內(nèi)皮抑素（endostatin）是一個(gè)20kDa的蛋白質(zhì),能夠抑制新生血管的生成。血管生成是從已有的毛細(xì)血管發(fā)展而形成新的血管,涉及各種生理和病理過(guò)程,如腫瘤的發(fā)展、糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）等。血管生成抑制劑的出現(xiàn),為一些與血管生成相關(guān)的疾病的治療提供了新的手段。本實(shí)驗(yàn)室在前期實(shí)驗(yàn)中將可以穿過(guò)血眼屏障的穿膜肽Tat-PTD與靶向肽RGD分別連接在內(nèi)皮抑素的兩端,設(shè)計(jì)并表達(dá)出了Tat-PTD-Endostatin-RGD,并驗(yàn)證其活性,證明Tat-PTD-Endostatin-RGD具有好的抗細(xì)胞增殖活性、抗細(xì)胞遷移能力以及穿過(guò)血眼屏障的能力,并可以與眼底血管細(xì)胞表面受體特異性結(jié)合,使內(nèi)皮抑素可以通過(guò)滴眼給藥達(dá)到眼底,抑制視網(wǎng)膜血管生成。但是,前期實(shí)驗(yàn)所制備的Tat-PTD-Endostatin-RGD是以包涵體的形式表達(dá),產(chǎn)率不高;另外Tat-PTD-Endostatin-RGD不穩(wěn)定,在放置過(guò)程中易于沉淀,不利于將來(lái)的開發(fā)應(yīng)用。基于這些問(wèn)題,本論文研究Tat-PTD-Endostatin-RGD 的規(guī)�；苽浼皟龈芍苿�,為 Tat-PTD-Endostatin-RGD的新藥開發(fā)奠定基... 

【文章來(lái)源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?Ｔａｔ－ＰＴＤ－Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ－ＲＧＤ可溶性表達(dá)的￡．ｃｏ／／菌種及誘導(dǎo)劑的選擇??

３．２?Ｔａｔ－ＰＴＤ－Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ－ＲＧＤ可溶性表達(dá)蛋白的純化??選用３種濃度的沖洗緩沖液對(duì)上樣且平衡完成的ＮＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱子進(jìn)行沖??洗，收集洗脫緩沖液進(jìn)行電泳結(jié)果見(jiàn)圖２－２，使用ＢａｎｄＳｃａｎ?５．０對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理，??在２６?ｋＤ，目的蛋白分子量處，發(fā)現(xiàn)使用４５?ｍｍｏｌ／Ｌ咪挫的Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ沖洗緩沖??液最后洗脫后目的蛋白含量最局。??進(jìn)行二次純化的結(jié)果見(jiàn)圖２－３，發(fā)現(xiàn)ＵＶ２８〇有兩個(gè)吸收峰，分別收集組分電泳??后使用ＢａｎｄＳｃａｎ５．０對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理，見(jiàn)圖２－４。經(jīng)過(guò)Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ進(jìn)行初步純化??后目的蛋白純度約為５９％，使用Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０進(jìn)行二次純化后的目的蛋白純度約??為９０．９％。ＢＣＡ試劑盒測(cè)定純化蛋白含量，每升￡．ｃｏ／／Ｏｒｉｇａｍｉ２（ＤＥ３）可純化出約??１．３?ｍｇ可溶性目的蛋白。??Ｍｌ?２?Ｍ３??２６?ｋＤ?卓??２０ｋＤ?ｎｍｎｎｉｍｉ邊??圖２－２使用不同濃度沖洗緩沖液后純化蛋白??Ｍ．蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)；１．４５ｍｍｏｌ／Ｌ咪哩；２．４０ｍｍｏｌ／Ｌ咪哩；３．３５ｍｍｏｌ／Ｌ咪挫??Ｆｉｇ．?２

?１１０??１１＾??圖２－３?Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０層析分離結(jié)果??Ｆｉｇ．?２－３?Ｅｌｕｔｉｏｎ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ?ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ．（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)??記錄０００２１６５－ｐｌ８）??１?２?３?４?５?６?Ｍ??一?？?＿＿???６６?ｋＤ??ｔ通?—?４５?ｋＤ??—?—?３３?，Ｄ??二二．－一卜?２６ｋＤ??、鋒％?２０?ｋＤ??”?１４．４?ｋＤ????』??圖２－４目的蛋白親和層析純化結(jié)果??Ｌ流穿液；２．Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ平衡緩沖液；３．Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ沖洗緩沖液；４．??Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ洗脫緩沖液；５，?Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０第一峰；６．?Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０第二峰；Ｍ??標(biāo)


本文編號(hào)：3575826