本文關鍵詞：葉酸對阿爾茨海默病小鼠模型腦內Aβ沉積的抑制作用及其機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究葉酸(folic acid)作用于APP/PS1小鼠腦組織中APP淀粉樣酶切途徑的環(huán)節(jié),探討其抑制Aβ沉積的作用機制,為研究葉酸對阿爾茨海默病的防治作用提供科學依據。方法將6月齡雄性APP/PS1小鼠模型隨機分為以下4組:AD葉酸缺乏組(folate-deficient diet plus daily gavage with water,AD+FA-D);AD葉酸對照組(control diet plus daily gavage with water,AD+FA-N);AD葉酸補充低劑量組(control diet plus daily gavage with 120μg/kg folic acid,AD+FA-L);AD葉酸補充高劑量組(control diet plus daily gavage with 600μg/kg folic acid,AD+FA-H)。APP/PS1小鼠模型同月齡野生型小鼠作為陰性對照組(control diet plus daily gavage with water,WT+FA-N)。AD+FA-D組飼以葉酸缺乏飼料,其它各組飼以對照飼料,AD+FA-L組灌胃120μg/kg bw·d葉酸溶液,AD+FA-H組灌胃600μg/kg bw·d葉酸溶液,其它各組灌胃雙蒸水。每周稱重一次,根據體重調整灌胃量,干預60d。采用IMMULITE、葉酸化學發(fā)光免疫試劑盒檢測血清葉酸濃度;采用實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測腦組織淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein,APP)、BACE1、ADAM9、ADAM10、早老素1(presenilin 1,PS1)的m RNA水平;免疫印跡(Western Blot)檢測腦組織APP、BACE1、ADAM9、ADAM10、PS1、NCT的蛋白表達;用免疫組化法檢測腦組織β-淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ);用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)檢測腦組織中Aβ1 40和Aβ1 42的含量。結果葉酸干預60d后,化學免疫發(fā)光法檢測的血清葉酸濃度結果為:在葉酸干預前,5組血清葉酸的濃度處于同一個水平,隨著干預時間的變化,血清葉酸水平也有所改變。干預1w后,AD+FA-D組血清葉酸濃度低于其它各組;AD+FA-L組、AD+FA-H組與AD+FA-N組相比,血清葉酸水平提高(P0.05)。免疫組化檢測腦組織Aβ蛋白結果顯示:與AD+FA-N組相比,AD+FA-H組Aβ蛋白表達降低,AD+FA-D組表達升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),但AD+FA-L組無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。ELISA檢測腦組織中Aβ1 40和Aβ1 42的含量結果顯示:與AD+FA-N組相比,除WT+FA-N組Aβ1 40含量有所降低,其他四組均沒有明顯差別;與AD+FA-N組相比,AD+FA-H組Aβ1 42的含量降低,AD+FA-D組含量升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),但AD+FA-L組無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。RT-PCR檢測腦組織APP、BACE1、ADAM9、ADAM10、PS1的m RNA水平顯示:與AD+FA-N組相比,AD+FA-D組APP、BACE1、PS1的m RNA水平均升高,而ADAM9、ADAM10的m RNA水平均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);AD+FA-L組、AD+FA-H組APP、BACE1、PS1的m RNA水平均降低;而ADAM9、ADAM10的m RNA水平均升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);Western