發(fā)布時(shí)間：2017-04-09 02:00

  本文關(guān)鍵詞：A54多肽修飾氧化還原響應(yīng)型糖脂納米載體的構(gòu)建與評(píng)價(jià)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：功能性納米給藥系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià),旨在克服現(xiàn)有納米給藥系統(tǒng)穩(wěn)定性差、靶向性不足、不能有效釋放藥物等缺陷,近年來已成為藥劑學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。本研究利用腫瘤細(xì)胞內(nèi)外還原型谷胱甘肽(GSH)的濃度差異(100～1000倍),以及腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的濃度差異(7-10倍),設(shè)計(jì)得到還原敏感型的糖脂納米載體(CSO-ss-SA),并進(jìn)一步構(gòu)建A54多肽修飾聚乙二醇(PEG)化的還原敏感型糖脂納米載體(A54-PEG-CSO-ss-SA)。A54多肽經(jīng)PEG鏈接修飾的嫁接物膠束,可延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)時(shí)間,提高嫁接物膠束的腫瘤組織靶向分布。二硫鍵作為糖脂間的橋鏈,特異性響應(yīng)腫瘤組織內(nèi)環(huán)境較高的GSH濃度,發(fā)生二硫鍵斷裂,迅速釋放藥物,正常組織內(nèi)無(wú)GSH濃度的響應(yīng)性,釋放藥物少,可實(shí)現(xiàn)納米給藥系統(tǒng)的高效安全治療。本研究以3,3-二硫代二丙酸作為交聯(lián)劑,合成二硫鍵糖脂嫁接物(CSO-ss-SA),采用碳二亞胺(EDC)偶聯(lián)法、N,N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯(DSC)為鏈橋,合成A54-PEG-CSO-ss-SA。A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物可在水性介質(zhì)中自聚集形成膠束,其數(shù)均粒徑為50.83±10.4 nm,分布均勻,臨界膠束濃度為54.9μg/mL。以阿霉素(DOX)為模型藥物,經(jīng)透析法制備嫁接物載藥納米粒(A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX),其數(shù)均粒徑為48.36±4.3 nm,包封率為77.92%,在10 mM GSH濃度條件下,快速釋放包封藥物DOX。體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,A54多肽修飾的納米載體,可加快BEL-7402細(xì)胞攝取,增加細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度。以尼羅紅(NR)為模型藥物,二硫鍵鏈接的糖脂納米載體(A54-PEG-CSO-ss-SA)細(xì)胞內(nèi)釋放速率明顯大于非二硫鍵鏈接的糖脂納米載體(A54-PEG-CSO-SA)。 A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX的IC50值為1.34±0.58μg/mL,明顯低于CSO-ss-SA/DOX及非敏感對(duì)照A54-PEG-CSO-SA/DOX給藥系統(tǒng)的IC50值,藥物細(xì)胞毒性提高了0.6-1.0倍。以荷BEL-7402瘤裸鼠為模型動(dòng)物,A54-PEG-CSO-ss-SA/DiR體內(nèi)分布結(jié)果表明,A54多肽的修飾能夠顯著增加嫁接物膠束在腫瘤部位的分布,且能夠維持較長(zhǎng)時(shí)間。FITC標(biāo)記納米載體,以NR為模型藥物,體內(nèi)藥物釋放結(jié)果表明,A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束能夠特異性響應(yīng)腫瘤組織內(nèi)較高GSH濃度,快速釋放藥物,而肝臟組織內(nèi)基本無(wú)藥物釋放；心臟組織切片的熒光照片顯示,A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束在心臟組織內(nèi)未見有明顯分布。模型動(dòng)物藥效學(xué)研究結(jié)果顯示,等劑量的A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX嫁接物載藥納米粒,其療效與市售阿霉素制劑相當(dāng),其正常組織內(nèi)游離藥物濃度,以及心臟組織內(nèi)藥物分布,均明顯低于市售制劑,具有較高的安全性。本研究結(jié)果表明,A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束具有較好的BEL-7402肝癌組織靶向性,在靶細(xì)胞內(nèi)快速釋放藥物,提高藥物療效。同時(shí),可減少正常組織及心臟的化療藥物毒性,提高用藥安全性,是一種具有潛在發(fā)展優(yōu)勢(shì)的主動(dòng)靶向納米給藥系統(tǒng)。
