本文關(guān)鍵詞：殼聚糖修飾多西他賽固體脂質(zhì)納米粒的構(gòu)建及口服吸收機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:制備殼聚糖(CS)及羥丙基三甲基氯化銨殼聚糖(HACC)修飾的多西他賽(DTX)固體脂質(zhì)納米粒(SLNs),并研究其口服生物利用度的改善機(jī)制。方法:采用乳化溶劑揮發(fā)法,制備DTX固體脂質(zhì)納米粒(DTX-SLNs),隨后通過靜電吸附的方式對(duì)納米粒表面進(jìn)行CS及HACC修飾。對(duì)制得的三種固體脂質(zhì)納米粒(DTX-SLNs,CS-DTX-SLNs,HACC-DTX-SLNs)進(jìn)行理化性質(zhì)表征,考察納米粒在模擬胃腸液中的穩(wěn)定性,考察納米粒在p H 1.2及p H 6.8介質(zhì)中的釋放行為,采用X射線衍射(XRD)、差式掃描量熱(DSC)及傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)等方法觀察藥物在納米粒中的變化。MTT法檢測(cè)三種納米粒對(duì)Caco-2細(xì)胞存活率的影響。建立Caco-2及FAE兩種單層細(xì)胞模型,通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、測(cè)定跨膜電阻值、監(jiān)測(cè)模型兩側(cè)堿性磷酸酶的分化及免疫熒光等方法確證模型的建立。采用高效液相色譜(HPLC)、流式細(xì)胞儀、共聚焦及熒光顯微鏡考察不同納米粒在兩種細(xì)胞模型上的攝取及轉(zhuǎn)運(yùn)�？疾烊N納米粒對(duì)跨膜電阻及細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白的作用。對(duì)HACC修飾納米粒進(jìn)行吸收機(jī)制的考察。隨后進(jìn)行三種納米粒在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)評(píng)價(jià);利用小動(dòng)物成像儀觀察包裹香豆素6的納米粒(HACC-C6-SLNs)在大鼠體內(nèi)的組織分布,并對(duì)胃腸道組織進(jìn)行HE染色考察其組織安全性。結(jié)果:通過對(duì)DTX-SLNs的表面修飾及其理化表征,成功制得CS-DTX-SLNs及HACC-DTX-SLNs。與CS-DTX-SLNs相比,HACC-DTX-SLNs在模擬胃腸液中能穩(wěn)定存在,且制得的三種納米粒對(duì)藥物的釋放具有一定的控釋效果。Caco-2及FAE單層細(xì)胞模型相關(guān)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果表明,2種細(xì)胞模型均已成功建立。三種空白載體對(duì)Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)均無顯著影響。Caco-2細(xì)胞攝取HACC-DTX-SLNs的能力顯著大于DTX-SLNs和CS-DTX-SLNs,表明納米粒經(jīng)季銨鹽殼聚糖修飾后能促進(jìn)攝取。FAE單層膜型轉(zhuǎn)運(yùn)納米粒的能力強(qiáng)于Caco-2單層模型。攝取機(jī)制研究表明,Caco-2細(xì)胞主要通過小窩蛋白途徑攝取HACC-C6-SLNs,網(wǎng)格蛋白及大胞飲途徑具有輔助作用。三種納米粒均對(duì)緊密連接相關(guān)蛋白具有一定的下調(diào)作用,HACC-SLNs對(duì)緊密連接的影響最顯著且這種下調(diào)作用具有可逆性。CS-DTX-SLNs和HACC-DTX-SLNs顯著降低Caco-2單層細(xì)胞膜的TEER值,隨著納米粒的移除,TEER值逐漸恢復(fù)。藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果表明,與DTX對(duì)照組相比,HACC-DTX-SLNs組AUC值增加2.45倍。胃腸道攝取結(jié)果顯示,HACC-C6-SLNs主要通過回腸段吸收進(jìn)入體內(nèi),且在Peyer’s結(jié)的吸收強(qiáng)于普通小腸段。組織安全性結(jié)果表明,納米粒對(duì)胃腸道黏膜沒有刺激性。結(jié)論:成功制備殼聚糖修飾多西他賽固體脂質(zhì)納米粒,其中HACC-DTX-SLNs穩(wěn)定性好,并顯著提高藥物口服生物利用度,其促吸收機(jī)制依賴于跨膜內(nèi)吞途徑、細(xì)胞旁路途經(jīng)及M細(xì)胞吞噬的共同作用。本研究為多西他賽的新型固體脂質(zhì)納米粒的設(shè)計(jì)和闡明其口服吸收機(jī)制提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：固體脂質(zhì)納米粒 多西他賽 殼聚糖 羥丙基三甲基氯化銨殼聚糖 吸收機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-19
• 1 固體脂質(zhì)納米粒11
• 2 納米粒在腸道的吸收機(jī)制11-16
