本文關(guān)鍵詞：新型骨架小分子化合物南強(qiáng)菌素體內(nèi)外抗腫瘤活性及作用機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景癌癥嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康,化學(xué)治療方法已成為治療癌癥的主要手段之一,天然產(chǎn)物已然成為抗腫瘤藥物的重要來(lái)源。南強(qiáng)菌素是源于海洋微生物-紅樹(shù)內(nèi)生真菌擬莖點(diǎn)霉(Phomopsi sp.)的次級(jí)代謝產(chǎn)物,分子結(jié)構(gòu)新穎獨(dú)特,為含有氧橋的環(huán)氧二烯衍生物,是天然產(chǎn)物中較為少見(jiàn)的骨架結(jié)構(gòu)。具有作用機(jī)制新、抗腫瘤活性高、毒副作用小、結(jié)構(gòu)新穎等優(yōu)勢(shì),且非臨床安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)表明,其急性毒性較紫杉醇、長(zhǎng)春新堿等抗腫瘤藥物低,具有進(jìn)一步研究成為抗腫瘤藥物的價(jià)值。本研究采用多種體內(nèi)外試驗(yàn)方法對(duì)南強(qiáng)菌素對(duì)人乳腺癌增殖的抑制活性進(jìn)行了評(píng)價(jià),并探討了作用機(jī)制。此外,我們還研究了南強(qiáng)菌素對(duì)腫瘤細(xì)胞紫杉醇耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及其逆轉(zhuǎn)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法1.南強(qiáng)菌素體內(nèi)外抗腫瘤活性及作用機(jī)制：MTT法評(píng)價(jià)化合物南強(qiáng)菌素對(duì)一系列腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用,并選取敏感細(xì)胞株人乳腺癌MCF-7細(xì)胞進(jìn)一步研究。DNA Ladder和Annexin V/PI雙染法分別檢測(cè)了南強(qiáng)菌素誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡作用；流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)南強(qiáng)菌素對(duì)MCF-7細(xì)胞周期阻滯作用;Western-blotting法檢測(cè)了南強(qiáng)菌素對(duì)MCF-7凋亡相關(guān)蛋白caspase-3、9,parp, p21,Bcl-2及Bax表達(dá)的影響；通過(guò)構(gòu)建裸鼠異體移植瘤模型,以尾靜脈注射給藥,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,處死裸鼠,取出腫瘤并稱重,評(píng)價(jià)南強(qiáng)菌素體內(nèi)抗腫瘤活性。通過(guò)體外微管動(dòng)力學(xué)以及免疫熒光法觀察南強(qiáng)菌素對(duì)微管的影響。2.MTT法檢測(cè)南強(qiáng)菌素對(duì)A549/T耐藥細(xì)胞與A549敏感細(xì)胞的毒性及其對(duì)紫杉醇敏感性的影響,以Annexin V法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和Rh123在耐藥腫瘤細(xì)胞中的積累,HPLC測(cè)定細(xì)胞內(nèi)紫杉醇的蓄積量,Western-blotting檢測(cè)蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.南強(qiáng)菌素對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及其機(jī)制。體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)及裸鼠異體移植瘤體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示,南強(qiáng)菌素在體內(nèi)、外均可顯著抑制多種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。南強(qiáng)菌素抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的分子機(jī)制可歸納以下方面：(1)南強(qiáng)菌素阻滯腫瘤細(xì)胞有絲分裂,使細(xì)胞周期停滯在G2/M期,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無(wú)法增殖；(2)南強(qiáng)菌素具有干擾微管解聚-聚合動(dòng)力學(xué)的作用,體外微管動(dòng)力學(xué)曲線表明,南強(qiáng)菌素具有明顯的促進(jìn)微管聚合作用；(3)南強(qiáng)菌素可降低actin表達(dá)水平,對(duì)actin的細(xì)胞骨架功能同樣具有明顯的干擾作用；(4)南強(qiáng)菌素可調(diào)節(jié)多種相關(guān)蛋白表達(dá)水平(Caspase3、Caspase9、P21、Bcl-2、Bax、Parp、Bcl-2-P),誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,從而達(dá)到了抗腫瘤的效果。2、南強(qiáng)菌素對(duì)腫瘤細(xì)胞紫杉醇耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制。研究結(jié)果顯示,南強(qiáng)菌素通過(guò)增強(qiáng)耐藥腫瘤細(xì)胞A549/T對(duì)紫杉醇的蓄積能力,增加紫杉醇誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞凋亡率,顯著提高A549/T細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性。此外,南強(qiáng)菌素可明顯抑制A549/T細(xì)胞中Ⅲ型p微管蛋白的表達(dá)水平,有效地逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐藥性。結(jié)論化合物南強(qiáng)菌素具有較強(qiáng)的體內(nèi)外抗腫瘤活性,其作用機(jī)制是以微管為作用靶點(diǎn),通過(guò)促進(jìn)微管聚合,以及線粒體介導(dǎo)的凋亡通路誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。同時(shí),南強(qiáng)菌素阻滯腫瘤細(xì)胞周期于G2/M期,抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。此外,南強(qiáng)菌素可有效提高耐藥細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性,逆轉(zhuǎn)A549/T細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐藥作用。因此,南強(qiáng)菌素有潛力成為抗癌的候選藥物之一。
