發(fā)布時間：2017-03-29 20:09

  本文關鍵詞：病灶細胞內(nèi)藥物pH敏感釋放的糖脂納米給藥系統(tǒng)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著納米載體技術的不斷進步,聚合物膠束可通過EPR效應在腫瘤部位大量富集,實現(xiàn)很好的被動靶向。經(jīng)特異性配體的修飾,增加載體對腫瘤細胞的親和力,實現(xiàn)載體對藥物的定向輸送和腫瘤主動靶向,為腫瘤治療帶來了新的希望。研究發(fā)現(xiàn),給藥系統(tǒng)藥物劑量與療效不完全成正比,腫瘤治療效果仍面臨挑戰(zhàn),這可能與納米載體的病灶細胞內(nèi)藥物釋放有關。本研究構(gòu)建了一種pH敏感型糖脂納米載體,能在腫瘤細胞內(nèi)快速釋放藥物,提高游離藥物的濃度,從而提高治療效果。本研究以對醛基苯甲酸(4-formylbenzoic acid, FBA)為橋鏈試劑,采用兩步法交聯(lián)親水性低分子量殼聚糖(chitosan, CSO)和疏水性十八醇(Stearyl Alcohol, SA),構(gòu)建西弗堿型糖脂嫁接物(4-formylbenzoic acid-linked stearic acid grafted chitosan, CSO-FBA-SA),核磁共振氫譜法確證嫁接物結(jié)構(gòu),其氨基取代度為7.6%。在水性介質(zhì)中可自組裝形成“核-殼”結(jié)構(gòu)膠束,臨界膠束濃度為194.9μg/mL。透射電鏡下觀察呈類球形,分布較均一,粒徑為72.3±12.4 nm,表面電位為31.6±0.5 mV。以堿基阿霉素(doxorubicin, DOX)為模型藥物,透析法制得西弗堿型糖脂嫁接物載藥納米粒,有機溶劑提取法及熒光分光光度法,測得藥物包封率為73.2%。體外不同pH條件下的釋放結(jié)果顯示,CSO-FBA-SA/DOX載藥納米粒在低pH環(huán)境下,具有快速釋藥行為,釋放速率明顯快于同pH條件下非敏感的CSO-SA/DOX納米粒。細胞攝取實驗結(jié)果顯示,CSO-FBA-SA/DOX納米粒在腫瘤細胞的內(nèi)在化過程呈時間依賴性,且攝取速率明顯快于游離DOX。細胞定量攝取實驗顯示了相同的研究結(jié)果。細胞內(nèi)釋放結(jié)果顯示,本研究所觀察的24h內(nèi),CSO-FBA-SA載藥納米粒在腫瘤細胞內(nèi)能快速釋放出游離藥物,釋放速度明顯快于CSO-SA載藥納米粒。CSO-FBA-SA/DOX載藥納米粒在MCF-7上的細胞毒性,分別是CSO-SA/DOX納米粒和游離DOX的3.75倍和4.77倍,顯示細胞毒性與CSO-FBA-SA/DOX納米粒的藥物釋放速率呈正相關。受MCF-7細胞溶酶體內(nèi)更低pH環(huán)境的影響,CSO-FBA-SA/DOX納米粒具有更快的藥物釋放速率,從而使該納米粒的MCF-7的IC50值明顯低于SKOV-3細胞,兩者相差2.12倍。給藥系統(tǒng)的細胞內(nèi)游離阿霉素濃度經(jīng)時變化研究結(jié)果顯示,與CSO-SA/DOX納米粒和游離DOX相比,CSO-FBA-SA/DOX納米粒的藥時曲線下面積最大,主要歸因于給藥系統(tǒng)的快速攝取及攝取后的藥物快速釋放。因此,CSO-FBA-SA/DOX納米粒對腫瘤細胞增殖的抑制作用,明顯強于CSO-SA/DOX納米粒和游離DOX。體內(nèi)模擬藥物尼羅紅的釋放實驗證實,西弗堿型糖脂納米載體能特異性響應腫瘤組織內(nèi)低pH環(huán)境,比非敏感的CSO-SA嫁接物載體有更快的藥物釋放速率。正常組織中,本研究觀察的24 h內(nèi),除肝臟有少量的藥物釋放外,其他組織均未發(fā)現(xiàn)明顯的尼羅紅的釋放。顯示西弗堿型糖脂納米粒可明顯降低腫瘤化療藥物的正常組織毒性。進一步的心臟切片顯示市售鹽酸阿霉素制劑有明顯的心臟毒性,而西弗堿型糖脂納米粒無明顯表現(xiàn)。模型動物抗腫瘤藥效學結(jié)果顯示,西弗堿型糖脂嫁接物載藥納米粒的抑瘤率為70.1%,而非敏感載藥納米粒的抑瘤率為60.9%,西弗堿型糖脂嫁接物載藥納米粒在抗腫瘤藥效上有明顯提高,且與市售鹽酸阿霉素制劑(抑瘤率為74.2%)抗腫瘤效果相當。西弗堿型糖脂納米給藥系統(tǒng),可選擇性地在腫瘤部位釋放藥物,減小正常組織的藥物釋放毒性。因此,西弗堿型糖脂嫁接物載藥納米粒是一種安全、有效、具有潛在發(fā)展價值的納米給藥系統(tǒng)。
