近年來,數(shù)種口服蛋白多肽類藥物制劑的臨床研究取得了喜人的結(jié)果,顯現(xiàn)出了良好的前景。其中,胰島素的口服制劑研發(fā)備受關(guān)注。關(guān)于胰島素的口服遞藥研究,目前主要面臨著兩方面的關(guān)鍵問題。一方面是如何克服胰島素的口服吸收屏障,其主要包括胃腸道的化學(xué)屏障、蛋白酶屏障、黏液屏障和腸上皮細(xì)胞屏障。其中,腸上皮細(xì)胞被認(rèn)為是最難以克服的屏障,因為除了頂側(cè)細(xì)胞膜之外,藥物載體或藥物還需要完成胞內(nèi)轉(zhuǎn)運和經(jīng)過基底側(cè)細(xì)胞膜出胞才能夠達(dá)到促進(jìn)胰島素吸收的目的。另一方面是如何實現(xiàn)胰島素載體的體內(nèi)智能釋藥以精準(zhǔn)調(diào)控血糖水平。糖尿病人的血糖節(jié)律與機體的狀態(tài)和飲食情況息息相關(guān)。胰島素載體在克服口服吸收屏障進(jìn)入血液后,需要被運送到特定的靶器官,通過響應(yīng)不同的血糖水平進(jìn)行智能釋藥從而充分發(fā)揮胰島素調(diào)控血糖的功能。因此,圍繞這兩大問題,我們理性設(shè)計了兩種胰島素新型口服納米載體并進(jìn)一步深入探究了其體內(nèi)高效遞送的機制。本文的第一部分針對口服吸收屏障,基于腸上皮細(xì)胞層的膽酸轉(zhuǎn)運通路,設(shè)計了脫氧膽酸修飾的主動轉(zhuǎn)運納米粒（DNPs）用于改善模型藥物胰島素的口服吸收。首先通過酰胺反應(yīng)合成了脫氧膽酸修飾的殼聚糖,進(jìn)而與胰島素和聚谷氨酸通過靜電吸... 

【文章頁數(shù)】：167 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1部分 引言
    1 口服蛋白多肽類藥物的研發(fā)進(jìn)展
    2 蛋白多肽類藥物口服給藥的屏障概述及應(yīng)對策略
        2.1 化學(xué)屏障
        2.2 蛋白酶屏障
        2.3 黏液屏障
        2.4 腸上皮細(xì)胞屏障
    3 針對多重屏障設(shè)計的蛋白多肽類藥物口服給藥系統(tǒng)
        3.1 針對蛋白酶和腸上皮細(xì)胞雙重屏障設(shè)計的口服給藥系統(tǒng)
        3.2 針對黏液和腸上皮細(xì)胞雙重屏障設(shè)計的口服給藥系統(tǒng)
        3.3 針對蛋白酶、黏液和腸上皮細(xì)胞三重屏障設(shè)計的口服給藥系統(tǒng)
    4 新興的蛋白多肽類降血糖藥物口服給藥系統(tǒng)
        4.1 微針膠囊
        4.2 肝靶向載體
        4.3 葡萄糖響應(yīng)智能釋藥載體
    5 課題的提出
第2部分 荷載胰島素的主動轉(zhuǎn)運納米�？朔诜掌琳系难芯�
    第1章 荷載胰島素的主動轉(zhuǎn)運納米粒的制備與體外表征
        1 實驗原料與儀器
            1.1 實驗原料
            1.2 實驗儀器與設(shè)備
        2 實驗方法
            2.1 脫氧膽酸偶聯(lián)殼聚糖的合成與表征
            2.2 納米粒的制備
            2.3 納米粒的凍干
            2.4 納米粒的理化性質(zhì)表征
            2.5 納米粒的包封率與載藥量表征
            2.6 納米粒抵抗蛋白酶降解的能力
            2.7 納米粒體外釋放胰島素的研究
            2.8 載納米粒的腸溶膠囊的制備
            2.9 腸溶膠囊的體外釋放研究
            2.10 納米粒中胰島素的穩(wěn)定性
        3 結(jié)果與討論
            3.1 脫氧膽酸偶聯(lián)殼聚糖的合成與表征
            3.2 納米粒的理化性質(zhì)表征
            3.3 包封率和載藥量表征
            3.4 納米粒抵抗蛋白酶降解的能力
            3.5 納米粒體外釋放胰島素的研究
            3.6 腸溶膠囊的體外釋放研究
            3.7 納米粒中胰島素的穩(wěn)定性
        4 小結(jié)
    第2章 荷載胰島素的主動轉(zhuǎn)運納米粒克服腸上皮細(xì)胞屏障的細(xì)胞水平研究
        1. 實驗原料、儀器和細(xì)胞
            1.1 實驗原料
            1.2 實驗儀器與設(shè)備
            1.3 細(xì)胞
        2. 實驗方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 黏液穿透研究
            2.3 納米粒細(xì)胞毒性研究
            2.4 ASBT蛋白表達(dá)檢測
            2.5 細(xì)胞攝取及攝取機制研究
            2.6 內(nèi)含體溶酶體逃逸研究
            2.7 胞質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)運研究
            2.8 跨胞轉(zhuǎn)運研究
        3 結(jié)果與討論
            3.1 黏液穿透研究
            3.2 細(xì)胞毒性研究
            3.3 ASBT蛋白表達(dá)檢測
            3.4 細(xì)胞攝取及攝取機制研究
            3.5 內(nèi)含體溶酶體逃逸研究
            3.6 胞質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)運研究
            3.7 跨胞轉(zhuǎn)運研究
        4 小結(jié)
    第3章 主動轉(zhuǎn)運納米粒實現(xiàn)胰島素高效口服吸收的動物水平評價
        1. 實驗原料、儀器和動物
            1.1 實驗原料
