內皮抑素（endostatin）是一個20kDa的蛋白質,能夠抑制新生血管的生成。血管生成是從已有的毛細血管發(fā)展而形成新的血管,涉及各種生理和病理過程,如腫瘤的發(fā)展、糖尿病視網膜病變（DR）等。血管生成抑制劑的出現,為一些與血管生成相關的疾病的治療提供了新的手段。本實驗室在前期實驗中將可以穿過血眼屏障的穿膜肽Tat-PTD與靶向肽RGD分別連接在內皮抑素的兩端,設計并表達出了Tat-PTD-Endostatin-RGD,并驗證其活性,證明Tat-PTD-Endostatin-RGD具有好的抗細胞增殖活性、抗細胞遷移能力以及穿過血眼屏障的能力,并可以與眼底血管細胞表面受體特異性結合,使內皮抑素可以通過滴眼給藥達到眼底,抑制視網膜血管生成。但是,前期實驗所制備的Tat-PTD-Endostatin-RGD是以包涵體的形式表達,產率不高;另外Tat-PTD-Endostatin-RGD不穩(wěn)定,在放置過程中易于沉淀,不利于將來的開發(fā)應用�；谶@些問題,本論文研究Tat-PTD-Endostatin-RGD 的規(guī)�；苽浼皟龈芍苿�,為 Tat-PTD-Endostatin-RGD的新藥開發(fā)奠定基... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?Ｔａｔ－ＰＴＤ－Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ－ＲＧＤ可溶性表達的￡．ｃｏ／／菌種及誘導劑的選擇??

３．２?Ｔａｔ－ＰＴＤ－Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ－ＲＧＤ可溶性表達蛋白的純化??選用３種濃度的沖洗緩沖液對上樣且平衡完成的ＮＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱子進行沖??洗，收集洗脫緩沖液進行電泳結果見圖２－２，使用ＢａｎｄＳｃａｎ?５．０對結果進行處理，??在２６?ｋＤ，目的蛋白分子量處，發(fā)現使用４５?ｍｍｏｌ／Ｌ咪挫的Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ沖洗緩沖??液最后洗脫后目的蛋白含量最局。??進行二次純化的結果見圖２－３，發(fā)現ＵＶ２８〇有兩個吸收峰，分別收集組分電泳??后使用ＢａｎｄＳｃａｎ５．０對結果進行處理，見圖２－４。經過Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ進行初步純化??后目的蛋白純度約為５９％，使用Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０進行二次純化后的目的蛋白純度約??為９０．９％。ＢＣＡ試劑盒測定純化蛋白含量，每升￡．ｃｏ／／Ｏｒｉｇａｍｉ２（ＤＥ３）可純化出約??１．３?ｍｇ可溶性目的蛋白。??Ｍｌ?２?Ｍ３??２６?ｋＤ?卓??２０ｋＤ?ｎｍｎｎｉｍｉ邊??圖２－２使用不同濃度沖洗緩沖液后純化蛋白??Ｍ．蛋白分子量標準；１．４５ｍｍｏｌ／Ｌ咪哩；２．４０ｍｍｏｌ／Ｌ咪哩；３．３５ｍｍｏｌ／Ｌ咪挫??Ｆｉｇ．?２

?１１０??１１＾??圖２－３?Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０層析分離結果??Ｆｉｇ．?２－３?Ｅｌｕｔｉｏｎ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ?ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ．（見實驗??記錄０００２１６５－ｐｌ８）??１?２?３?４?５?６?Ｍ??一?？?＿＿???６６?ｋＤ??ｔ通?—?４５?ｋＤ??—?—?３３?，Ｄ??二二．－一卜?２６ｋＤ??、鋒％?２０?ｋＤ??”?１４．４?ｋＤ????』??圖２－４目的蛋白親和層析純化結果??Ｌ流穿液；２．Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ平衡緩沖液；３．Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ沖洗緩沖液；４．??Ｎｉ２＋－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ洗脫緩沖液；５，?Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０第一峰；６．?Ｓｅｐｈｄｅｘ－Ｇ５０第二峰；Ｍ??標


本文編號：3575826