本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)效靶向紫杉醇脂質(zhì)體的制備及其抗腫瘤作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:長(zhǎng)效靶向脂質(zhì)體具有選擇性地靶向于腫瘤細(xì)胞受體位點(diǎn),提高腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的攝取,降低藥物在正常組織的蓄積及延長(zhǎng)藥物半衰期等優(yōu)點(diǎn)。因此本論文旨在利用項(xiàng)目組自主制備的雌酮靶向片段,研制一種能夠特異性靶向于乳腺癌細(xì)胞表面過度表達(dá)的雌激素受體的長(zhǎng)效靶向紫杉醇脂質(zhì)體,提高紫杉醇的腫瘤靶向性及治療效果。并對(duì)該制劑的表征、體外靶向性、體內(nèi)靶向性以及體外、體內(nèi)抗腫瘤效果進(jìn)行研究。方法:(1)采用高效液相色譜法建立紫杉醇的含量測(cè)定方法,并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證;采用薄膜水化法制備4種不同紫杉醇脂質(zhì)體制劑,即紫杉醇普通脂質(zhì)體(L-PTX)、紫杉醇靶向脂質(zhì)體(ES-L-PTX)、紫杉醇長(zhǎng)效脂質(zhì)體(SSL-PTX)和紫杉醇長(zhǎng)效靶向脂質(zhì)體(ES-SSL-PTX)。分別對(duì)這四種脂質(zhì)體制劑進(jìn)行表征研究:通過透射電鏡觀察脂質(zhì)體形態(tài),動(dòng)態(tài)光散射粒徑分析儀測(cè)定粒徑分布和Zeta電位,采用低速離心法測(cè)定脂質(zhì)體包封率及載藥量,并考察脂質(zhì)體在不同溫度下儲(chǔ)藏的穩(wěn)定性。(2)通過熒光顯微鏡觀察MCF-7細(xì)胞對(duì)加載了羅丹明熒光染料的四種脂質(zhì)體制劑的攝取情況,以此驗(yàn)證長(zhǎng)效靶向脂質(zhì)體體外靶向作用。為觀察長(zhǎng)效靶向脂質(zhì)體進(jìn)入細(xì)胞的途徑,通過加入不同細(xì)胞內(nèi)吞抑制劑并在熒光顯微鏡下觀察MCF-7細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)效靶向脂質(zhì)體的攝取情況而進(jìn)行內(nèi)吞機(jī)制的評(píng)價(jià)。(3)以MCF-7細(xì)胞荷瘤裸鼠為模型,注射DiR脂質(zhì)體進(jìn)行活體成像實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證長(zhǎng)效靶向脂質(zhì)體在動(dòng)物體內(nèi)的靶向作用。(4)為考察紫杉醇長(zhǎng)效靶向脂質(zhì)體的抗腫瘤特性,采用MTT比色法分別對(duì)紫杉醇和四種紫杉醇脂質(zhì)體制劑的細(xì)胞毒作用進(jìn)行測(cè)定。(5)選取MCF-7細(xì)胞荷瘤小鼠模型尾靜脈注射不同紫杉醇制劑進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤作用研究。結(jié)果:(1)本文成功制備出L-PTX、ES-L-PTX、SSL-PTX和ES-SSL-PTX四種紫杉醇脂質(zhì)體,粒徑在120nm~140nm范圍,PDI在0.1~0.2范圍內(nèi),粒徑分布范圍窄,脂質(zhì)體帶有一定負(fù)電荷。包封率在86.0%~88.0%之間,載藥量為6.1%~7.5%范圍內(nèi),具有較高的包封率和載藥量,能夠滿足臨床給藥濃度的需求,且在4℃條件下儲(chǔ)存48h內(nèi)穩(wěn)定;(2)脂質(zhì)體體外靶向性的研究結(jié)果證實(shí)ES-L-RhB和ES-SSL-RhB均對(duì)MCF-7細(xì)胞具有主動(dòng)靶向作用,且ES-SSL-RhB具有長(zhǎng)效作用。加入游離ES作為競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑進(jìn)行靶向作用研究,實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了ES-SSL-RhB通過雌激素受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞的推論。內(nèi)吞機(jī)制研究結(jié)果表明,除受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用外,巨胞飲和小窩蛋白依賴的內(nèi)吞作用是長(zhǎng)效靶向脂質(zhì)體進(jìn)入細(xì)胞的主要途徑;(3)脂質(zhì)體體內(nèi)靶向性結(jié)果表明ES-SSL-DiR在腫瘤中的熒光強(qiáng)度顯著強(qiáng)于SSL-DiR,證明ES-SSL-DiR的確具有靶向作用,可以快速地、特異性地識(shí)別腫瘤表面過表達(dá)的雌激素受體,顯著增加藥物在腫瘤部位的積累量。(4)體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明前期工作制備的五種紫杉醇制劑對(duì)MCF-7細(xì)胞的毒性作用由強(qiáng)到弱依次為:ES-SSL-PTX、SSL-PTX、ES-L-PTX、L-PTX、PTX,ES-SSL-PTX的抗腫瘤效果顯著高于其他四種制劑。(5)體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明ES-SSL-PTX作為紫杉醇的藥物載體,能夠增強(qiáng)紫杉醇抗腫瘤活性,降低紫杉醇的毒副作用,具有更強(qiáng)的抑瘤效果。結(jié)論:本論文成功制備的長(zhǎng)效靶向紫杉醇脂質(zhì)體制劑(ES-SSL-PTX)具有長(zhǎng)循環(huán)作用可以增加紫杉醇在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的積累;此脂質(zhì)體制劑能夠特異性主動(dòng)靶向于人乳腺癌細(xì)胞表面上高表達(dá)的雌激素受體,由此可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)紫杉醇的攝取量,顯著提高抗腫瘤療效并降低毒副作用。因此,本論文研制的長(zhǎng)效靶向紫杉醇脂質(zhì)體制劑(ES-SSL-PTX)是一種可應(yīng)用于臨床,對(duì)乳腺癌治療具有巨大潛力的新型靶向抗腫瘤給藥載體系統(tǒng)。
