本文關(guān)鍵詞：索拉膠寡糖對小鼠腸道功能的調(diào)節(jié)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：索拉膠是由土壤桿菌ZX09分泌的一種結(jié)構(gòu)新穎的水溶性胞外p-1,3-葡聚糖,研究發(fā)現(xiàn)其具有多種生物學活性。以索拉膠多糖作為多糖降解菌的篩選底物,我們分離了一株索拉膠降解菌株S09。索拉膠降解菌S09可以分泌β-1,3-1,4-葡聚糖酶、p-1,3-葡聚糖酶和索拉膠水解酶。其中索拉膠水解酶Sa1A可以特異性水解索拉膠,水解終產(chǎn)物是分子量和結(jié)構(gòu)單一的索拉膠寡糖SO8。本課題進一步分析索拉膠寡糖S08的結(jié)構(gòu),并以C57BL/6J小鼠為實驗動物,探索了索拉膠寡糖對小鼠腸道功能的調(diào)節(jié)作用。實驗小鼠C57BL/6j在連續(xù)攝入含有索拉膠寡糖的食物后,相比攝取普通食物的小鼠,其排便量在第二、三、四周分別增加了93.7%,159.5%和87.5%,且糞便含水量也明顯升高。盲腸組織壁重和盲腸內(nèi)容物重占體重的百分比也分別升高了29.3%和65.7%。盲腸內(nèi)短鏈脂肪酸和乳酸水平也得到了提高。高通量測序數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示,索拉膠寡糖的攝入,改變了小鼠腸道內(nèi)微生物群落結(jié)構(gòu),腸道內(nèi)的兩種主要益生菌數(shù)量也得到了提高,乳酸桿菌的數(shù)量提高了2.33倍,雙歧桿菌的數(shù)量則比正常對照增加了7.06倍。實驗小鼠C57BL/6j通過連續(xù)4天飲用含有4% DSS的飲用水建立急性潰瘍性結(jié)腸炎(UC)模型,對索拉膠寡糖組小鼠進行連續(xù)6天每天20mg/kg劑量的索拉膠寡糖灌胃處理,結(jié)果顯示,相比DSS模型組,通過索拉膠寡糖灌胃處理,小鼠DSS誘導的UC程度有所減輕,小鼠的疾病活動指數(shù)有所下降,結(jié)腸縮短情況有所緩解,結(jié)腸長度增加了29.5%。索拉膠寡糖降低了結(jié)腸的組織損傷和病理學改變程度,降低了結(jié)腸組織內(nèi)隱窩結(jié)構(gòu)破壞程度,減輕了小鼠炎癥情況,抑制了結(jié)腸組織MPO活力的升高,MPO活力相比DSS組下降了51.1%。通過血常規(guī)檢測,發(fā)現(xiàn)索拉膠寡糖改善了UC小鼠的貧血癥狀,減輕了小鼠脾臟的增大,脾臟重量指數(shù)相比DSS組下降了33.37%。RT-PCR分析結(jié)果顯示索拉膠寡糖通過下調(diào)UC小鼠結(jié)腸組織內(nèi)TNF-α mRNA的表達(下降至模型組的46.2%),減輕了小鼠的炎癥反應。以上研究表明,索拉膠寡糖可以改善小鼠的腸道菌群,有作為一種益生元投入使用的潛能；索拉膠寡糖可以減輕急性結(jié)腸炎腸道損傷,有作為治療結(jié)腸炎藥物的應用潛能。
【關(guān)鍵詞】：功能性寡糖 索拉膠寡糖 腸道微生物 益生菌 潰瘍性結(jié)腸炎
【學位授予單位】：南京理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 1 緒論11-19
• 1.1 寡糖的研究進展11-15
• 1.1.1 寡糖的結(jié)構(gòu)和功能11
• 1.1.2 寡糖的來源11-13
• 1.1.3 寡糖的分離純化13
• 1.1.4 寡糖的生物學活性13-15
• 1.2 腸道與疾病15-16
• 1.2.1 腸道的結(jié)構(gòu)與功能15
• 1.2.2 腸道微生物與疾病15-16
• 1.3 索拉膠多糖及其寡糖16-17
• 1.3.1 索拉膠多糖16-17
• 1.3.2 索拉膠寡糖17
• 1.4 課題研究的意義、內(nèi)容和方法17-19
• 2 索拉膠寡糖的制備19-33
• 2.1 實驗材料19-21
• 2.1.1 實驗試劑19-20
• 2.1.2 培養(yǎng)基配方20
• 2.1.3 實驗儀器20-21
• 2.2 實驗方法21-26
• 2.2.1 索拉膠多糖的制備21-22
• 2.2.2 索拉膠水解酶Sa1A的制備22
• 2.2.3 索拉膠寡糖的制備與分離純化22-23
• 2.2.4 DNS法測定還原糖含量和酶活力23-24
• 2.2.5 苯酚硫酸法檢測總糖含量24-25
• 2.2.6 酶水解索拉膠制備索拉膠寡糖條件優(yōu)化25
• 2.2.7 索拉膠寡糖的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)研究25-26
• 2.3 結(jié)果與討論26-32
• 2.3.1 不同索拉膠濃度對水解反應的影響26-27
• 2.3.2 不同酶量對水解反應的影響27-28
• 2.3.3 索拉膠寡糖的紅外圖譜分析28
• 2.3.4 索拉膠寡糖的紫外光譜分析28-29
• 2.3.5 索拉膠寡糖的質(zhì)譜分析29-30
• 2.3.6 索拉膠寡糖的核磁共振分析30-32
• 2.4 本章小結(jié)32-33
• 3 索拉膠寡糖對小鼠腸道菌群的影響33-48
• 3.1 實驗材料33-35
• 3.1.1 實驗試劑33-34
• 3.1.2 實驗儀器34-35
• 3.1.3 實驗動物35
• 3.2 實驗方法35-40
• 3.2.1 索拉膠及其寡糖的制備以及食物的制作35-36
• 3.2.2 小鼠飼養(yǎng)36
• 3.2.3 實驗樣品采集36
• 3.2.4 組織切片制作與染色分析36-37
• 3.2.5 盲腸內(nèi)容物微生物總DNA的提取37
• 3.2.6 DNA的PCR擴增37-38
• 3.2.7 盲腸內(nèi)容物乳酸和短鏈脂肪酸測定38
• 3.2.8 熒光定量PCR檢測38-39
• 3.2.9 MiSeq宏基因組測序39-40
• 3.2.10 統(tǒng)計方法40
• 3.3 結(jié)果與討論40-46
• 3.3.1 索拉膠寡糖對小鼠體重、攝食量和排便量的影響40-41
• 3.3.2 索拉膠寡糖對小鼠腸道組織的影響41-42
• 3.3.3 索拉膠寡糖對小鼠盲腸重量以及盲腸內(nèi)乳酸和短鏈脂肪酸的影響42-43
• 3.3.4 索拉膠寡糖對小鼠盲腸微生物菌群的影響43-46
• 3.4 本章小結(jié)46-48
• 4 索拉膠寡糖對腸道損傷修復的影響48-66
• 4.1 實驗材料48-50
• 4.1.1 實驗試劑48-49
• 4.1.2 實驗儀器49-50
• 4.1.3 實驗動物50
• 4.2 實驗方法50-55
• 4.2.1 潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型的建立50
• 4.2.2 疾病活動指數(shù)的評價50-51
• 4.2.3 樣品采集51
• 4.2.4 血液學分析51-52
• 4.2.5 組織病理學分析52
• 4.2.6 髓過氧化物酶活力分析52-54
• 4.2.7 熒光定量PCR檢測54-55
• 4.2.8 統(tǒng)計方法55
• 4.3 實驗結(jié)果與討論55-64
• 4.3.1 索拉膠寡糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠攝食量和攝水量的影響56-57
• 4.3.2 索拉膠寡糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸長度和脾臟重量的影響57-58
• 4.3.3 索拉膠寡糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠疾病活動指數(shù)的影響58-60
• 4.3.4 索拉膠寡糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠血液學參數(shù)的影響60-62
• 4.3.5 索拉膠寡糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織損傷及病理學的影響62-63
• 4.3.6 索拉膠寡糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸內(nèi)髓過氧化物酶活力的影響63-64
• 4.3.7 索拉膠寡糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸內(nèi)TNF-a表達的影響64
• 4.4 本章小結(jié)64-66
• 5 結(jié)論與展望66-68
• 5.1 研究小結(jié)66-67
• 5.2 本文創(chuàng)新點67
• 5.3 本課題的發(fā)展趨勢67-68
• 致謝68-69
• 參考文獻69-76
• 附錄76

