本文關(guān)鍵詞：蘋果多酚基于GLP-1受體途徑降糖作用的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:糖尿病(diabetes mellitus,DM)是由于胰島素分泌絕對不足或相對不足,引起糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝紊亂的疾病,初期血糖、尿糖增高,后期病情發(fā)展合并一系列的心、腎、眼底的微血管病變和神經(jīng)病變、感染和結(jié)核等。在1型和2型糖尿病中,胰島β細(xì)胞功能障礙都是關(guān)鍵的病理生理過程,其中胰島β細(xì)胞凋亡起著重要作用。目前臨床上治療2型糖尿病多采用化學(xué)合成藥治療,這些藥物降血糖的作用強、起效快,但是存在不同程度的副作用,如低血糖、肝腎功能損害,而且不能阻止胰島細(xì)胞的凋亡。因此,尋找療效好、不良反應(yīng)小的新型降糖藥具有極其重要的意義。近年來基于GLP-1受體途徑的腸促胰島素類似物,逐漸進入人們的視野并成為最新研究熱點。蘋果多酚(apple polyphenols,AP)是蘋果中天然存在的一類重要生物活性物質(zhì),其中包括:類黃酮類、單寧類、酚酸類及花色苷等。近幾年大量研究顯示,蘋果多酚具有多種活性,如抗氧化、抗腫瘤、抗齲齒等功效。前期實驗發(fā)現(xiàn)蘋果多酚能夠調(diào)節(jié)RIP1-CRE瞬時轉(zhuǎn)染的胰島β細(xì)胞中報告基因GFP的高表達(dá),發(fā)揮GLP-1受體激動劑作用。后期選用H2O2誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡,觀察蘋果多酚對胰島β細(xì)胞是否具有保護作用;通過多次小劑量注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病小鼠模型,并進行蘋果多酚預(yù)防性給藥,來觀察和分析蘋果多酚對糖尿病小鼠的降血糖作用及其基于GLP-1受體途徑的降糖機制。方法:1離體細(xì)胞水平1.1 RIP1-CRE瞬時轉(zhuǎn)染法觀察蘋果多酚對胰島β細(xì)胞中報告基因GFP表達(dá)的影響,驗證其GLP-1受體激動劑的作用。1.2 MTT法觀察蘋果多酚對RIN-m5F胰島β細(xì)胞的增殖的影響。1.3免疫熒光法觀察蘋果多酚對RIN-m5F胰島β細(xì)胞促胰島素釋放的影響。2 MTT法、AO/EB雙染色法觀察蘋果多酚對H2O2作用下RIN-m5F胰島β細(xì)胞活力及凋亡的影響,利用試劑盒測定細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA及SOD含量,并用western blot法分析細(xì)胞中與凋亡密切相關(guān)的Akt和Caspase-3蛋白表達(dá)的變化,從而明確蘋果多酚基于GLP-1受體途徑抗凋亡的作用靶點。3整體動物水平:3.1 2型糖尿病小鼠模型的建立:選取性成年ICR小鼠,多次小劑量腹腔注射STZ建立糖尿病小鼠模型。3.2觀察記錄蘋果多酚預(yù)防性給藥對糖尿病ICR小鼠的體重、攝食量、飲水量、尿量等生理代謝指標(biāo)的影響。3.3測定蘋果多酚預(yù)防性給藥對糖尿病ICR小鼠禁食血糖和非禁食血糖、血脂等生化指標(biāo)的影響。3.4觀察蘋果多酚預(yù)防性給藥對糖尿病ICR小鼠的胰腺系數(shù)的影響。3.5通過HE染色進行胰腺組織形態(tài)學(xué)觀察。3.6用胰島素免疫組化分析觀察蘋果多酚對胰腺的細(xì)胞數(shù)量,胰腺質(zhì)量和其組織構(gòu)造的影響,從而評價蘋果多酚對胰島β細(xì)胞的保護調(diào)節(jié)作用。3.7利用Western Blot檢測GLP-1受體下游重要分子PDX-1的表達(dá)量,從而確定蘋果多酚基于GLP-1受體途徑對胰島β細(xì)胞的保護作用機制。3.8半固體糊法觀察蘋果多酚對糖尿病小鼠腸推進和胃排空的影響。結(jié)果:1離體細(xì)胞水平:1.1蘋果多酚能夠調(diào)節(jié)RIP1-CRE瞬時轉(zhuǎn)染的胰島β細(xì)胞中報告基因GFP的高表達(dá),發(fā)揮GLP-1受體激動劑作用。1.2 MTT比色法結(jié)果顯示,AP給藥組細(xì)胞活力明顯增加(P0.01),且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。1.3免疫熒光結(jié)果顯示,AP給藥組胰島素陽性結(jié)果增加(P0.05)。