抗菌肽CGA-N12是源于人嗜鉻粒蛋白A的N-末端（CGA 65-76）衍生肽,具有特異抗念珠菌活性,對哺乳動物細(xì)胞無毒性。前期研究發(fā)現(xiàn),CGA-N12誘導(dǎo)線粒體膜電位耗散,但其降低線粒體膜電位的機(jī)制尚不清楚。線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP）是線粒體活性調(diào)節(jié)中樞,研究CGA-N12對mPTP的作用,旨在揭示CGA-N12降低線粒體膜電位作用機(jī)理。透射電鏡和光譜學(xué)研究結(jié)果顯示,CGA-N12改變線粒體超微結(jié)構(gòu),誘導(dǎo)基質(zhì)腫脹,證明線粒體膜通透性增加;1500Da以下的物質(zhì)自由進(jìn)出線粒體,促進(jìn)細(xì)胞色素c（Cyt c）和Ca²⁺釋放,說明CGA-N12使mPTP不可逆開放;質(zhì)子梯度消失,膜電位耗散,從而引起線粒體ATPase水解活性增加,加重mPTP的開放。結(jié)果表明,CGA-N12通過打開mPTP,降低熱帶念珠菌線粒體膜電位。利用不同作用機(jī)制的mPTP打開抑制劑環(huán)孢菌素A（CsA）、米酵菌素（BA）、溴二胺（MBM⁺）和二硫蘇糖醇（DTT）,研究CGA-N12在mPTP蛋白質(zhì)復(fù)合物上的作用位點(diǎn)。光譜學(xué)結(jié)果表明,BA和MBM⁺完全... 

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 念珠菌病
    1.2 抗真菌藥物及病原真菌耐藥機(jī)制
        1.2.1 抗真菌藥物作用靶點(diǎn)
        1.2.2 病原真菌耐藥機(jī)制
    1.3 抗菌肽
        1.3.1 抗菌肽理化性質(zhì)
        1.3.2 抗菌肽結(jié)構(gòu)特征
        1.3.3 抗菌肽作用機(jī)制
    1.4 抗菌肽對線粒體的作用
        1.4.1 抗菌肽對線粒體膜電位的影響
        1.4.2 抗菌肽對線粒體Ca2+穩(wěn)態(tài)的影響
        1.4.3 抗菌肽對細(xì)胞色素c泄露的影響
        1.4.4 抗菌肽對線粒體能量代謝的影響
    1.5 線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔研究進(jìn)展
        1.5.1 線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔結(jié)構(gòu)與功能
        1.5.2 線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放的影響
        1.5.3 線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的調(diào)控
    1.6 CGA-N12的來源
    1.7 研究目的和內(nèi)容
        1.7.1 研究目的
        1.7.2 研究內(nèi)容
第二章 抗菌肽CGA-N12對熱帶念珠菌線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔的作用
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 抗菌肽CGA-N12的制備
        2.1.2 菌種
        2.1.3 試劑
        2.1.4 儀器設(shè)備
        2.1.5 主要溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 線粒體提取
        2.2.2 線粒體膜電位檢測
        2.2.3 線粒體超微結(jié)構(gòu)觀察
        2.2.4 線粒體腫脹檢測
        2.2.5 線粒體溶質(zhì)尺寸排除法
        2.2.6 線粒體Cytc泄露檢測
        2.2.7 線粒體Ca~(2+)水平檢測
        2.2.8 ATPase水解活性檢測
        2.2.9 CGA-N12對m PTP蛋白質(zhì)復(fù)合物功能的影響
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 線粒體膜電位耗散
        2.3.2 線粒體超微結(jié)構(gòu)變化
        2.3.3 線粒體腫脹
        2.3.4 熱帶念珠菌mPTP的溶質(zhì)尺寸排阻特性
        2.3.5 PEG1000誘導(dǎo)線粒體收縮
        2.3.6 線粒體細(xì)胞色素c泄露
        2.3.7 線粒體Ca~(2+)泄露
        2.3.8 ATPase水解活性增加
        2.3.9 CGA-N12對m PTP蛋白質(zhì)復(fù)合物的作用
    2.4 章節(jié)總結(jié)
第三章 念珠菌mPTP與動物細(xì)胞mPTP蛋白組分基因擴(kuò)增比較
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1抗菌肽CGA-N12
        3.1.2 菌種
        3.1.3 細(xì)胞
        3.1.4 試劑
        3.1.5 儀器設(shè)備
        3.1.6 主要溶液配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 熱帶念珠菌基因組DNA提取
        3.2.2 人正常肝細(xì)胞株L02的基因組DNA提取
        3.2.3 mPTP不同亞基引物設(shè)計(jì)
        3.2.4 PCR擴(kuò)增
        3.2.5 凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 BAX蛋白基因擴(kuò)增比較
        3.3.2 Bcl-2蛋白基因擴(kuò)增比較
        3.3.3 CyPD蛋白基因擴(kuò)增比較
        3.3.4 VDAC蛋白基因擴(kuò)增比較
        3.3.5 ANT蛋白基因擴(kuò)增比較
    3.4 章節(jié)總結(jié)
第四章 討論
結(jié)論
    5.1 CGA-N12對熱帶念珠菌線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的作用機(jī)理
    5.2 熱帶念珠菌與哺乳動物細(xì)胞mPTP 蛋白組分基因擴(kuò)增比較
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗菌肽的生物學(xué)特征與作用機(jī)制間的相關(guān)性[J]. 張宇,姜寧,張愛忠,張晨雪.  中國生物制品學(xué)雜志. 2019(07)
[2]嗜鉻粒蛋白N區(qū)抗真菌活性片段研究[J]. 李瑞芳,張?zhí)碓?羅進(jìn)賢,王芳宇,顧取良,甘菁菁,肖凡.  中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2006(02)

碩士論文
[1]熱帶念珠菌KRE9的重組表達(dá)及其與抗菌肽CGA-N12相互作用研究[D]. 劉政偉.河南工業(yè)大學(xué) 2018



本文編號：3697690