發(fā)布時(shí)間：2017-05-04 10:11

  本文關(guān)鍵詞：左旋甲氟喹改善神經(jīng)病理性疼痛藥效學(xué)機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：神經(jīng)病理性疼痛是由于機(jī)體神經(jīng)系統(tǒng)損傷或者疾病刺激而產(chǎn)生的痛覺過敏現(xiàn)象,疼痛表現(xiàn)為自發(fā)性、感覺異常及痛覺超敏等。作為慢性疼痛的一種,該病病程長,常常伴隨患者終生,嚴(yán)重影響患者的日常生活。目前對(duì)于病理性疼痛尚無可靠的藥物及治療方式,原因是對(duì)于其發(fā)病機(jī)制了解的并不清楚,因此研究其發(fā)病機(jī)制乃至治療手段具有重要的社會(huì)價(jià)值。其中脊髓的中樞敏感化在病理性疼痛的形成中起到重要作用,中樞敏感化是指脊髓神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)突觸傳遞效能的增強(qiáng),能夠?qū)ν鈦淼奶弁创碳ば盘?hào)產(chǎn)生放大作用。這其中包括神經(jīng)元突觸之間興奮性神經(jīng)遞質(zhì)釋放量增多、化學(xué)突觸上離子通道開放增強(qiáng)、突觸結(jié)構(gòu)發(fā)生可塑性變化、抑制性中間神經(jīng)活動(dòng)減弱等。痛覺的產(chǎn)生和學(xué)習(xí)記憶具有相似的神經(jīng)標(biāo)記及網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。脊髓的中樞敏感化和大腦的學(xué)習(xí)記憶都會(huì)使神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)發(fā)生可塑性變化。研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生后可以在脊髓背角C-纖維誘導(dǎo)產(chǎn)生LTP,我們知道LTP是大腦學(xué)習(xí)記憶基本方式。新的學(xué)習(xí)記憶的鞏固需要相關(guān)腦區(qū)合成新的蛋白質(zhì),如果該過程被蛋白合成抑制劑阻斷掉,那么將會(huì)影響到學(xué)習(xí)記憶的再鞏固過程。有研究發(fā)現(xiàn)在給大鼠的腳掌注射辣椒素能夠形成短期的炎癥疼痛,這種持續(xù)的疼痛會(huì)刺激大鼠產(chǎn)生痛覺過敏,如果通過相同的刺激重新激活大鼠脊髓的中樞敏感化過程并注射蛋白合成抑制劑,就能夠使大鼠已經(jīng)形成的痛覺過敏發(fā)生逆轉(zhuǎn)。這些報(bào)道提示我們或許可以從脊髓背角疼痛模擬記憶的再鞏固角度來探究治療神經(jīng)病理性疼痛,像消除恐懼記憶一樣來消除疼痛記憶。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究發(fā)現(xiàn),腹腔注射甲氟喹或其異構(gòu)體能夠預(yù)防神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生。甲氟喹作為一種電突觸的阻斷劑,其緩解神經(jīng)病理性疼痛的原因可能是抑制了神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的興奮性�；谏鲜隼碚�,本課題首先在坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型的基礎(chǔ)上對(duì)SD大鼠進(jìn)行二次CCI手術(shù),對(duì)單次及二次手術(shù)的疼痛行為學(xué)效果進(jìn)行評(píng)估,同時(shí)觀察二次手術(shù)對(duì)大鼠的生理狀態(tài)的影響,接著探究在二次手術(shù)刺激后不同時(shí)間窗注射左旋甲氟喹對(duì)大鼠已經(jīng)形成的神經(jīng)病理性疼痛的作用,同時(shí)觀察二次手術(shù)后注射左旋甲氟喹對(duì)于大鼠的生理狀態(tài)、學(xué)習(xí)記憶、情緒等的影響,并檢測大鼠不同腦區(qū)中樞敏感化相關(guān)突觸可塑性分子的變化情況,在分子層面探究左旋甲氟喹的藥效學(xué)機(jī)制。首先,我們根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道脊髓背角模擬記憶的再鞏固能夠逆轉(zhuǎn)病理性疼痛痛覺過敏的研究結(jié)果,我們?cè)O(shè)計(jì)了在CCI術(shù)后進(jìn)行再次CCI手術(shù)刺激。首先對(duì)大鼠進(jìn)行CCI手術(shù),5天和10天對(duì)大鼠進(jìn)行二次CCI手術(shù)。術(shù)后我們觀察,二次手術(shù)同單次手術(shù)的手術(shù)效果及對(duì)大鼠生理狀態(tài)和情緒的影響。結(jié)果顯示,二次CCI手術(shù)同單次手術(shù)相比大鼠的機(jī)械和熱敏痛閾值變化一致。且二次手術(shù)并不會(huì)對(duì)大鼠的體重及攝食量、活動(dòng)量及情緒產(chǎn)生額外影響。因此,二次CCI手術(shù)在模擬我們假設(shè)的基礎(chǔ)上,是一種穩(wěn)定可靠的大鼠疼痛手術(shù)刺激方式。接著,我們?yōu)樘骄吭诙蜟CI手術(shù)情況下左旋甲氟喹對(duì)于神經(jīng)病理性疼痛的作用。