1.4 H2O2誘導(dǎo)下,細(xì)胞活力顯著降低(P0.01),AP給藥組較陰性對照組,能較好地改善細(xì)胞存活度(P0.01),且呈一定的濃度依賴性。AO/EB染色法發(fā)現(xiàn)AP組較陰性對照組,細(xì)胞形態(tài)更加完好,凋亡明顯建少。AP還能增強細(xì)胞抗氧化能力(P0.05)。Western blot分析發(fā)現(xiàn),較陰性對照組,AP組能增強Akt的表達(dá)(P0.05),降低Caspase-3(P0.05)的表達(dá)。2整體動物水平:2.1各組體重、飲水量、攝食量、尿量比較:模型組小鼠體重較正常組有所下降(P0.05),飲水量、攝食量、墊料濕度明顯增加,而AP給藥組較模型組,體重變化無顯著性差異,但是更很好地降低飲水量、攝食量,改善墊料濕度。2.2各組禁食和非禁食血糖、血脂比較:模型組小鼠禁食及非禁食血糖、血脂較空白組顯著升高(P0.05),AP組更顯著降低糖尿病小鼠禁食和非禁食血糖(P0.05),但是對血中甘油三酯、總膽固醇含量無明顯影響。2.3各組胰腺系數(shù)比較:模型組小鼠較空白組胰腺系數(shù)明顯增大(P0.05),AP預(yù)防性給藥組較模型組胰腺系數(shù)顯著降低(P0.05)。2.4組織形態(tài)學(xué)觀察:一般病理學(xué)觀察,發(fā)現(xiàn)同糖尿病模型對照組相比,蘋果多酚給藥組糖尿病小鼠胰島數(shù)量明顯增加,但仍明顯少于正常對照組小鼠。同糖尿病模型對照組小鼠比較,胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)量有所增加,核固縮和胞漿空泡化減輕。2.5胰島素免疫組化分析:與正常組小鼠相比,糖尿病小鼠胰島素陽性表達(dá)面積減少,胰島β細(xì)胞數(shù)目減少,而蘋果多酚能增加陽性表達(dá)、胰島β細(xì)胞數(shù)目(P0.05)。2.6 PDX-1表達(dá)量比較:與正常組小鼠相比,糖尿病小鼠胰腺組織中PDX-1表達(dá)量明顯下降(P0.05),而蘋果多酚給藥組胰腺組織中PDX-1表達(dá)量顯著增強(P0.05)。2.7胃排空及腸推進:與對照組相比,蘋果多酚能減緩糖尿病小鼠的胃排空(P0.05)。結(jié)論:蘋果多酚能調(diào)節(jié)RIP1-CRE瞬時轉(zhuǎn)染的胰島β細(xì)胞中報告基因GFP的高表達(dá),發(fā)揮GLP-1受體激動劑作用。蘋果多酚還對RIN-m5F胰島β細(xì)胞具有促增值、促分泌作用,并且對H2O2誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡具有保護作用,增強細(xì)胞抗氧化能力,其機制可能與Akt表達(dá)上調(diào),Caspase-3表達(dá)下調(diào)有關(guān)。蘋果多酚預(yù)防性給藥可以改善多次小劑量注射STZ誘導(dǎo)的糖尿病ICR小鼠模型的非禁食血糖和禁食血糖水平,改善糖尿病ICR小鼠“三多一少”的癥狀,減緩胃排空,促進糖尿病ICR小鼠胰島素的分泌,增強對胰島素的敏感性,保護胰島β細(xì)胞,減少胰腺組織的損傷,使PDX-1蛋白表達(dá)上調(diào),從而明確了蘋果多酚基于GLP-1受體途徑對胰島β具有保護作用。為新型抗糖尿病藥物、降糖保健品的開發(fā)提供了新的靶點和研究方向。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 蘋果多酚 RIN-m5F胰島β細(xì)胞 H2O2 ICR小鼠 鏈脲佐菌素 GLP-1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-25
• 結(jié)果25-29
• 附圖29-46
• 附表46-48
• 討論48-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-62
• 綜述GLP-1 治療2型糖尿病的研究進展62-73
• 參考文獻66-73
• 致謝73-74
• 個人簡歷74

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 趙艷威;孫靜;宋光明;謝文利;;蘋果多酚的降血糖作用及機制研究[J];食品研究與開發(fā);2014年07期

2 李佳霖,李紅;胰高血糖素樣肽1抑制胰島β細(xì)胞凋亡的研究進展[J];中華糖尿病雜志;2005年05期

  本文關(guān)鍵詞：蘋果多酚基于GLP-1受體途徑降糖作用的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：342969