本文關(guān)鍵詞：萊菔素、萊菔素—谷胱甘肽結(jié)合物抗癌活性評(píng)價(jià)及分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：流行病學(xué)證據(jù)表明正常人體飲食攝入十字花科蔬菜可以減少不同類型的惡性腫瘤(包括前列腺癌、肺癌、肝癌等等)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。這些包括西蘭花在內(nèi)的十字花科蔬菜的抗癌效果歸功于這些植物中大量的異硫氰酸酯。萊菔素(SFE)作為從蘿卜籽分離提取得到的異硫氰酸酯類化合物,和萊菔硫烷(SFN)化學(xué)結(jié)構(gòu)只相差一個(gè)雙鍵,是SFN的結(jié)構(gòu)類似物。SFN已在體內(nèi)動(dòng)物模型和體外細(xì)胞試驗(yàn)中被證明是一種有效的抗癌物質(zhì),目前SFE已被證實(shí)可以抑制乳腺癌、肺癌、食管鱗癌、肝癌等多種腫瘤細(xì)胞的生長。SFE-GSH結(jié)合物是由SFE與有解毒功能的還原型谷胱甘肽(GSH)經(jīng)化學(xué)合成得到的一個(gè)新化合物,它解決了SFE物理性質(zhì)不穩(wěn)定的問題,但其是否具有抗癌活性,目前尚未可知。本課題以乳腺癌為重點(diǎn)研究對(duì)象,研究了SFE和SFE-GSH結(jié)合物抗乳腺癌細(xì)胞的活性評(píng)價(jià)及分子機(jī)制,得出主要結(jié)論如下：1、本課題通過流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)了SFE能夠誘導(dǎo)MDA-MB-436和MDA-MB-453兩種三陰性乳腺癌細(xì)胞凋亡,同時(shí)將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。SFE通過上調(diào)分子靶標(biāo)Egr1從而抑制細(xì)胞增殖,并通過Egrl-cyclinB1-Cdc2通路阻滯細(xì)胞周期。2、評(píng)價(jià)了SFE-GSH結(jié)合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的體外細(xì)胞活性,結(jié)果表明SFE-GSH結(jié)合物能夠抑制黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、宮頸癌等多種腫瘤細(xì)胞的增殖,SFE-GSH結(jié)合物對(duì)7個(gè)乳腺癌細(xì)胞體內(nèi)活性評(píng)價(jià)效果明顯優(yōu)于SFE,小鼠體內(nèi)腫瘤移植模型實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了SFE-GSH結(jié)合物的體內(nèi)抗癌效果。3、初步探究了SFE-GSH結(jié)合物抗乳腺癌細(xì)胞分子機(jī)制。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)SFE-GSH結(jié)合物可以誘導(dǎo)MDA-MB-453、MCF-7兩種細(xì)胞凋亡,通過基因芯片分析找到潛在基因靶標(biāo)SCD1,并證實(shí)SFE-GSH結(jié)合物作為一個(gè)抗乳腺癌藥物正是通過下調(diào)SCD1這一機(jī)制發(fā)揮其作用。
【關(guān)鍵詞】：萊菔素 萊菔素-谷胱甘肽結(jié)合物 乳腺癌 Egr1 SCD1 周期阻滯
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-15
• 第一章 緒言15-25
• 1.1 異硫氰酸酯與癌癥預(yù)防15
• 1.2 萊菔硫烷研究進(jìn)展15-21
• 1.2.1 萊菔硫烷概述15-16
• 1.2.2 萊菔硫烷體內(nèi)抗癌機(jī)制研究16
• 1.2.3 萊菔硫烷體外抑癌機(jī)制研究16-19
• 1.2.3.1 化學(xué)預(yù)防機(jī)制17
• 1.2.3.2 阻滯細(xì)胞周期17
• 1.2.3.3 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡17-18
• 1.2.3.4 降低組蛋白去乙�；�(HDAC)活性18-19
• 1.2.3.5 活性氧(ROS)的生成19
• 1.2.4 藥代動(dòng)力學(xué)研究19-20
• 1.2.5 萊菔硫烷臨床研究20-21
• 1.3 萊菔素研究進(jìn)展21-22
• 1.3.1 萊菔素概述及體內(nèi)外抗癌機(jī)制研究21-22
• 1.3.2 萊菔素與巰基類物質(zhì)聯(lián)合用藥22
• 1.4 立題背景與研究意義22-25
• 第二章 萊菔素抗乳腺癌分子機(jī)制研究25-43
• 2.1 前言25
• 2.2 材料與方法25-27
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料25-27
• 2.2.1.1 細(xì)胞系25
• 2.2.1.2 藥物25
• 2.2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材25-26
• 2.2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器26-27
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法27-33