【關(guān)鍵詞】：南強(qiáng)菌素 微管抑制劑 腫瘤細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期阻滯 多藥耐藥性
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要10-13
• ABSTRACT13-16
• 符號(hào)說(shuō)明16-18
• 前言18-28
• 1 微管18-21
• 1.1 微管基本結(jié)構(gòu)18-20
• 1.2 微管結(jié)合蛋白20-21
• 1.3 微管功能影響因素21
• 2 微管與腫瘤的相關(guān)性21-25
• 2.1 微管靶向藥物結(jié)合位點(diǎn)21-22
• 2.2 微管與細(xì)胞凋亡22
• 2.3 微管與腫瘤的血管形成22
• 2.4 臨床常用微管抑制劑22-25
• 3 海洋天然產(chǎn)物25-28
• 第一部分 南強(qiáng)菌素抗腫瘤活性及機(jī)制研究28-54
• 1 實(shí)驗(yàn)材料28-31
• 1.1 化合物28-29
• 1.2 細(xì)胞株29
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物29
• 1.4 試劑29-30
• 1.5 儀器設(shè)備30-31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-34
• 2.1 腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)31
• 2.2 人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)31
• 2.3 人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231裸鼠異體移植瘤試驗(yàn)31-33
• 2.4 DNA Ladder法檢測(cè)細(xì)胞凋亡試驗(yàn)33
• 2.5 AnnexinV-FITC法檢測(cè)細(xì)胞凋亡33
• 2.6 Western blotting法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)試驗(yàn)33
• 2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞周期試驗(yàn)33
• 2.8 南強(qiáng)菌素對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞形態(tài)的影響33-34
• 2.9 南強(qiáng)菌素對(duì)體外微管蛋白聚合/解聚動(dòng)力學(xué)34
• 2.10 南強(qiáng)菌素對(duì)細(xì)胞骨架微絲與微管功能34
• 2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法34
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-50
• 3.1 南強(qiáng)菌素對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用34-36
• 3.2 南強(qiáng)菌素對(duì)MCF-7和MDA-MB-231生長(zhǎng)抑制作用36-37
• 3.3 南強(qiáng)菌素對(duì)接種乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231裸鼠的生長(zhǎng)抑制作用37-40
• 3.4 南強(qiáng)菌素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡40-41
• 3.5 南強(qiáng)菌素對(duì)MCF-7細(xì)胞調(diào)亡率的影響41-42
• 3.6 南強(qiáng)菌素調(diào)控MCF-7腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)42-43
• 3.7 南強(qiáng)菌素對(duì)MCF-7細(xì)胞周期的影響43-45
• 3.8 南強(qiáng)菌素誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞形態(tài)改變45
• 3.9 南強(qiáng)菌素對(duì)體外微管蛋白聚合懈聚動(dòng)力學(xué)的影響45-46
• 3.10 南強(qiáng)菌素對(duì)細(xì)胞骨架微絲與微管功能的影響46-50
• 4 討論50-54
• 5. 結(jié)論54
• 第二部分 南強(qiáng)菌素對(duì)紫杉醇耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制54-66
• 1 實(shí)驗(yàn)材料54-56
• 1.1 化合物54
• 1.2 細(xì)胞株54
• 1.3 試劑54-56
• 1.4 儀器設(shè)備56
• 2 實(shí)驗(yàn)方法56-58
• 2.1 南強(qiáng)菌素對(duì)細(xì)胞存活能力影響56
• 2.2 南強(qiáng)菌素對(duì)A549/T細(xì)胞紫杉醇耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用56-57
• 2.3 細(xì)胞凋亡檢測(cè)57
• 2.4 耐藥細(xì)胞中紫杉醇蓄積能力檢測(cè)57
• 2.5 P-糖蛋白外泵轉(zhuǎn)運(yùn)功能檢測(cè)57
• 2.6 蛋白表達(dá)水平檢測(cè)57-58
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理58
• 3 結(jié)果58-63
• 3.1 細(xì)胞存活能力檢測(cè)結(jié)果58
• 3.2 南強(qiáng)菌素對(duì)A549/T細(xì)胞紫杉醇耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用58-59
• 3.3 南強(qiáng)菌素對(duì)MDR腫瘤細(xì)胞凋亡的影響59-60
• 3.4 南強(qiáng)菌素對(duì)MDR腫瘤細(xì)胞中紫杉醇蓄積的影響60-61
• 3.5 南強(qiáng)菌素對(duì)P-gp外泵轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響61-62
• 3.6 南強(qiáng)菌素對(duì)MDR腫瘤細(xì)胞的Ⅲ型β微管蛋白表達(dá)水平的影響62-63
• 4 討論63-65
• 5 結(jié)論65-66
• 參考文獻(xiàn)66-76
• 致謝76-77
• 碩士學(xué)位期間發(fā)表或待發(fā)表的論文77-78
• 附件78-86
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表86

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：新型骨架小分子化合物南強(qiáng)菌素體內(nèi)外抗腫瘤活性及作用機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：283581