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳琳娟;陳藝勤;張玲;龐杰;;低分子糖抗腫瘤活性的研究進展[J];精細與專用化學品;2010年06期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 張在紅;兩種天然抗菌糖綴合物及衍生物的合成[D];中國海洋大學;2010年

2 李紅燕;寬礁膜抗凝血活性多糖及其寡糖的制備和結(jié)構(gòu)研究[D];中國海洋大學;2011年

3 郝翠;系列海洋寡糖衍生物的制備及其抗2型糖尿病作用機理研究[D];中國海洋大學;2011年

4 張運紅;高活性寡糖篩選及其促進植物生長的生理機制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2011年

5 趙峽;聚古羅糖醛酸硫酸酯及其寡糖的制備、結(jié)構(gòu)與活性研究[D];中國海洋大學;2007年

6 王穎;生曬山參根寡糖與糖肽的結(jié)構(gòu)與生物活性研究[D];華南理工大學;2010年

7 齊曉輝;滸苔多糖的結(jié)構(gòu)及寡糖研究[D];中國海洋大學;2012年

8 邱霞;麒麟菜低分子海藻多糖的制備及其消化吸收與生物活性的研究[D];青島大學;2013年

9 程瑞;索拉膠降解菌產(chǎn)葡聚糖酶的研究[D];南京理工大學;2014年

  本文關(guān)鍵詞：索拉膠寡糖對小鼠腸道功能的調(diào)節(jié)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：342178