【關(guān)鍵詞】：糖脂納米膠束 主動(dòng)靶向 氧化還原響應(yīng) 腫瘤細(xì)胞內(nèi)環(huán)境釋放 減少化療藥物毒性
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 引言13-15
• 第一章 A54多肽修飾的PEG化還原敏感型糖脂納米載體的合成及理化性質(zhì)研究15-27
• 1.1 儀器與試劑15-16
• 1.1.1 儀器15
• 1.1.2 試劑15-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 1.2.1 還原敏感型糖脂嫁接物(CSO-ss-SA)的合成16
• 1.2.2 A54多肽修飾PEG化還原敏感型糖脂嫁接物(A54-PEG-CSO-ss-SA)合成16-17
• 1.2.3 A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物結(jié)構(gòu)確證17
• 1.2.4 CSO-ss-SA嫁接物的氨基取代度測(cè)定17
• 1.2.5 嫁接物臨界膠束濃度測(cè)定17-18
• 1.2.6 嫁接物膠束粒徑、表面電位測(cè)定及透射電鏡觀察18
• 1.2.7 A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束還原敏感性研究18-19
• 1.3 結(jié)果與討論19-25
• 1.3.1 A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物的合成與結(jié)構(gòu)確證19-21
• 1.3.2 CSO-ss-SA嫁接物的氨基取代度21
• 1.3.3 嫁接物臨界膠束濃度21-22
• 1.3.4 嫁接物膠束粒徑、表面電位測(cè)定及透射電鏡觀察22-23
• 1.3.5 A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束還原敏感性研究23-25
• 1.4 本章小結(jié)25-27
• 第二章 A54多肽修飾PEG化還原敏感型糖脂嫁接物載阿霉素納米粒制備及理化性質(zhì)研究27-35
• 2.1 儀器與試劑27-28
• 2.1.1 儀器27
• 2.1.2 試劑27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-30
• 2.2.1 堿基阿霉素的制備28
• 2.2.2 載藥納米粒制備28
• 2.2.3 載藥納米粒的粒徑與表面電位28
• 2.2.4 載藥納米粒透射電鏡觀察28-29
• 2.2.5 載藥納米粒的載藥量與包封率測(cè)定29
• 2.2.6 載藥納米粒的體外藥物釋放29-30
• 2.3 結(jié)果與討論30-33
• 2.3.1 載藥納米粒制備30-31
• 2.3.2 載藥納米粒的粒徑與表面電位31-32
• 2.3.3 載藥納米粒包封率與載藥量32
• 2.3.4 載藥納米粒藥物釋放動(dòng)力學(xué)32-33
• 2.4 本章小結(jié)33-35
• 第三章 載阿霉素納米粒的抗腫瘤藥效學(xué)研究35-55
• 3.1 儀器與試劑35-36
• 3.1.1 儀器35
• 3.1.2 試劑35-36
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法36-40
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)36
• 3.2.2 載藥納米粒的細(xì)胞攝取36-37
• 3.2.3 載藥納米粒的細(xì)胞內(nèi)藥物釋放37
• 3.2.4 載藥納米粒的細(xì)胞藥效37-38
• 3.2.5 荷瘤裸鼠模型的建立38
• 3.2.6 嫁接物膠束體內(nèi)分布38
• 3.2.7 載藥納米粒體內(nèi)藥物釋放38-39
• 3.2.8 載藥納米粒在模型動(dòng)物的藥效39-40
• 3.3 結(jié)果與討論40-52
• 3.3.1 載藥納米粒的細(xì)胞攝取40-44
• 3.3.2 載藥納米粒細(xì)胞內(nèi)藥物釋放44-46
• 3.3.3 載藥納米粒的細(xì)胞毒性46-48
• 3.3.4 嫁接物膠束的體內(nèi)分布48-49
• 3.3.5 載藥納米粒體內(nèi)藥物釋放49-50
• 3.3.6 載藥納米粒體內(nèi)抗腫瘤藥效研究50-52
• 3.4 本章小結(jié)52-55
• 結(jié)論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 綜述61-81
• 參考文獻(xiàn)75-81
• 作者簡(jiǎn)歷81

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  本文關(guān)鍵詞：A54多肽修飾氧化還原響應(yīng)型糖脂納米載體的構(gòu)建與評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：294182