本文關(guān)鍵詞：群感效應(yīng)對(duì)紅曲霉洛伐他汀和紅曲色素合成的影響及調(diào)控機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的最近的研究表明一種被稱為群感效應(yīng)現(xiàn)象在提高微生物次生代謝產(chǎn)物量方面具有較大的應(yīng)用前景。本研究中,我們探討亞油酸作為群感效應(yīng)信號(hào)分子氧脂素的前體對(duì)人紅曲霉洛伐他汀和紅色素的合成影響及其調(diào)控機(jī)理。方法分別采用高效液相色譜法和紫外分光光度法檢測(cè)洛伐他汀和紅色素的產(chǎn)量,探討亞油酸對(duì)紅色素和洛伐他汀合成濃度-時(shí)間-產(chǎn)量關(guān)系;通過Real-Time PCR法檢測(cè)亞油酸對(duì)紅曲霉洛伐他汀合成調(diào)控基因mk H和洛伐他汀合成基因mk A濃度-時(shí)間-表達(dá)量的關(guān)系;酶聯(lián)免疫吸附法及比色法分別檢測(cè)亞油酸對(duì)紅曲霉G蛋白偶聯(lián)信號(hào)通路中環(huán)腺苷酸和胞內(nèi)鈣離子濃度-時(shí)間-含量的關(guān)系;非放射性蛋白激酶檢測(cè)法檢測(cè)蛋白激酶A、蛋白激酶C和酶聯(lián)免疫法檢測(cè)磷脂酶C濃度-時(shí)間-活性的關(guān)系。結(jié)果亞油酸對(duì)紅曲霉次級(jí)代謝產(chǎn)物紅曲色素和洛伐他汀的產(chǎn)量均有較高的影響,并且呈一定的濃度依賴性。高濃度的亞油酸不利于色素的產(chǎn)生,較低濃度的亞油酸有利于紅曲色素的產(chǎn)生。亞油酸濃度為64μM的實(shí)驗(yàn)組得到較高的紅曲色素產(chǎn)量,在第十三天產(chǎn)量達(dá)5.6U/m L,相比對(duì)照組增長了27%;較高濃度的亞油酸有利于洛伐他汀的產(chǎn)生,512μM濃度的亞油酸實(shí)驗(yàn)組獲得較高的洛伐他汀的產(chǎn)量,在第十三天產(chǎn)量達(dá)13.2mg/g,與對(duì)照組相比增長了26%。Real-Time PCR的結(jié)果表明較高濃度亞油酸可提高mk A基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平,而在低濃度亞油酸中mk A基因的表達(dá)受到抑制。mk A基因最高的表達(dá)出現(xiàn)在512μM組的第九天,表達(dá)差異相比對(duì)照組達(dá)5.36倍;mk A基因最低表達(dá)出現(xiàn)在64μM組的第七天,只是對(duì)照組的0.27倍。在全部的亞油酸添加組中,調(diào)控基因mk H在培養(yǎng)前中期有不同程度的較高水平的表達(dá),最大的差異出現(xiàn)在第九天,分別是64μM組的11.8倍和512μM的7.41。亞油酸可起引c AMP-PKA途徑中c AMP濃度的的增加,并且c AMP濃度維持在較高水平,呈一定的濃度依賴性,而PKA的活性也有顯著的升高,PKA的活性同樣維持在較高水平,活性高低呈亞油酸濃度依賴性的升高,這與c AMP的變化相一致;磷脂酰肌醇信號(hào)通路中PKC的活性有一定的升高,而胞內(nèi)鈣離子濃度和磷脂酶C活性相比對(duì)照組沒有顯著的變化。結(jié)論外源添加亞油酸可改變紅曲霉產(chǎn)生色素的過程;在一定范圍內(nèi),色素的產(chǎn)量與亞油酸添加濃度成反比,洛伐他汀的產(chǎn)量與亞油酸添加濃度成正比,洛伐他汀和色素的產(chǎn)量成一定的競(jìng)爭(zhēng)性。洛伐他汀合成基因mk A的轉(zhuǎn)錄水平的變化與洛伐他汀的合成量呈正比性相關(guān),而與色素產(chǎn)量是一定的反相關(guān)性;調(diào)控基因mk H的表達(dá)與洛伐他汀和色素的合成量相關(guān),調(diào)控基因mk H的表達(dá)水平越高,紅曲霉次生代謝越活躍。亞油酸對(duì)紅曲霉的洛伐他汀和紅色素合成受c AMP/PKA信號(hào)途徑影響較大,磷脂酰肌醇-PKC則有一定的影響,而磷脂酰肌醇-Ca2+信號(hào)途徑的則無顯著影響。
【關(guān)鍵詞】：洛伐他汀 群感效應(yīng) G蛋白信號(hào)通路 調(diào)控 紅曲霉
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R914.5
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-22