• 2.1 腸道生理結(jié)構(gòu)11-13
• 2.2 腸道吸收屏障13-14
• 2.3 體外腸細(xì)胞模型14-15
• 2.4 納米粒在腸道的攝取及轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制15-16
• 3 本文立題依據(jù)及研究?jī)?nèi)容16-19
• 第二章 多西他賽固體脂質(zhì)納米粒的制備19-33
• 1 材料及儀器19-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 2.1 固體脂質(zhì)納米粒的制備20-21
• 2.2 粒徑大小和表面電位21
• 2.3 包封率與載藥量21
• 2.4 體外穩(wěn)定性21
• 2.5 體外釋放度21
• 2.6 透射電鏡21-22
• 2.7 X射線衍射（XRD）22
• 2.8 差示掃描量熱（DSC）22
• 2.9 傅里葉變換紅外光譜（FT-IR）22
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-32
• 3.1 表面活性劑篩選22-23
• 3.2 載藥固體脂質(zhì)納米粒的制備及理化表征23-24
• 3.3 修飾固體脂質(zhì)納米粒的制備及理化表征24-26
• 3.4 凍干條件篩選26-27
• 3.5 透射電鏡27-28
• 3.6 穩(wěn)定性28-29
• 3.7 體外釋放度29
• 3.8 X射線衍射（XRD）29-30
• 3.9 差示掃描量熱（DSC）30-31
• 3.10 傅里葉變換紅外光譜（FT-IR）31-32
• 4 本章小結(jié)32-33
• 第三章Caco-2 與FAE單層細(xì)胞模型的建立及評(píng)價(jià)33-41
• 1 材料與儀器33-34
• 2 實(shí)驗(yàn)方法34-36
• 2.1 Caco-2 細(xì)胞的培養(yǎng)及驗(yàn)證34-35
• 2.2 FAE單層細(xì)胞模型建立及驗(yàn)證35-36
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-40
• 3.1 光學(xué)顯微鏡36
• 3.2 生長(zhǎng)活力36-37
• 3.3 Caco-2 單層跨膜電阻（TEER）37-38
• 3.4 ALP活性38
• 3.5 FAE單層跨膜電阻（TEER）38-39
• 3.6 免疫熒光39-40
• 4 本章小結(jié)40-41
• 第四章 固體脂質(zhì)納米粒的細(xì)胞學(xué)評(píng)價(jià)41-63
• 1 材料與儀器41-42
• 2 實(shí)驗(yàn)方法42-46
• 2.1 載體毒性42
• 2.2 Caco-2 單層細(xì)胞對(duì)固體脂質(zhì)納米粒的攝取42-44
• 2.3 FAE單層細(xì)胞對(duì)固體脂質(zhì)納米粒的攝取44
• 2.4 轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)44
• 2.5 吸收機(jī)制44-46
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-61
• 3.1 載體毒性46-47
• 3.2 Caco-2 單層細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取47-52
• 3.3 FAE單層細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取52-53
• 3.4 轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)53-55
• 3.5 吸收機(jī)制55-61
• 4 本章小結(jié)61-63
• 第五章 多西他賽固體脂質(zhì)納米粒的體內(nèi)研究63-73
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器63
• 2 實(shí)驗(yàn)方法63-66
• 2.1 藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)63-65
• 2.2 組織分布及peyer’s patch對(duì)納米粒的攝取65-66
• 2.3 納米粒對(duì)消化道黏膜的影響66
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果66-72
• 3.1 藥動(dòng)學(xué)結(jié)果66-67
• 3.2 組織分布及peyer’s patch對(duì)納米粒的攝取67-70
• 3.3 納米粒對(duì)消化道黏膜的影響70-72
• 4 本章小結(jié)72-73
• 全文總結(jié)73-75
• 參考文獻(xiàn)75-84
• 攻讀碩士學(xué)位期間科研成果84-85
• 致謝85-86

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