將實(shí)驗(yàn)大鼠分為四組,二次手術(shù)給藥(15mg/kg)及生理鹽水組、單次手術(shù)給藥及生理鹽水組。為了探究二次手術(shù)及給藥的時(shí)間窗,我們?cè)O(shè)計(jì)了在第5天(連續(xù)5天注射)及第10(二次手術(shù)前3天連續(xù)注射、二次手術(shù)后連續(xù)5天注射)分別進(jìn)行二次CCI手術(shù),術(shù)后進(jìn)行疼痛行為學(xué)檢測。結(jié)果顯示,在單次手術(shù)后第5天進(jìn)行二次CCI手術(shù)并注射左旋甲氟喹對(duì)于機(jī)械痛和熱敏痛均有明顯的緩解作用：而在第10天進(jìn)行二次CCI手術(shù)并注射左旋甲氟喹(二次手術(shù)后連續(xù)5天注射)對(duì)熱敏痛具有明顯緩解作用,但對(duì)于機(jī)械痛無明顯效果。第10天進(jìn)行二次CCI手術(shù)并注射左旋甲氟喹(二次手術(shù)前3天連續(xù)注射)對(duì)于熱敏痛具有明顯緩解作用,且效果好于二次手術(shù)后連續(xù)5次給藥組,但機(jī)械痛仍無明顯變化。再次,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,左旋甲氟喹對(duì)于大鼠的神經(jīng)病理性疼痛具有一定的改善作用。左旋甲氟喹作為一種能夠改善神經(jīng)病理性疼痛的藥物,其藥物毒副研究非常重要。我們首先探究了在二次CCI手術(shù)情況下注射左旋甲氟喹對(duì)于大鼠體重、攝食量、活動(dòng)量、疼痛感知能力及生化指標(biāo)的影響,同時(shí)還探究其對(duì)于大鼠情緒狀態(tài)及學(xué)習(xí)記憶的影響。大鼠腹腔注射左旋甲氟喹期間體重有輕微波動(dòng),攝食量出現(xiàn)明顯下降。同時(shí)左旋甲氟喹在改善神經(jīng)病理性疼痛的同時(shí)能夠明顯緩解大鼠焦慮情緒。利用LC-MS方法來檢測大鼠不同腦區(qū)組織中左旋甲氟喹的濃度。結(jié)果顯示,同其他腦區(qū)相比第7天及第10天脊髓中藥物含量都是最高,這提示著左旋甲氟喹對(duì)脊髓的藥物作用可能最強(qiáng)。最后,為了探究左旋甲氟喹改善神經(jīng)病理性疼痛的中樞敏感化的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)主要查看了突觸可塑性分子p-ERK1/2、PKC及NR2B的表達(dá)變化情況。實(shí)驗(yàn)分組為二次CCI手術(shù)生理鹽水組、二次CCI手術(shù)左旋甲氟喹組及Sham組。于單次手術(shù)后第15天處死大鼠,分別取脊髓L4-L6段、前扣帶回及海馬,提取蛋白,進(jìn)行免疫蛋白印記檢測。結(jié)果顯示、二次CCI手術(shù)生理鹽水組p-ERK1/2、 PKC δ及NR2B均出現(xiàn)不同程度上調(diào),尤其是脊髓區(qū)上調(diào)非常明顯。脊髓區(qū)二次CCI手術(shù)左旋甲氟喹組p-ERK1/2、PKCδ及NR2B均出現(xiàn)不同程度下調(diào),尤其是NR2B下調(diào)極明顯。前扣帶回區(qū)二次CCI手術(shù)左旋甲氟喹組只有p-ERK1/2下調(diào)明顯。海馬區(qū)p-ERK1/2、PKCδ及NR2B均無明顯變化。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)病理性疼痛 坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型 二次CCI手術(shù) 再鞏固 左旋甲氟喹 中樞敏感化 脊髓背角 疼痛模擬記憶
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-16
• 第一章 坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型的建立16-30
• 前言16-18
• 1 材料18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 1.2 試劑及耗材18
• 1.3 設(shè)備儀器18
• 2 方法18-22
• 2.1 單次及二次CCI手術(shù)18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)流程19
• 2.3 機(jī)械痛閾值行為學(xué)檢測19-20
• 2.4 熱敏痛閾值行為學(xué)檢測20
• 2.5 體重和攝食量變化20-21
• 2.6 曠場實(shí)驗(yàn)21
• 2.7 數(shù)據(jù)分析21-22
• 3 結(jié)果22-28
• 3.1 大鼠單次及二次手術(shù)過程和術(shù)后狀態(tài)表征22-23
• 3.2 大鼠單次及二次手術(shù)后熱敏和機(jī)械痛閾值變化23-25
• 3.3 大鼠單次及二次手術(shù)后體重和攝食量變化25-26
• 3.4 大鼠單次及二次手術(shù)后運(yùn)動(dòng)能力及焦慮情緒變化26-28
• 4 討論28-30
• 第二章 左旋甲氟喹改善神經(jīng)病理性疼痛的藥效學(xué)研究30-41
• 前言31-32
• 1 材料32-33
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物32
• 1.2 試劑及耗材32-33
• 1.3 設(shè)備儀器33