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)27
• 2.3.2 流式細(xì)胞檢測細(xì)胞凋亡27-28
• 2.3.3 流式細(xì)胞驗(yàn)證細(xì)胞周期28
• 2.3.4 RT-PCR檢測mRNA表達(dá)水平28-29
• 2.3.4.1 細(xì)胞RNA的提取28
• 2.3.4.2 反轉(zhuǎn)錄PCR28-29
• 2.3.4.3 RT-PCR29
• 2.3.5 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒與siRNA29-30
• 2.3.5.1 構(gòu)建pcDNA3.1-Egr129
• 2.3.5.2 設(shè)計(jì)并合成Egr1-siRNA29-30
• 2.3.6 蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測蛋白表達(dá)水平30-33
• 2.3.6.1 相關(guān)溶液配制30
• 2.3.6.2 總蛋白提取30
• 2.3.6.3 BCA法定量蛋白質(zhì)濃度30-31
• 2.3.6.4 分離膠、濃縮膠的配置31-32
• 2.3.6.5 電泳32
• 2.3.6.6 轉(zhuǎn)膜32
• 2.3.6.7 封閉32
• 2.3.6.8 一抗、二抗孵育32
• 2.3.6.9 曙光32-33
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論33-43
• 2.4.1 萊菔素誘導(dǎo)三陰性乳腺癌細(xì)胞凋亡并阻滯細(xì)胞周期33-35
• 2.4.2 Egr1作為SFE抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞的一個(gè)分子靶標(biāo)影響細(xì)胞增殖35-38
• 2.4.3 Egr1作為分子靶標(biāo)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期38-40
• 2.4.4 SFE通過Egr1-cyclinB1-Cdc2通路阻滯三陰性乳腺癌細(xì)胞周期40-41
• 2.4.5 討論41-43
• 第三章 萊菔素-谷胱甘肽結(jié)合物體內(nèi)外抗癌細(xì)胞活性評(píng)價(jià)43-49
• 3.1 前言43
• 3.2 材料與方法43-44
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料43-44
• 3.2.1.1 細(xì)胞系43
• 3.2.1.2 藥物43-44
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法44-45
• 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)44
• 3.3.2 CCK8法檢測乳腺癌細(xì)胞生長44
• 3.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析44
• 3.3.4 體內(nèi)腫瘤移植模型44-45
• 3.4 結(jié)果與討論45-49
• 3.4.1 SFE-GSH有效抑制多種腫瘤細(xì)胞生長45-47
• 3.4.2 SFE-GSH影響三陰性乳腺癌裸鼠移植瘤生長47
• 3.4.3 討論47-49
• 第四章 萊菔素-谷胱甘肽結(jié)合物抗乳腺癌分子機(jī)制研究49-59
• 4.1 前言49
• 4.2 材料與方法49
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法49-51
• 4.3.1 細(xì)胞凋亡檢測49-50
• 4.3.2 mRNA微陣列分析SFE-GSH結(jié)合物對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞基因表達(dá)的影響50
• 4.3.3 RT-PCR檢測mRNA表達(dá)水平50-51
• 4.3.4 設(shè)計(jì)并合成SCD1-siRNA51
• 4.3.5 Western Blot法檢測目的蛋白表達(dá)水平51
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論51-59
• 4.4.1 SFE-GSH結(jié)合物引起乳腺癌細(xì)胞凋亡51-52
• 4.4.2 SFE-GSH結(jié)合物引起MDA-MB-453基因差異表達(dá)52-54
• 4.4.3 SCD1是SFE-GSH結(jié)合物抑制乳腺癌細(xì)胞的一個(gè)分子靶標(biāo)54-56
• 4.4.4 討論56-59
• 第五章 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)及展望59-61
• 5.1 結(jié)論59-60
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)60
• 5.3 展望60-61
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 致謝67-69
• 研究成果和發(fā)表的學(xué)術(shù)論文69-71
• 作者和導(dǎo)師簡介71-72
• 附件72-73

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