• 1 文獻(xiàn)綜述13-22
• 1.1 紅曲霉及其次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究進(jìn)展13-18
• 1.2 群感效應(yīng)現(xiàn)象的研究18-22
• 第一部分 亞油酸對(duì)紅曲霉洛伐他汀和色素產(chǎn)量的影響22-30
• 1 材料和儀器22-23
• 1.1 菌株22
• 1.2 試劑22
• 1.3 主要設(shè)備22-23
• 2 方法23-25
• 2.1 紅曲霉的培養(yǎng)23-24
• 2.2 紅曲霉發(fā)酵液中洛伐他汀及色素的產(chǎn)生曲線24
• 2.3 菌體干重的測(cè)定方法24
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理24-25
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-28
• 3.1 亞油酸對(duì)紅曲霉的紅曲色素產(chǎn)生的影響25-27
• 3.2 亞油酸對(duì)紅曲霉的洛伐他汀產(chǎn)生的影響27-28
• 4 討論28-30
• 第二部分 紅曲霉群感效應(yīng)調(diào)控機(jī)理的探究30-52
• 1 材料30-31
• 1.1 試劑30-31
• 1.2 主要設(shè)備31
• 2 方法31-40
• 2.1 引物的設(shè)計(jì)31-32
• 2.2 RT-PCR32-35
• 2.3 Real-Time PCR35-36
• 2.4 總蛋白濃度的檢測(cè)36-37
• 2.5 胞內(nèi)c AMP含量的檢測(cè)37-38
• 2.6 蛋白激酶A活性的檢測(cè)38-39
• 2.7 蛋白激酶C活性的檢測(cè)39
• 2.8 磷脂酶C活性的檢測(cè)39
• 2.9 胞內(nèi)Ca2+濃度的檢測(cè)39-40
• 2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理40
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-50
• 3.1 mk A基因、mk H基因和內(nèi)參β-actin基因PCR結(jié)果40-41
• 3.2 目標(biāo)基因與內(nèi)標(biāo)基因的擴(kuò)增效率一致性驗(yàn)證試驗(yàn)41-43
• 3.3 亞油酸對(duì)紅曲霉mk H和mk A表達(dá)的影響43-45
• 3.4 亞油酸對(duì)紅曲霉與G蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的的c AMP信號(hào)途徑和磷脂酰肌醇信號(hào)通路的影響45-50
• 4 討論50-52
• 全文總結(jié)52-53
• 展望53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 附錄一 碩士期間發(fā)表的論文58-59
• 附錄二 縮寫詞及中英文對(duì)照表59-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 高嘉安,郭東,王德輝,陳淑杰;產(chǎn)MonacolinK紅曲霉菌的篩選及發(fā)酵條件的研究[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1997年03期

2 Yaochen Li;Junping Lv;Chen Zhong;Wen Hao;Yaqin Wang;Jianrong Zhu;;Performance and role of N-acyl-homoserine lactone(AHL)-based quorum sensing(QS) in aerobic granules[J];Journal of Environmental Sciences;2014年08期

3 王金字;董文賓;楊春紅;李娜;楊津;;紅曲色素的研究及應(yīng)用新進(jìn)展[J];食品科技;2010年01期

4 韓梅，，李秉慧;紅色紅曲霉菌發(fā)酵提取液降膽固醇作用的研究[J];微生物學(xué)通報(bào);1994年05期

  本文關(guān)鍵詞：群感效應(yīng)對(duì)紅曲霉洛伐他汀和紅曲色素合成的影響及調(diào)控機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：305940