發(fā)布時(shí)間：2023-02-06 13:28

　　目的:癌癥是世界上最具有威脅性的疾病之一,其中肝癌發(fā)生率及死亡率都排在前幾位。臨床藥物索拉非尼(sorafenib,S)是治療肝癌的有效藥物之一,然而,依然存在水溶性差、生物利用度低等問題。因此,本研究基于CRISPR基因編輯技術(shù),構(gòu)建靶向表皮生長因子受體的重組質(zhì)粒(E),合成anti-EpCAM適配體(aE)與聚酰胺-胺(PAMAM,P)的偶聯(lián)物(P-aE),并制備其修飾的中空介孔二氧化硅(HMSN,HM)共載索拉非尼與質(zhì)粒的多功能靶向納米遞送系統(tǒng)(SE@HM/P-aE),以提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性并高效地抑制腫瘤生長。方法:首先,優(yōu)化HMSN合成條件制備粒徑合適的羧基化HMSN納米,通過物理方法裝載索拉非尼,并通過靜電作用連接適配體功能化的PAMAM(P-aE),構(gòu)建S@HM/P-aE納米遞送系統(tǒng)。設(shè)計(jì)EGFR-sgRNA并構(gòu)建質(zhì)粒,采用AO/EB法和western-blot驗(yàn)證其生物學(xué)活性,并將其裝載在S@HM/P-aE納米中制備SE@HM/P-aE納米藥物。采用透射電鏡、粒徑儀、原子力顯微鏡、紅外光譜儀等對(duì)納米粒進(jìn)行表征;高效液相法建立索拉非尼的標(biāo)準(zhǔn)曲線,并測(cè)定索拉非尼的...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
主要符號(hào)表
第一章 引言
    1.1 肝癌治療的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展
        1.1.1 肝癌的現(xiàn)狀
        1.1.2 肝癌的誘發(fā)因素及發(fā)病機(jī)制
    1.2 索拉非尼研究進(jìn)展
        1.2.1 索拉非尼的簡介及作用機(jī)制
        1.2.2 索拉非尼耐藥機(jī)制
    1.3 納米靶向輸送系統(tǒng)的研究進(jìn)展
        1.3.1 納米技術(shù)的介紹
        1.3.2 納米技術(shù)在生物醫(yī)藥的應(yīng)用
        1.3.3 納米靶向藥物在癌癥治療中的應(yīng)用
        1.3.4 適配體在納米藥物用的應(yīng)用
    1.4 中空介孔二氧化硅納米粒的研究現(xiàn)狀
        1.4.1 中空介孔二氧化硅的介紹
        1.4.2 中空介孔二氧化硅的制備方法
        1.4.3 中空介孔二氧化硅的應(yīng)用
    1.5 CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)及其應(yīng)用
        1.5.1 基因編輯技術(shù)介紹
        1.5.2 基因編輯技術(shù)分類
        1.5.3 CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的應(yīng)用
    1.6 本論文的研究思路、主要研究內(nèi)容及創(chuàng)新點(diǎn)
        1.6.1 本論文的研究思路
        1.6.2 本論文的主要研究內(nèi)容
        1.6.3 本論文的創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 適配體功能化的PAMAM修飾HMSN納米的合成及表征
    2.1 實(shí)驗(yàn)試劑、耗材與儀器設(shè)備
        2.1.1 主要試劑與藥品
        2.1.2 主要儀器設(shè)備與耗材
        2.1.3 常用試劑的配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 dSiO₂納米粒合成的條件優(yōu)化
        2.2.2 SiO₂@HMSN納米粒的合成
        2.2.3 HMSN納米粒的合成
        2.2.4 HMSN-COOH納米粒的合成
        2.2.5 適配體功能化的樹枝狀分子的偶聯(lián)
        2.2.6 索拉非尼的載藥量及其包封率的測(cè)定
        2.2.7 HM/P-aE或S@HM/P-aE的合成
        2.2.8 納米粒的表征
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 HMSN的合成條件篩選與優(yōu)化
        2.3.2 S@HM/P-aE的合成路線
        2.3.3 HMSN納米載體及載藥納米的粒徑及形貌
        2.3.4 CTAC去除效果的表征
        2.3.5 P-aE耦合驗(yàn)證及HM/P-aE多功能納米的鑒定
        2.3.6 HM/P-aE對(duì)藥物sorafenib的裝載量及不同條件下的釋放特性
    2.4 討論
        2.4.1 dSiO₂的優(yōu)化
        2.4.2 HMSN及S@HM/P-aE納米的合成及表征
    2.5 小結(jié)
第三章 EGFR-sgRNA/Cas9質(zhì)粒的構(gòu)建及質(zhì)粒與化療藥物共載納米粒的制備