• 2 方法33-34
• 2.1 單次及二次CC I手術(shù)33
• 2.2 實(shí)驗(yàn)流程33-34
• 2.3 機(jī)械和熱敏痛閾值行為學(xué)檢測34
• 2.4 數(shù)據(jù)分析34
• 3 結(jié)果34-39
• 3.1 左旋甲氟喹對(duì)第5天二次手術(shù)大鼠機(jī)械和熱敏痛的影響34-36
• 3.2 左旋甲氟喹對(duì)第10天二次手術(shù)大鼠機(jī)械和熱敏痛的影響36-37
• 3.3 左旋甲氟喹對(duì)第10天二次手術(shù)前給藥大鼠機(jī)械和熱敏痛的影響37-39
• 4 討論39-41
• 第三章 左旋甲氟喹改善大鼠神經(jīng)病理性疼痛對(duì)其生理狀態(tài)、學(xué)習(xí)記憶及情緒的影響和腦區(qū)組織分布情況41-57
• 前言42-43
• 0 材料43-44
• 0.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物43
• 0.2 試劑及耗材43-44
• 0.3 設(shè)備儀器44
• 1 方法44-47
• 1.1 攝食量和體重變化44
• 1.2 曠場實(shí)驗(yàn)44-45
• 1.3 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)45
• 1.4 T迷宮實(shí)驗(yàn)45-46
• 1.5 大鼠生化指標(biāo)測定46
• 1.6 機(jī)械和熱敏痛閾值測定46
• 1.7 給藥后各腦區(qū)藥物組織分布實(shí)驗(yàn)46-47
• 1.8 數(shù)據(jù)分析47
• 2 結(jié)果47-55
• 2.1 左旋甲氟喹對(duì)二次手術(shù)大鼠體重和攝食量影響47-48
• 2.2 左旋甲氟喹對(duì)二次手術(shù)大鼠活動(dòng)量和焦慮影響48-49
• 2.3 左旋甲氟喹對(duì)二次手術(shù)大鼠焦慮情緒影響49-51
• 2.4 左旋甲氟喹對(duì)二次手術(shù)大鼠空間記憶影響51-52
• 2.5 左旋甲氟喹對(duì)二次手術(shù)大鼠生化指標(biāo)影響52
• 2.6 左旋甲氟喹對(duì)大鼠疼痛感知能力影響52-53
• 2.7 左旋甲氟喹腦區(qū)組織分布實(shí)驗(yàn)53-55
• 3 討論55-57
• 第四章 左旋甲氟喹對(duì)二次CC I手術(shù)大鼠中樞敏感化相關(guān)可塑性分子的影響57-76
• 前言58-59
• 0 材料59-62
• 0.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物59
• 0.2 試劑及耗材59-62
• 0.3 實(shí)驗(yàn)儀器62
• 1 實(shí)驗(yàn)方法62-64
• 1.1 組織蛋白提取62
• 1.2 蛋白定量62-63
• 1.3 SDS-PAGE凝膠電泳63
• 1.4 轉(zhuǎn)膜、孵育及顯影63
• 1.5 數(shù)據(jù)分析63-64
• 2 結(jié)果64-73
• 2.1 左旋甲氟喹對(duì)二次手術(shù)大鼠脊髓區(qū)P-ERK1/2、PKC△及NR2B表達(dá)的影響64-67
• 2.2 左旋甲氟喹對(duì)二次手術(shù)大鼠前扣帶回區(qū)P-ERK1/2、PKC△及NR2B表達(dá)的影響67-70
• 2.3 左旋甲氟喹對(duì)二次手術(shù)大鼠海馬區(qū)P-ERK1/2、PKC△及NR2B表達(dá)的影響70-73
• 3 討論73-76
• 第五章 結(jié)論及存在的問題76-78
• 第六章 文獻(xiàn)綜述78-83
• 1 神經(jīng)病理性疼痛和中樞敏感化78-80
• 2 中樞敏感化和記憶突觸可塑性80-81
• 3 脊髓背角模擬記憶的再鞏固及痛覺過敏的逆轉(zhuǎn)81-83
• 參考文獻(xiàn)83-89
• 致謝89

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Cuiping Mao;Longxiao Wei;Qiuli Zhang;Xia Liao;Xiaoli Yang;Ming Zhang;;Differences in brain structure in patients with distinct sites of chronic pain:A voxel-based morphometric analysis[J];Neural Regeneration Research;2013年32期

2 劉先國;;外周神經(jīng)損傷引起病理性疼痛的機(jī)制[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2009年06期

3 ;Activation of ERK/CREB pathway in spinal cord contributes to chronic constrictive injury-induced neuropathic pain in rats[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年07期

  本文關(guān)鍵詞：左旋甲氟喹改善神經(jīng)病理性疼痛藥效學(xué)機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：344876