本文關(guān)鍵詞：雷帕霉素誘導(dǎo)自噬對(duì)吸煙和D-半乳糖致器官損傷的保護(hù)作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是細(xì)胞內(nèi)一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,其在體內(nèi)主要以mTORC1和mTORC2兩種形式存在,調(diào)控蛋白質(zhì)合成、脂肪生成、能量代謝、自噬及細(xì)胞骨架等,廣泛參與了機(jī)體生長(zhǎng)、發(fā)育、衰老、代謝、免疫、腫瘤發(fā)生等過程。課題組前期的體外實(shí)驗(yàn)證實(shí),激活自噬可明顯減緩過氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞老化;抑制自噬增加了成纖維細(xì)胞中p53、p21等細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá),誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)停止和衰老,提示自噬參與了細(xì)胞衰老的過程,但mTOR調(diào)節(jié)衰老性器官損傷是否與自噬活性相關(guān),目前尚不清楚。雷帕霉素作為首個(gè)已知的mTOR抑制劑,目前在臨床上主要作為免疫抑制劑用于器官移植后排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的治療。為進(jìn)一步擴(kuò)大雷帕霉素的臨床適應(yīng)癥,本研究擬采用氧化應(yīng)激誘導(dǎo)器官衰老性損傷、記憶力減退模型,探討雷帕霉素的保護(hù)作用。目的:研究雷帕霉素(Rapamycin,Rap)對(duì)吸煙、D-半乳糖致氧化應(yīng)激誘導(dǎo)靶器官損傷是否具有保護(hù)作用,并探討其機(jī)制是否與自噬水平相關(guān)。方法:70只雄性昆明種小鼠(體重20-22g)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為7組,每組10只。A組為正常對(duì)照(Control)組;B組為吸煙(Smoking)組,小鼠每天被動(dòng)吸煙4次,每次20分鐘,每周6天,連續(xù)吸煙8周;C組為吸煙+雷帕霉素(Smoking+Rap)組,小鼠在吸煙第5周開始同時(shí)腹腔注射Rap(2mg/kg/d),連續(xù)給藥4周;D組為吸煙+氯喹(Smoking+CQ)組,小鼠在吸煙第5周開始同時(shí)腹腔注射CQ(50mg/kg/d),連續(xù)給藥4周;E組為D-半乳糖(D-Gal)組,小鼠每天用頸背部皮下注射D-半乳糖(80mg/kg/d)誘導(dǎo)衰老,連續(xù)給藥8周;F組為D-半乳糖+雷帕霉素(D-Gal+Rap)組,小鼠在給D-半乳糖第5周開始同時(shí)腹腔注射Rap(2mg/kg/d),連續(xù)給藥4周;G組為D-半乳糖+氯喹(D-Gal+CQ)組,小鼠在給D-半乳糖第5周開始同時(shí)腹腔注射CQ(50mg/kg/d),連續(xù)給藥4周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后A、E、F、G組小鼠進(jìn)行為期6天的morris水迷宮實(shí)驗(yàn),檢測(cè)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。然后處死動(dòng)物,取部分心臟、腦、肺組織于-80℃超低溫冰箱凍存;另取部分組織于甲醛溶液中固定,用蘇木素-伊紅(he)染色法觀察小鼠心臟、腦、肺組織的形態(tài)學(xué)改變情況。用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定心臟、腦、肺組織超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,sod)的活力;硫代巴比妥酸法測(cè)定每組小鼠心臟、腦、肺組織的丙二醛(malondialdehyde,mda)的含量;蛋白質(zhì)印跡法(westernblot)檢測(cè)心臟、腦、肺組織中p62蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1.morris水迷宮檢測(cè)發(fā)現(xiàn),隨著訓(xùn)練時(shí)間、次數(shù)的增加,d-gal組與control組相比,小鼠找到平臺(tái)的平均逃避潛伏期明顯延長(zhǎng);撤出平臺(tái)后,小鼠穿越原平臺(tái)位置的次數(shù)明顯減少(p0.05),提示d-半乳糖誘導(dǎo)了小鼠學(xué)習(xí)記憶減退。與d-gal組相比,自噬抑制劑氯喹干預(yù)后這種記憶衰退情況更加嚴(yán)重,但結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而預(yù)先給予雷帕霉素干預(yù)可顯著改善d-半乳糖所致學(xué)習(xí)記憶和空間記憶的減退(p0.05)。2.光鏡下control組小鼠心肌組織排列整齊均勻,smoking組和d-gal模型組出現(xiàn)組織細(xì)胞間空隙變大,炎癥細(xì)胞變多;給予氯喹干預(yù)后心肌細(xì)胞間間隙變得模糊,炎癥細(xì)胞更加明顯,而雷帕霉素干預(yù)后這種現(xiàn)象有所好轉(zhuǎn),提示雷帕霉素對(duì)吸煙、d-半乳糖致心肌損傷小鼠具有一定的保護(hù)作用;control組小鼠海馬神經(jīng)元染色均勻,排列整齊;smoking組和d-gal組出現(xiàn)神經(jīng)元缺失,部分神經(jīng)元形態(tài)異常,排列紊亂,細(xì)胞變細(xì)、變長(zhǎng),胞體及胞核變小、皺縮,顯示明顯的變性樣改變;氯喹干預(yù)后神經(jīng)元缺失等現(xiàn)象更加嚴(yán)重,而預(yù)先給予雷帕霉素干預(yù)可明顯改善神經(jīng)元排列紊亂、缺失等現(xiàn)象。control組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰,肺泡完整,肺泡腔無滲出,肺間隔正常;smoking組和d-gal模型組肺組織結(jié)構(gòu)紊亂、肺泡萎縮塌陷,肺泡壁增厚結(jié)構(gòu)缺失,炎細(xì)胞浸潤(rùn);給予氯喹干預(yù)后肺組織結(jié)構(gòu)更加紊亂,炎細(xì)胞數(shù)量更多,而雷帕霉素干預(yù)后肺組織結(jié)構(gòu)紊亂現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn),炎細(xì)胞數(shù)量也相對(duì)變少。3.與control組相比,smoking和d-gal模型組小鼠肺、心臟、腦組織中mda含量顯著增加,sod活力明顯降低,p62蛋白的表達(dá)水平顯著增強(qiáng)(p0.05);氯喹干預(yù)后,mda含量進(jìn)一步增加(p0.05),sod活力進(jìn)一步降低(p0.05),p62蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.05);預(yù)先給予雷帕霉素干預(yù)可顯著降低吸煙和D-半乳糖誘導(dǎo)的MDA含量增加(P0.05),升高SOD活力(P0.05),降低p62蛋白的表達(dá)水平(P0.05)。結(jié)論:雷帕霉素可明顯改善D-半乳糖皮下注射所致腦損傷小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的衰退,減輕被動(dòng)吸煙和D-半乳糖注射引起的小鼠心、腦、肺組織的氧化損傷,機(jī)制可能是與其阻斷mTOR信號(hào)通路,增加細(xì)胞自噬活性相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：吸煙 D-半乳糖 器官損傷 自噬 氯喹 雷帕霉素
【學(xué)位授予單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-27
• 結(jié)果27-35
• 討論35-37
• 結(jié)論37
• 展望37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 文獻(xiàn)綜述41-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 攻讀學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果52-53
• 致謝53

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本文編號(hào)：281929