            1.2 實驗儀器與設(shè)備
            1.3 實驗動物
        2. 實驗方法
            2.1 I型糖尿病大鼠建模
            2.2 黏液穿透研究
            2.3 活體小腸絨毛吸收實驗
            2.4 在體小腸絨毛吸收實驗
            2.5 離體小腸滲透實驗
            2.6 體內(nèi)藥效學(xué)與藥動學(xué)研究
        3 結(jié)果與討論
            3.1 黏液穿透研究
            3.2 活體小腸絨毛吸收實驗
            3.3 在體小腸絨毛吸收實驗
            3.4 離體小腸滲透實驗
            3.5 體內(nèi)藥效學(xué)與藥動學(xué)研究
        4 小結(jié)
第3部分 荷載胰島素的智能聚合物囊泡的設(shè)計及其體內(nèi)高效遞送機制的研究
    第4章 聚合物的合成與表征
        1 實驗原料與儀器
            1.1 實驗原料
            1.2 實驗儀器與設(shè)備
        2 實驗方法
            2.1 Met-NCA的合成與表征
            2.2 mPEG-PolyMet的合成與表征
            2.3 Pep-PEG-PLGA的合成與表征
        3 結(jié)果與討論
            3.1 Met-NCA的合成與表征
            3.2 mPEG-PolyMet的合成與表征
            3.3 Pep-PEG-PLGA的合成與表征
        4 小結(jié)
    第5章 荷載胰島素的智能聚合物囊泡的制備與體外表征
        1 實驗原料與儀器
            1.1 實驗原料
            1.2 實驗儀器與設(shè)備
        2 實驗方法
            2.1 聚合物囊泡的制備
            2.2 聚合物囊泡的表征
            2.3 聚合物囊泡的包封率與載藥量表征
            2.4 聚合物囊泡的H_2O_2敏感性研究
            2.5 聚合物囊泡的葡萄糖響應(yīng)釋藥研究
        3 結(jié)果與討論
            3.1 聚合物囊泡的表征
            3.2 包封率和載藥量表征
            3.3 聚合物囊泡的H_2O_2敏感性研究
            3.4 聚合物囊泡的葡萄糖響應(yīng)釋藥研究
        4 小結(jié)
    第6章 荷載胰島素的智能聚合物囊泡克服腸上皮細(xì)胞屏障的細(xì)胞水平研究
        1. 實驗原料、儀器和細(xì)胞
            1.1 實驗原料
            1.2 實驗儀器與設(shè)備
            1.3 細(xì)胞
        2. 實驗方法
            2.1 黏液穿透研究
            2.2 Pep-PMS的細(xì)胞毒性研究
            2.3 Pep-PMS的細(xì)胞攝取及攝取機制研究
            2.4 Pep-PMS的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運研究
            2.5 Pep-PMS的跨胞轉(zhuǎn)運研究
        3 結(jié)果與討論
            3.1 黏液穿透研究
            3.2 Pep-PMS的細(xì)胞毒性研究
            3.3 Pep-PMS的細(xì)胞攝取及攝取機制研究
            3.4 Pep-PMS的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運研究
            3.5 Pep-PMS的跨胞轉(zhuǎn)運研究
        4 小結(jié)
    第7章 動物水平評價荷載胰島素的智能聚合物囊泡的體內(nèi)高效遞送
        1. 實驗原料、儀器和動物
            1.1 實驗原料
            1.2 實驗儀器與設(shè)備
            1.3 動物
        2. 實驗方法
            2.1 I型糖尿病造模
            2.2 皮下注射Pep-PMS的血糖響應(yīng)釋藥研究
            2.3 在體小腸絨毛吸收實驗
            2.4 體內(nèi)分布實驗
            2.5 Pep-PMS的肝臟蓄積研究
            2.6 Pep-PMS的肝臟定位情況研究
            2.7 Pep-PMS的葡萄糖響應(yīng)釋藥研究
            2.8 體內(nèi)藥效學(xué)與藥動學(xué)研究
            2.9 體內(nèi)肝攝取~(18)F-FDG的研究
            2.10 肝糖原含量檢測
        3 結(jié)果與討論
            3.1 皮下注射Pep-PMS的血糖響應(yīng)釋藥研究
            3.2 在體小腸絨毛吸收實驗
            3.3 體內(nèi)分布實驗
            3.4 Pep-PMS的肝臟蓄積研究
            3.5 Pep-PMS的肝臟定位情況研究
            3.6 Pep-PMS的葡萄糖響應(yīng)釋藥研究
            3.7 體內(nèi)藥效學(xué)與藥動學(xué)研究
            3.8 糖尿病大鼠肝臟儲存葡萄糖的研究
        4 小結(jié)
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介及攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表論文與研究成果



本文編號：3697592