    3.1 實(shí)驗(yàn)試劑、耗材與儀器設(shè)備
        3.1.1 主要試劑與藥品
        3.1.2 主要儀器設(shè)備與耗材
        3.1.3 常用試劑的配置
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 EGFR-sgRNA的設(shè)計(jì)及驗(yàn)證
        3.2.2 質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.3 質(zhì)粒的驗(yàn)證
        3.2.4 共載質(zhì)粒納米的合成
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 重組原核表達(dá)菌種的鑒定
        3.3.2 EGFR-sgRNA/Cas9質(zhì)粒作用后對(duì)HeLa細(xì)胞EGFR蛋白表達(dá)的影響
        3.3.3 重組質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞凋亡作用
        3.3.4 SE@HM/P-aE表征
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 適配體功能化的PAMAM修飾的HMSN納米遞送系統(tǒng)體外靶向能力研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)試劑、耗材與儀器設(shè)備
        4.1.1 主要試劑與藥品
        4.1.2 主要儀器設(shè)備與耗材
        4.1.3 常用試劑的配置
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 FITC標(biāo)記的HMSN及HM/P-aE的合成
        4.2.3 適配體修飾的納米粒靶向識(shí)別能力檢測(cè)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 FITC標(biāo)記的HM/P-aE納米靶向識(shí)別能力
        4.3.2 HepG2細(xì)胞對(duì)HM/P-aE納米的攝取量
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 適配體修飾的共載索拉非尼與質(zhì)粒的靶向納米遞送系統(tǒng)對(duì)肝癌細(xì)胞活性的調(diào)控研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)試劑、耗材與儀器設(shè)備
        5.1.1 主要試劑與藥品
        5.1.2 主要儀器設(shè)備與耗材
        5.1.3 常用試劑的配置
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 體外細(xì)胞活性檢測(cè)
        5.2.2 體外細(xì)胞凋亡檢測(cè)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 納米載體(HMSN,HM/P-aE)安全劑量的篩選
        5.3.2 SE@HM/P-aE納米藥物的藥效學(xué)評(píng)價(jià)
        5.3.3 SE@HM/P-aE納米藥物的對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的調(diào)控
    5.4 討論
        5.4.1 納米材料安全劑量篩選
        5.4.2 納米藥物的細(xì)胞毒作用及細(xì)胞凋亡作用
        5.4.3 納米藥物的細(xì)胞凋亡作用
    5.5 小結(jié)
第六章 適配體修飾的共載索拉非尼與質(zhì)粒的靶向納米遞送系統(tǒng)體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)及抗癌機(jī)制探討
    6.1 實(shí)驗(yàn)試劑、耗材與儀器設(shè)備
        6.1.1 主要試劑與藥品
        6.1.2 主要儀器設(shè)備與耗材
        6.1.3 常用試劑的配置
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 動(dòng)物飼養(yǎng)
        6.2.2 H22細(xì)胞培養(yǎng)
        6.2.3 小鼠移植瘤模型的建立
        6.2.4 蘇木精-伊紅(HE)染色
        6.2.5 免疫組化(IHC)
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 納米粒對(duì)皮下移植瘤昆明鼠體重和瘤體積的影響
        6.3.2 HE染色法觀察藥物作用后組織病理學(xué)形態(tài)
        6.3.3 SE@HM/P-aE納米粒對(duì)腫瘤組織中EGFR表達(dá)影響
    6.4 討論
    6.5 小結(jié)
結(jié)論
展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3736086