin F對OGD模型細胞凋亡的影響
            3.3.1.6 化合物chaetoglobosin F預處理對共培養(yǎng)神經(jīng)元神經(jīng)突生長的影響
        3.3.2 化合物guxi-2對OGD模型細胞的神經(jīng)保護作用機制研究
            3.3.2.1 化合物guxi-2對OGD模型細胞LDH、SOD和ROS水平的影響
            3.3.2.2 化合物guxi-2對OGD模型細胞GFAP mRNA的影響
            3.3.2.3 化合物guxi-2對OGD模型細胞SIRT1、Hif-1α和Ac-p53蛋白表達的影響
            3.3.2.4 化合物guxi-2對OGD模型細胞NF-κB mRNA和蛋白表達的影響
            3.3.2.5 化合物guxi-2對OGD模型細胞凋亡的影響
    3.4 結論與討論
    參考文獻
附錄: 篩選化合物的結構
致謝
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄



本文編號：3767219