本文關(guān)鍵詞：激酶類抑制劑對紫杉醇羥化途徑的選擇性抑制以及藥物相互作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:紫杉醇在臨床上常與小分子激酶類抑制劑聯(lián)用以增強(qiáng)抗腫瘤效果,而大多數(shù)激酶類抑制劑對代謝酶有抑制作用,可能引起藥物之間的相互作用。本文以此為研究背景,考察12個小分子激酶類抑制劑在體外人肝微粒體中,對CYP2C8和CYP3A4介導(dǎo)的紫杉醇羥基化代謝途徑的抑制,并鑒別激酶類抑制劑對紫杉醇羥化代謝途徑的抑制選擇性。通過分子對接和光譜分析模擬激酶類抑制劑與酶蛋白的結(jié)合,應(yīng)用數(shù)學(xué)模型預(yù)測藥物相互作用的機(jī)制與程度。方法:首先建立同時檢測紫杉醇兩個代謝物6α-羥基紫杉醇和p-3’羥基紫杉醇的LC-MS/MS定量分析方法;建立并優(yōu)化紫杉醇在體外人肝微粒體中代謝孵育體系,并同時監(jiān)測激酶類抑制劑對紫杉醇兩條代謝途徑的抑制作用,獲得12個激酶類抑制劑對CYP2C8和CYP3A4代謝途徑的可逆性抑制參數(shù)Ki,以及阿西替尼時間依賴性抑制常數(shù)KI和kinact。通過使用谷胱甘肽捕獲阿西替尼氧化反應(yīng)的中間體,以超高效液相色譜 紫外 四級桿飛行時間質(zhì)譜法(UPLC-UV/Q-TOF MS)檢測反應(yīng)體系中谷胱甘肽加合物。使用分子對接模型模擬抑制劑與酶蛋白的結(jié)合,獲得對接Glide分值,考察該分值與抑制實驗中獲得的抑制常數(shù)Ki的相關(guān)性。通過P450吸收光譜分析,考察抑制劑與酶蛋白結(jié)合類型,分析抑制劑與酶蛋白結(jié)合緊密程度與其抑制常數(shù)之間的相關(guān)性。以抑制常數(shù)和紫杉醇體內(nèi)外代謝份數(shù)為主要參數(shù),運(yùn)用數(shù)學(xué)模型預(yù)測紫杉醇與激酶類抑制劑聯(lián)用時的藥物相互作用程度。結(jié)果:12個小分子激酶類抑制劑對紫杉醇羥基化代謝有不同程度的抑制作用,其中尼洛替尼對CYP2C8和CYP3A4代謝途徑均有較強(qiáng)的可逆性抑制作用,Ki值分別為0.1和0.28μM。阿西替尼,拉帕替尼,尼洛替尼和索拉非尼選擇性地抑制CYP2C8介導(dǎo)的紫杉醇的羥基化代謝;而博舒替尼,達(dá)沙替尼,厄洛替尼,帕唑帕尼和舒尼替尼選擇性地抑制CYP3A4介導(dǎo)的紫杉醇的羥基化代謝。阿法替尼,吉非替尼和伊馬替尼對紫杉醇兩條羥基化代謝抑制強(qiáng)度相當(dāng)。此外,阿法替尼,厄洛替尼,吉非替尼,拉帕替尼和索拉非尼對CYP2C8代謝途徑有中等程度的時間依賴性抑制作用,而除索拉非尼以外的其他激酶類抑制劑對CYP3A4代謝途徑有較強(qiáng)的時間依賴性抑制作用。阿西替尼對CYP3A4酶介導(dǎo)的紫杉醇羥基化代謝途徑有較強(qiáng)的時間依賴性抑制作用,動力學(xué)參數(shù)KI和kinact分別為0.93μM和0.0137 min-1。用捕獲劑GSH捕獲到阿西替尼氧化中間體,說明氧化活化是產(chǎn)生時間依賴性抑制的原因。分子對接模擬分析發(fā)現(xiàn),尼洛替尼可通過多個氫鍵和范德華作用力與酶蛋白氨基酸殘基緊密結(jié)合,而舒尼替尼與酶蛋白氨基酸殘基的作用力相對較弱。實驗獲得的CYP3A4 Glide對接分值與抑制實驗獲得的Ki值有較好的線性相關(guān)性(r2=0.64),而CYP2C8 Glide對接分值與抑制實驗獲得的Ki值線性相關(guān)性較弱(r2=0.51)。光譜分析實驗結(jié)果顯示,大多數(shù)具有較強(qiáng)酶抑制作用的激酶類抑制劑與CYP2C8和CYP3A4的結(jié)合表現(xiàn)為II型光譜。與此結(jié)果相比較,盡管博舒替尼作為CYP2C8的強(qiáng)抑制劑,但其與CYP2C8的結(jié)合并未表現(xiàn)為II型光譜。光譜實驗獲得的抑制劑與CYP2C8(r2=0.950)和CYP3A4(r2=0.807)酶光譜解離常數(shù)Ks和可逆性抑制參數(shù)Ki有較好的線性相關(guān)性。數(shù)學(xué)模型模擬預(yù)測藥物相互作用結(jié)果顯示,紫杉醇肝攝取率的引入大大提高了預(yù)測結(jié)果的準(zhǔn)確性。相反,時間依賴性抑制參數(shù)的引入會高估紫杉醇與激酶類抑制劑的藥物相互作用,該高估現(xiàn)象與紫杉醇CYP3A4代謝途徑的代謝份數(shù)相關(guān)。結(jié)論:本課題研究發(fā)現(xiàn)激酶類抑制劑對紫杉醇羥化代謝途徑的抑制有選擇性,并且大部分激酶類抑制劑對CYP3A4介導(dǎo)的代謝有時間依賴性抑制作用。分子對接模型模擬顯示尼洛替尼分子與CYP2C8和CYP3A4酶蛋白氨基酸殘基有較強(qiáng)的結(jié)合作用,該結(jié)果與體外抑制實驗數(shù)據(jù)一致。光譜分析顯示大部分激酶類抑制劑與酶蛋白結(jié)合表現(xiàn)為II型光譜。數(shù)學(xué)模型模擬預(yù)測顯示紫杉醇肝攝取率的引入大大提高了預(yù)測結(jié)果的準(zhǔn)確性。本研究系統(tǒng)地考察了12種激酶類抑制劑對紫杉醇代謝的抑制機(jī)制及強(qiáng)度;分子對接模型、P450吸收光譜分析、數(shù)學(xué)模型模擬結(jié)果提示紫杉醇和激酶類抑制劑聯(lián)用時由代謝酶抑制引起的藥物相互作用值得關(guān)注,進(jìn)一步研究將有利于更好地指導(dǎo)臨床合理用藥、開發(fā)安全有效的治療方案。
