本文關(guān)鍵詞：激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇羥化途徑的選擇性抑制以及藥物相互作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:紫杉醇在臨床上常與小分子激酶類抑制劑聯(lián)用以增強(qiáng)抗腫瘤效果,而大多數(shù)激酶類抑制劑對(duì)代謝酶有抑制作用,可能引起藥物之間的相互作用。本文以此為研究背景,考察12個(gè)小分子激酶類抑制劑在體外人肝微粒體中,對(duì)CYP2C8和CYP3A4介導(dǎo)的紫杉醇羥基化代謝途徑的抑制,并鑒別激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇羥化代謝途徑的抑制選擇性。通過分子對(duì)接和光譜分析模擬激酶類抑制劑與酶蛋白的結(jié)合,應(yīng)用數(shù)學(xué)模型預(yù)測(cè)藥物相互作用的機(jī)制與程度。方法:首先建立同時(shí)檢測(cè)紫杉醇兩個(gè)代謝物6α-羥基紫杉醇和p-3’羥基紫杉醇的LC-MS/MS定量分析方法;建立并優(yōu)化紫杉醇在體外人肝微粒體中代謝孵育體系,并同時(shí)監(jiān)測(cè)激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇兩條代謝途徑的抑制作用,獲得12個(gè)激酶類抑制劑對(duì)CYP2C8和CYP3A4代謝途徑的可逆性抑制參數(shù)Ki,以及阿西替尼時(shí)間依賴性抑制常數(shù)KI和kinact。通過使用谷胱甘肽捕獲阿西替尼氧化反應(yīng)的中間體,以超高效液相色譜 紫外 四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法(UPLC-UV/Q-TOF MS)檢測(cè)反應(yīng)體系中谷胱甘肽加合物。使用分子對(duì)接模型模擬抑制劑與酶蛋白的結(jié)合,獲得對(duì)接Glide分值,考察該分值與抑制實(shí)驗(yàn)中獲得的抑制常數(shù)Ki的相關(guān)性。通過P450吸收光譜分析,考察抑制劑與酶蛋白結(jié)合類型,分析抑制劑與酶蛋白結(jié)合緊密程度與其抑制常數(shù)之間的相關(guān)性。以抑制常數(shù)和紫杉醇體內(nèi)外代謝份數(shù)為主要參數(shù),運(yùn)用數(shù)學(xué)模型預(yù)測(cè)紫杉醇與激酶類抑制劑聯(lián)用時(shí)的藥物相互作用程度。結(jié)果:12個(gè)小分子激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇羥基化代謝有不同程度的抑制作用,其中尼洛替尼對(duì)CYP2C8和CYP3A4代謝途徑均有較強(qiáng)的可逆性抑制作用,Ki值分別為0.1和0.28μM。阿西替尼,拉帕替尼,尼洛替尼和索拉非尼選擇性地抑制CYP2C8介導(dǎo)的紫杉醇的羥基化代謝;而博舒替尼,達(dá)沙替尼,厄洛替尼,帕唑帕尼和舒尼替尼選擇性地抑制CYP3A4介導(dǎo)的紫杉醇的羥基化代謝。阿法替尼,吉非替尼和伊馬替尼對(duì)紫杉醇兩條羥基化代謝抑制強(qiáng)度相當(dāng)。此外,阿法替尼,厄洛替尼,吉非替尼,拉帕替尼和索拉非尼對(duì)CYP2C8代謝途徑有中等程度的時(shí)間依賴性抑制作用,而除索拉非尼以外的其他激酶類抑制劑對(duì)CYP3A4代謝途徑有較強(qiáng)的時(shí)間依賴性抑制作用。阿西替尼對(duì)CYP3A4酶介導(dǎo)的紫杉醇羥基化代謝途徑有較強(qiáng)的時(shí)間依賴性抑制作用,動(dòng)力學(xué)參數(shù)KI和kinact分別為0.93μM和0.0137 min-1。用捕獲劑GSH捕獲到阿西替尼氧化中間體,說明氧化活化是產(chǎn)生時(shí)間依賴性抑制的原因。分子對(duì)接模擬分析發(fā)現(xiàn),尼洛替尼可通過多個(gè)氫鍵和范德華作用力與酶蛋白氨基酸殘基緊密結(jié)合,而舒尼替尼與酶蛋白氨基酸殘基的作用力相對(duì)較弱。實(shí)驗(yàn)獲得的CYP3A4 Glide對(duì)接分值與抑制實(shí)驗(yàn)獲得的Ki值有較好的線性相關(guān)性(r2=0.64),而CYP2C8 Glide對(duì)接分值與抑制實(shí)驗(yàn)獲得的Ki值線性相關(guān)性較弱(r2=0.51)。光譜分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,大多數(shù)具有較強(qiáng)酶抑制作用的激酶類抑制劑與CYP2C8和CYP3A4的結(jié)合表現(xiàn)為II型光譜。與此結(jié)果相比較,盡管博舒替尼作為CYP2C8的強(qiáng)抑制劑,但其與CYP2C8的結(jié)合并未表現(xiàn)為II型光譜。光譜實(shí)驗(yàn)獲得的抑制劑與CYP2C8(r2=0.950)和CYP3A4(r2=0.807)酶光譜解離常數(shù)Ks和可逆性抑制參數(shù)Ki有較好的線性相關(guān)性。數(shù)學(xué)模型模擬預(yù)測(cè)藥物相互作用結(jié)果顯示,紫杉醇肝攝取率的引入大大提高了預(yù)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。相反,時(shí)間依賴性抑制參數(shù)的引入會(huì)高估紫杉醇與激酶類抑制劑的藥物相互作用,該高估現(xiàn)象與紫杉醇CYP3A4代謝途徑的代謝份數(shù)相關(guān)。結(jié)論:本課題研究發(fā)現(xiàn)激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇羥化代謝途徑的抑制有選擇性,并且大部分激酶類抑制劑對(duì)CYP3A4介導(dǎo)的代謝有時(shí)間依賴性抑制作用。分子對(duì)接模型模擬顯示尼洛替尼分子與CYP2C8和CYP3A4酶蛋白氨基酸殘基有較強(qiáng)的結(jié)合作用,該結(jié)果與體外抑制實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)一致。光譜分析顯示大部分激酶類抑制劑與酶蛋白結(jié)合表現(xiàn)為II型光譜。數(shù)學(xué)模型模擬預(yù)測(cè)顯示紫杉醇肝攝取率的引入大大提高了預(yù)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本研究系統(tǒng)地考察了12種激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇代謝的抑制機(jī)制及強(qiáng)度;分子對(duì)接模型、P450吸收光譜分析、數(shù)學(xué)模型模擬結(jié)果提示紫杉醇和激酶類抑制劑聯(lián)用時(shí)由代謝酶抑制引起的藥物相互作用值得關(guān)注,進(jìn)一步研究將有利于更好地指導(dǎo)臨床合理用藥、開發(fā)安全有效的治療方案。