Blot檢測腦組織APP、BACE1、ADAM9、ADAM10、PS1、NCT的蛋白表達結果顯示:與AD+FA-N組相比,AD+FA-D組APP、BACE1、PS1的蛋白水平均升高,而ADAM9、ADAM10的蛋白水平均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);AD+FA-L組、AD+FA-H組APP、BACE1、PS1的蛋白水平均降低;而ADAM9、ADAM10的蛋白水平均升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);但是各組蛋白的NCT結果顯示表達差異無統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論葉酸補充減少了腦組織Aβ沉積以及Aβ1 42的含量,而葉酸缺乏增加了腦組織Aβ沉積以及Aβ1 42的含量。葉酸可能通過抑制小鼠腦組織的淀粉樣蛋白生成途徑的分泌酶APP、BACE1、PS1、NCT的m RNA水平和蛋白表達,減少Aβ的產生;增加小鼠腦組織的非淀粉樣蛋白生成途徑的分泌酶ADAM9、ADAM10的m RNA水平和蛋白表達,減少Aβ的沉積。
【關鍵詞】：葉酸 阿爾茨海默病 分泌酶 β-淀粉樣蛋白 APP/PS1小鼠
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、葉酸對AD小鼠模型Aβ 沉積的抑制作用16-32
• 1.1 對象和方法16-24
• 1.1.1.實驗動物16
• 1.1.2 主要試劑16-17
• 1.1.3 儀器設備17
• 1.1.4 相關溶液及其配置方法17-18
• 1.1.5 動物分組與給藥方法18
• 1.1.6 AD小鼠模型的基因型鑒定18-20
• 1.1.7 AD小鼠模型血清葉酸濃度測定20-21
• 1.1.8 AD小鼠模型Aβ 沉淀的檢測21-22
• 1.1.9 AD小鼠模型Aβ1 40和Aβ1 42含量的檢測22-24
• 1.1.10 統(tǒng)計分析24
• 1.2 結果24-28
• 1.2.1 AD小鼠模型基因型鑒定24-25
• 1.2.2 葉酸對AD小鼠模型體重的影響25-26
• 1.2.3 葉酸對AD小鼠模型血清葉酸濃度的影響26-27
• 1.2.4 葉酸對AD小鼠模型腦組織Aβ 沉積的影響27-28
• 1.2.5 葉酸對AD小鼠模型腦組織中Aβ1 40和Aβ1 42含量的影響28
• 1.3 討論28-31
• 1.3.1 AD小鼠模型概述28-29
• 1.3.2 葉酸對AD小鼠模型體重和血清葉酸濃度的影響機制29-30
• 1.3.3 葉酸對AD小鼠模型Aβ 沉積的抑制作用30-31
• 1.3.4 葉酸對APP/PS1小鼠模型腦組織中Aβ1 42含量的抑制作用31
• 1.4 小結31-32
• 二、葉酸對AD小鼠模型Aβ 生成相關分泌酶的影響32-50
• 2.1 對象和方法32-41
• 2.1.1 實驗動物32
• 2.1.2 主要試劑32
• 2.1.3 儀器設備32-33
• 2.1.4 溶液及其配置方法33-34
• 2.1.5.小鼠干預小鼠干預和實驗分組同第一部分。34
• 2.1.6 Western Bolt檢測APP裂解相關酶的蛋白表達34-38
• 2.1.7 RT-PCR檢測APP裂解相關酶的mRNA表達38-41
• 2.1.8 統(tǒng)計分析41
• 2.2 結果41-46
• 2.2.1 葉酸對AD小鼠模型腦組織中APP的mRNA和蛋白表達的影響41-42
• 2.2.2 葉酸對AD小鼠模型腦組織中ADAM9、ADAM10的mRNA和蛋白表達的影響42-44
• 2.2.3 葉酸對AD小鼠模型腦組織中BACE1的mRNA和蛋白表達的影響44-45
• 2.2.4 葉酸對AD小鼠模型腦組織中PS1、NCT的mRNA和蛋白表達的影響45-46
• 2.3 討論46-49
• 2.3.1 葉酸對AD小鼠模型腦組織中非Aβ 生成途徑相關分泌酶的促進作用46-48
• 2.3.2 葉酸對AD小鼠模型腦組織中Aβ 生成途徑相關分泌酶的抑制作用48-49
• 2.4 小結49-50
• 結論50-51
• 參考文獻51-58
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明58-60
• 綜述 葉酸對AD小鼠模型淀粉樣蛋白前體裂解酶的作用及其機制的研究60-69
• 綜述參考文獻65-69
• 致謝69

【共引文獻】

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本文編號：327843