本文關(guān)鍵詞：aFGF對慶大霉素誘導的海馬星形膠質(zhì)細胞凋亡的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過建立海馬星形膠質(zhì)細胞(AS)的體外培養(yǎng)模型,從細胞凋亡的模塊探討酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)對慶大霉素(GM)誘導的海馬星形膠質(zhì)細胞損傷的保護作用。方法：SD乳鼠的海馬組織經(jīng)體外分離和純化培養(yǎng),取傳至第三代的星形膠質(zhì)細胞進行膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光法進行細胞鑒定,獲得純度大于95%的星形膠質(zhì)細胞用于后續(xù)實驗。將細胞接種于24孔板內(nèi)：實驗隨機分為3組：①對照組：正常培養(yǎng)；②GM組：2 g/LGM作用細胞24h；③aFGF+GM組：加入4.25μg/L aFGF作用細胞24h后再加2 g/L GM培養(yǎng)24h。各組分別設6個復孔,實驗重復3次。24h后通過應用TUNEL結(jié)合DAPI核染色法和Annexin V-FITC/PI雙染法反映細胞凋亡的表達狀況。結(jié)果：(1)形態(tài)學觀察：對照組在光鏡下可見細胞輪廓清晰,折光性強,細胞胞體發(fā)出較多長而分支的突起,呈現(xiàn)出形態(tài)多樣的梭形、多邊形交織排列的成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；GM組在光鏡下可見星形膠質(zhì)細胞的形態(tài)學結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,部分細胞出現(xiàn)皺縮成團,胞體分支的突起連接中斷甚至出現(xiàn)細胞脫落的現(xiàn)象,喪失了細胞的完整性結(jié)構(gòu),細胞質(zhì)內(nèi)有較多的顆粒和空泡存在；aFGF+GM組在光鏡下可見細胞突起回縮減弱,皺縮程度減輕,胞體形態(tài)結(jié)構(gòu)也見不同程度的緩解,細胞聚集成團和細胞脫落現(xiàn)象減少,細胞輪廓較清晰,突起連接中斷少見且細胞質(zhì)內(nèi)顆粒和空泡減少。(2)2g/L GM作用細胞24h能抑制細胞生長,誘導細胞凋亡,同時給予4.25μg/L aFGF處理,星形膠質(zhì)細胞凋亡率下降,其中損傷組采用TUNEL染色陽性的細胞數(shù)較正常對照組顯著升高(P0.01)；保護組用TUNEL染色陽性的細胞數(shù)較損傷組顯著降低(P0.01)；但是,保護組與正常組之間不具差異性(P0.05)；而通過Annexin V-FITC/PI雙染法可見：正常對照組細胞的總凋亡率為8.37%,損傷組細胞的總凋亡率28.66%,保護組細胞的總凋亡率為25.55%。其中,保護組細胞的早期凋亡率與損傷組細胞的早期凋亡率相比未見區(qū)別,而其晚期凋亡率與損傷組相比有所降低,提示aFGF可能阻礙GM所致星形膠質(zhì)細胞早期凋亡的進一步發(fā)展。結(jié)論：(1)采用“胰蛋白酶消化組織塊分離+傳代純化培養(yǎng)法”對體外培養(yǎng)大鼠AS進行優(yōu)化,成功獲取高純度的星形膠質(zhì)細胞。(2) aFGF具有減輕慶大霉素所致星形膠質(zhì)細胞凋亡的作用,且提示可能體現(xiàn)在阻礙細胞早期凋亡的進一步發(fā)展。(3) aFGF對慶大霉素誘導的海馬星形膠質(zhì)細胞損傷具有一定的保護作用。
【關(guān)鍵詞】：酸性成纖維細胞生長因子 慶大霉素 海馬星形膠質(zhì)細胞 凋亡 細胞培養(yǎng)
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-31
• 1 實驗材料13-22
• 2 實驗方法22-31
• 結(jié)果31-40
• 1 海馬星形膠質(zhì)細胞生長狀況31-32
• 2 加藥處理24h后細胞的形態(tài)學變化32-34
• 3 星形膠質(zhì)細胞調(diào)亡的檢測34-40
• 討論40-48
• 1 原代星形膠質(zhì)細胞的分離及純化培養(yǎng)的改進41-45
• 2 原代星形膠質(zhì)細胞損傷模型的建立45
• 3 星形膠質(zhì)細胞損傷保伊作用的調(diào)亡檢測45-47
• 4 對今后實驗研究工作的展望47-48
• 小結(jié)48-49
• 參考文獻49-53
• 英文縮略詞索引53-55
• 綜述55-70
• 參考文獻67-70
• 致謝70-72
• 碩士研究生期間發(fā)表的學術(shù)論文72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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4 劉r

本文編號：305214