【關(guān)鍵詞】：紫杉醇 激酶抑制劑 選擇性抑制 分子對接 光譜分析 藥物相互作用
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1.1 紫杉醇的代謝和藥物動力學(xué)12-14
• 1.2 激酶類抑制劑抗腫瘤藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)14-15
• 1.3 藥物相互作用的研究方法15-19
• 1.4 研究目的與計劃19-21
• 第二章 紫杉醇人肝微粒體中的酶促動力學(xué)研究21-28
• 2.1 實驗?zāi)康?/span>21
• 2.2 實驗部分21-24
• 2.2.1 藥品與試劑21
• 2.2.2 儀器、色譜和質(zhì)譜條件21-22
• 2.2.3 溶液配制22
• 2.2.4 樣品預(yù)處理22
• 2.2.5 紫杉醇體外肝微粒體孵育體系的優(yōu)化22-24
• 2.3 結(jié)果與討論24-27
• 2.3.1 色譜條件優(yōu)化24
• 2.3.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化24-25
• 2.3.3 紫杉醇在人肝微粒體中的酶促動力學(xué)25-27
• 2.4 結(jié)論27-28
• 第三章 激酶類抑制劑對紫杉醇體外代謝抑制類型的研究28-36
• 3.1 實驗?zāi)康?/span>28
• 3.2 實驗部分28-31
• 3.2.1 藥品與試劑28
• 3.2.2 溶液配制28-29
• 3.2.3 激酶類抑制劑對紫杉醇代謝的可逆性抑制29-30
• 3.2.4 激酶類抑制劑對紫杉醇代謝的時間依賴性抑制30-31
• 3.3 結(jié)果與討論31-35
• 3.3.1 激酶類抑制劑對紫杉醇代謝的可逆性抑制31-33
• 3.3.2 激酶類抑制劑對紫杉醇代謝的時間依賴性抑制33-35
• 3.4 結(jié)論35-36
• 第四章 阿西替尼對紫杉醇代謝的時間依賴性抑制機(jī)制的研究36-44
• 4.1 實驗?zāi)康?/span>36
• 4.2 實驗部分36-38
• 4.2.1 藥品與試劑36
• 4.2.2 儀器、色譜和質(zhì)譜條件36-37
• 4.2.3 阿西替尼對紫杉醇代謝時間依賴性抑制動力學(xué)37-38
• 4.2.4 阿西替尼在人肝微粒體中生物活化過程38
• 4.3 結(jié)果與討論38-43
• 4.3.1 阿西替尼對紫杉醇代謝時間依賴性抑制動力學(xué)38-40
• 4.3.2 阿西替尼氧化中間體質(zhì)譜斷裂分析40-43
• 4.3.3 阿西替尼氧化中間體生物活化過程43
• 4.4 結(jié)論43-44
• 第五章 激酶類抑制劑對紫杉醇代謝抑制機(jī)制的研究44-51
• 5.1 實驗?zāi)康?/span>44
• 5.2 實驗部分44-45
• 5.2.1 藥品與試劑44
• 5.2.2 分子對接模型模擬預(yù)測藥物相互作用44-45
• 5.2.3 P450 光譜分析模擬預(yù)測藥物相互作用45
• 5.3 結(jié)果與討論45-50
• 5.3.1 分子對接模型模擬預(yù)測藥物相互作用45-49
• 5.3.2 P450 光譜分析模擬預(yù)測藥物相互作用49-50
• 5.4 結(jié)論50-51
• 第六章 數(shù)學(xué)模型模擬預(yù)測激酶類抑制劑與紫杉醇的藥物相互作用51-58
• 6.1 實驗?zāi)康?/span>51
• 6.2 實驗部分51-54
• 6.2.1 簡單數(shù)學(xué)模型模擬藥物相互作用51
• 6.2.2 靜態(tài)數(shù)學(xué)模型模擬藥物相互作用51-54
• 6.3 結(jié)果與討論54-57
• 6.4 結(jié)論57-58
• 第七章 全文總結(jié)58-61
• 參考文獻(xiàn)61-69
• 個人簡歷69-70
• 縮略語說明70-71
• 致謝71-72

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉靖;王林;楊曉明;;多靶點蛋白酪氨酸激酶抑制劑的研究進(jìn)展[J];國際藥學(xué)研究雜志;2009年03期

2 丁玨芳;鐘大放;;小分子酪氨酸激酶抑制劑的臨床藥代動力學(xué)研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報;2013年07期

  本文關(guān)鍵詞：激酶類抑制劑對紫杉醇羥化途徑的選擇性抑制以及藥物相互作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：338031