本文關鍵詞：吉非替尼按時辰給藥對荷瘤裸鼠的藥效學影響及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過對非小細胞肺癌移植瘤模型裸鼠時辰給藥,研究吉非替尼不同時間點給藥對腫瘤的抑制效果,并探討EGFR/AKT/mTOR和EGFR/ERK通路討論其可能作用機制。方法:1.造模與分組:建立HCC827非小細胞肺癌荷瘤裸鼠模型,按照時間點隨機分為六組(04:00、8:00、12:00、16:00、20:00、24:00),每組各有實驗組和對照組。2.給藥:實驗組灌胃給藥吉非替尼混懸液,模型組給予相同量的體積分數為1%的吐溫80溶液,連續(xù)給藥21天。3.藥效學指標檢測:根據測量的腫瘤長徑和短徑,計算并繪制腫瘤體積生長曲線。第21天處死荷瘤裸鼠后,剝離腫瘤組織,稱取腫瘤重量,計算抑瘤率。4.基因表達檢測:用實時熒光定量PCR檢測各組荷瘤裸鼠腫瘤組織中EGFR、AKT、m TOR和ERK1/2的信使RNA的相對表達量。5.蛋白表達檢測:western-blot檢測各組荷瘤裸鼠腫瘤組織中P-EGFR、P-AKT、P-mTOR、P-ERK蛋白質的相對表達量。6.細胞凋亡檢測:采用TUNEL染色法檢測腫瘤組織切片中腫瘤細胞凋亡率。結果:1.與模型組相比,實驗組各組荷瘤裸鼠腫瘤體積增長緩慢,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),與20:00組相比,4:00,8:00和12:00組生長較慢,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與模型組比較,除20:00外,實驗組裸鼠移植瘤重量均比模型組要低(P0.05),腫瘤抑瘤率8:00組最高,20:00組最低。2.與模型組相比,4:00、8:00組EGFR mRNA的相對表達量比較低(P0.05),8:00組與16:00、20:00組比較表達量降低(P0.05);4:00、8:00、12:00三個組中AKT m RNA的相對表達量降低(P0.05),8:00和12:00組與16:00、20:00、24:00組比較表達量降低(P0.05);4:00、8:00、12:00組mTOR的mRNA的相對表達量降低(P0.05),4:00、8:00組與20:00組mRNA的相對表達量降低(P0.05);4:00、8:00、12:00組的ERK1/2 mRNA的相對表達量降低(P0.05),4:00、8:00組與20:00、24:00組相比表達量降低(P0.05)。3.與模型組相比,P-EGFR蛋白的表達在4:00、8:00、12:00和24:00明顯降低(P0.05);P-AKT蛋白在4:00和8:00的表達量明顯降低(P0.05);P-mTOR蛋白的相對表達量表達在4:00和8:00明顯降低(P0.05);P-ERK1/2蛋白表達在4:00、8:00、24:00表達量明顯降低(P0.05)。4.與模型組相比,4:00、8:00和12:00組腫瘤組織細胞凋亡率明顯高于其他組。結論:吉非替尼對荷瘤裸鼠的移植瘤具有抑制作用,并且呈現出明顯的時辰節(jié)律性的差異,4:00,8:00和12:00的抑制效果比16:00,20:00和24:00的好,其中8:00腫瘤抑制效果最好,20:00抑制效果最差,這種抑制作用產生的機制可能是通路抑制EGFR/AKT/mTOR和EGFR/ERK傳導通路的信號傳導有關。
【關鍵詞】：吉非替尼 時辰藥理學 藥效學 作用機制
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-11
• 第一章 非小細胞肺癌裸鼠移植瘤模型的建立及模擬時辰給藥實驗11-14
• 1.1 實驗材料11-12
• 1.1.1 實驗動物和細胞株11
• 1.1.2 試劑11
• 1.1.3 儀器11-12
• 1.2 實驗方法12-13
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)12
• 1.2.2 細胞復蘇12
• 1.2.3 細胞傳代12
• 1.2.4 細胞收集12-13
• 1.3 動物模型制作13
• 1.4 分組及給藥13-14
• 第二章 吉非替尼按時辰給藥對荷瘤裸鼠的藥效學影響14-24
• 2.1 實驗材料14
• 2.1.1 試劑14
• 2.1.2 儀器14
• 2.2 實驗方法14-16
• 2.2.1 腫瘤體積變化和抑瘤率計算14
• 2.2.2 腫瘤組織病理學檢測14-15
• 2.2.3 腫瘤組織細胞凋亡率檢測15-16
• 2.2.4 統(tǒng)計學分析16
• 2.3 實驗結果16-22
• 2.3.1 吉非替尼不同時辰點給藥對腫瘤體積變化和抑瘤率的影響16-18
• 2.3.2 吉非替尼不同時間點給藥荷瘤裸鼠移植瘤組織病理學檢測18-19
• 2.3.3 吉非替尼不同時間點給藥荷瘤裸鼠移植瘤細胞凋亡檢測19-22
• 2.4 討論22-23
• 2.5 結論23-24
• 第三章 吉非替尼按時辰給藥對荷瘤裸鼠的時辰藥理學作用機制的研究24-53
• 3.1 實驗材料24-25
• 3.1.1 試劑24
• 3.1.2 儀器24-25
• 3.2 實驗方法25-31
• 3.2.1 qRT-PCR檢測相關基因表達25-28
• 3.2.1.1 腫瘤組織總RNA抽提25
• 3.2.1.2 RNA濃度與純度檢測25
• 3.2.1.3 逆轉錄25-26
• 3.1.1.4 qRT-PCR擴增26-28
• 3.2.2 Western blot檢測荷瘤裸鼠腫瘤組織中相關蛋白的表達28-31
• 3.2.2.1 組織中總蛋白質提取28
• 3.2.2.2 蛋白質濃度測定28-29
• 3.2.2.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）29-30
• 3.2.2.4 轉膜30
• 3.2.2.5 抗原抗體反應30-31
• 3.2.2.6 顯影31
• 3.2.3 統(tǒng)計學分析31
• 3.3 實驗結果31-51
• 3.3.1 吉非替尼不同時辰給藥對荷瘤裸鼠腫瘤組織中相關基因表達的影響31-47
• 3.3.1.1 荷瘤裸鼠移植瘤組織內 EGFR m RNA 在不同時間點的表達32-36
• 3.3.1.2 荷瘤裸鼠腫瘤組織中AKT mRNA在不同時間點的表達36-40
• 3.3.1.3 荷瘤裸鼠腫瘤組織中mTOR mRNA在不同時間點的表達40-44
• 3.3.1.4 腫瘤組織內ERK mRNA在不同時辰點的表達44-47
• 3.3.2 吉非替尼不同時間點給藥對荷瘤裸鼠移植瘤組織中相關蛋白表達的影響47-51
• 3.3.2.1 荷瘤裸鼠腫瘤組織內P-EGFR在不同時間點的相對定量表達結果47-48
• 3.3.2.2 荷瘤裸鼠腫瘤組織內蛋白P-AKT在不同時間點的相對定量表達結果48-49
• 3.3.2.3 荷瘤裸鼠腫瘤組織內P-mTOR在不同時間點的相對定量表達結果49-50
• 3.3.2.4 荷瘤裸鼠腫瘤組織內P-ERK在不同時間點的相對定量表達結果50-51
• 3.4 討論51-52
• 3.5 結論52-53
• 小結53-54
• 參考文獻54-58
• 綜述58-66
• 參考文獻63-66
• 攻讀學位期間的研究成果66-67
• 附錄 英文縮寫詞表67-68
• 致謝68-69

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