【關(guān)鍵詞】：紫杉醇 激酶抑制劑 選擇性抑制 分子對(duì)接 光譜分析 藥物相互作用
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1.1 紫杉醇的代謝和藥物動(dòng)力學(xué)12-14
• 1.2 激酶類抑制劑抗腫瘤藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)14-15
• 1.3 藥物相互作用的研究方法15-19
• 1.4 研究目的與計(jì)劃19-21
• 第二章 紫杉醇人肝微粒體中的酶促動(dòng)力學(xué)研究21-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分21-24
• 2.2.1 藥品與試劑21
• 2.2.2 儀器、色譜和質(zhì)譜條件21-22
• 2.2.3 溶液配制22
• 2.2.4 樣品預(yù)處理22
• 2.2.5 紫杉醇體外肝微粒體孵育體系的優(yōu)化22-24
• 2.3 結(jié)果與討論24-27
• 2.3.1 色譜條件優(yōu)化24
• 2.3.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化24-25
• 2.3.3 紫杉醇在人肝微粒體中的酶促動(dòng)力學(xué)25-27
• 2.4 結(jié)論27-28
• 第三章 激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇體外代謝抑制類型的研究28-36
• 3.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>28
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分28-31
• 3.2.1 藥品與試劑28
• 3.2.2 溶液配制28-29
• 3.2.3 激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇代謝的可逆性抑制29-30
• 3.2.4 激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇代謝的時(shí)間依賴性抑制30-31
• 3.3 結(jié)果與討論31-35
• 3.3.1 激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇代謝的可逆性抑制31-33
• 3.3.2 激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇代謝的時(shí)間依賴性抑制33-35
• 3.4 結(jié)論35-36
• 第四章 阿西替尼對(duì)紫杉醇代謝的時(shí)間依賴性抑制機(jī)制的研究36-44
• 4.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>36
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分36-38
• 4.2.1 藥品與試劑36
• 4.2.2 儀器、色譜和質(zhì)譜條件36-37
• 4.2.3 阿西替尼對(duì)紫杉醇代謝時(shí)間依賴性抑制動(dòng)力學(xué)37-38
• 4.2.4 阿西替尼在人肝微粒體中生物活化過程38
• 4.3 結(jié)果與討論38-43
• 4.3.1 阿西替尼對(duì)紫杉醇代謝時(shí)間依賴性抑制動(dòng)力學(xué)38-40
• 4.3.2 阿西替尼氧化中間體質(zhì)譜斷裂分析40-43
• 4.3.3 阿西替尼氧化中間體生物活化過程43
• 4.4 結(jié)論43-44
• 第五章 激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇代謝抑制機(jī)制的研究44-51
• 5.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>44
• 5.2 實(shí)驗(yàn)部分44-45
• 5.2.1 藥品與試劑44
• 5.2.2 分子對(duì)接模型模擬預(yù)測(cè)藥物相互作用44-45
• 5.2.3 P450 光譜分析模擬預(yù)測(cè)藥物相互作用45
• 5.3 結(jié)果與討論45-50
• 5.3.1 分子對(duì)接模型模擬預(yù)測(cè)藥物相互作用45-49
• 5.3.2 P450 光譜分析模擬預(yù)測(cè)藥物相互作用49-50
• 5.4 結(jié)論50-51
• 第六章 數(shù)學(xué)模型模擬預(yù)測(cè)激酶類抑制劑與紫杉醇的藥物相互作用51-58
• 6.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>51
• 6.2 實(shí)驗(yàn)部分51-54
• 6.2.1 簡(jiǎn)單數(shù)學(xué)模型模擬藥物相互作用51
• 6.2.2 靜態(tài)數(shù)學(xué)模型模擬藥物相互作用51-54
• 6.3 結(jié)果與討論54-57
• 6.4 結(jié)論57-58
• 第七章 全文總結(jié)58-61
• 參考文獻(xiàn)61-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷69-70
• 縮略語說明70-71
• 致謝71-72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉靖;王林;楊曉明;;多靶點(diǎn)蛋白酪氨酸激酶抑制劑的研究進(jìn)展[J];國(guó)際藥學(xué)研究雜志;2009年03期

2 丁玨芳;鐘大放;;小分子酪氨酸激酶抑制劑的臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2013年07期

  本文關(guān)鍵詞：激酶類抑制劑對(duì)紫杉醇羥化途徑的選擇性抑制以及藥物相互作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：338031