【關(guān)鍵詞】：紫杉醇 脂質(zhì)體 靶向 雌激素受體 乳腺癌 抗腫瘤
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943;R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮略詞表11-12
• 第1章 緒論12-22
• 1.1 乳腺癌簡(jiǎn)介12
• 1.2 乳腺癌的治療12-13
• 1.3 紫杉醇制劑研究進(jìn)展13-16
• 1.3.1 紫杉醇膠束制劑14
• 1.3.2 水溶性前體藥物14
• 1.3.3 乳劑14-15
• 1.3.4 人血清白蛋白納米粒15-16
• 1.3.5 脂質(zhì)體16
• 1.4 脂質(zhì)體研究進(jìn)展16-19
• 1.4.1 被動(dòng)靶向脂質(zhì)體——空間穩(wěn)定脂質(zhì)體17-18
• 1.4.2 主動(dòng)靶向脂質(zhì)體——配體靶向脂質(zhì)體18-19
• 1.5 雌激素受體19-20
• 1.6 立題依據(jù)20-22
• 第2章 脂質(zhì)體制備及表征22-33
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑22-23
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器22
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑22-23
• 2.1.3 試劑配制23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-25
• 2.2.1 紫杉醇高效液相檢測(cè)方法的建立23-24
• 2.2.2 紫杉醇脂質(zhì)體的制備24
• 2.2.3 紫杉醇脂質(zhì)體表征研究24-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論25-32
• 2.3.1 紫杉醇高效液相檢測(cè)方法的建立25-28
• 2.3.2 紫杉醇脂質(zhì)體表征28-32
• 2.4 結(jié)論32-33
• 第3章 脂質(zhì)體靶向性研究33-51
• 3.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑33-35
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器33
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑33-34
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)用腫瘤細(xì)胞系34
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物34
• 3.1.5 試劑配制34-35
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法35-38
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)35
• 3.2.2 脂質(zhì)體體外靶向性驗(yàn)證35-37
• 3.2.3 脂質(zhì)體內(nèi)吞機(jī)制研究37
• 3.2.4 脂質(zhì)體體內(nèi)靶向性驗(yàn)證37-38
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論38-49
• 3.3.1 脂質(zhì)體體外靶向性驗(yàn)證38-45
• 3.3.2 脂質(zhì)體內(nèi)吞機(jī)制研究45-47
• 3.3.3 脂質(zhì)體體內(nèi)靶向性研究結(jié)果47-49
• 3.4 小結(jié)49-51
• 第4章 脂質(zhì)體抗腫瘤作用研究51-59
• 4.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑51-52
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器51
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑51
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)用腫瘤細(xì)胞系51-52
• 4.1.4 實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物52
• 4.1.5 試劑配制52
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法52-53
• 4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)52
• 4.2.2 體外抗腫瘤作用研究52-53
• 4.2.3 體內(nèi)抗腫瘤作用研究53
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論53-57
• 4.3.1 體外抗腫瘤作用研究結(jié)果53-56
• 4.3.2 體內(nèi)抗腫瘤作用研究結(jié)果56-57
• 4.4 小結(jié)57-59
• 結(jié)論59-61
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 作者簡(jiǎn)介66-67
• 致謝67

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