【關鍵詞】：糖脂納米載體 pH敏感 選擇性藥物釋放 經(jīng)時變化
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R943
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 引言13-15
• 第一章 西弗堿型糖脂嫁接物的合成及理化性質(zhì)研究15-25
• 1.1 儀器與試劑15-16
• 1.1.1 儀器15
• 1.1.2 試劑15-16
• 1.2 實驗方法16-18
• 1.2.1 西弗堿型糖脂嫁接物的合成16-17
• 1.2.2 西弗堿型糖脂嫁接物的結(jié)構(gòu)確證17
• 1.2.3 嫁接物氨基取代度測定17
• 1.2.4 臨界膠束濃度測定17-18
• 1.2.5 嫁接物膠束粒徑及表面電位測定18
• 1.2.6 透射電子顯微鏡觀察18
• 1.3 結(jié)果與討論18-22
• 1.3.1 西弗堿型糖脂嫁接物的合成及結(jié)構(gòu)確證18-20
• 1.3.2 嫁接物氨基取代度20
• 1.3.3 嫁接物臨界膠束濃度20-21
• 1.3.4 粒徑與表面電位21-22
• 1.3.5 透射電子顯微鏡觀察22
• 1.4 本章小結(jié)22-25
• 第二章 西弗堿型糖脂嫁接物載阿霉素納米粒的制備及理化性質(zhì)25-31
• 2.1 儀器與試劑25
• 2.1.1 儀器25
• 2.1.2 試劑25
• 2.2 實驗方法25-28
• 2.2.1 堿基阿霉素的制備25-26
• 2.2.2 弗堿型糖脂嫁接物載阿霉素納米粒制備26
• 2.2.3 西弗堿型糖脂嫁接物載藥納米粒粒徑與表面電位測定26
• 2.2.4 載藥納米粒透射電子顯微鏡觀察26
• 2.2.5 CSO-FBA-SA/DOX載藥納米粒包封率及載藥量的測定26-27
• 2.2.6 CSO-FBA-SA/DOX載藥納米粒的體外藥物釋放行為研究27-28
• 2.3 結(jié)果與討論28-30
• 2.3.1 西弗堿型糖脂嫁接物載阿霉素納米粒的制備28
• 2.3.2 載藥納米粒粒徑與表面電位測定及形態(tài)學特征28-29
• 2.3.3 CSO-FBA-SA/DOX納米粒的包封率及載藥量測定29
• 2.3.4 載藥納米粒的體外藥物釋放動力學29-30
• 2.4 本章小結(jié)30-31
• 第三章 阿霉素載藥納米粒的細胞內(nèi)藥物遞釋及體外抗腫瘤活性31-43
• 3.1 儀器與試劑31-32
• 3.1.1 儀器31
• 3.1.2 試劑31-32
• 3.2 實驗方法32-35
• 3.2.1 細胞培養(yǎng)32
• 3.2.2 載藥納米粒的細胞攝取32
• 3.2.3 載藥納米粒的細胞定量攝取32-33
• 3.2.4 載藥納米粒的細胞內(nèi)藥物釋放33-34
• 3.2.5 嫁接物膠束及載藥納米粒的細胞毒性34
• 3.2.6 載藥納米粒的細胞內(nèi)游離藥物濃度的測定34-35
• 3.3 結(jié)果與討論35-41
• 3.3.1 載藥納米粒的細胞攝取35-37
• 3.3.2 載藥納米粒細胞內(nèi)藥物釋放37-38
• 3.3.3 載藥納米粒的細胞毒性38-40
• 3.3.4 胞內(nèi)給藥系統(tǒng)的藥物釋放動力學40-41
• 3.4 本章小結(jié)41-43
• 第四章 阿霉素載藥納米粒體內(nèi)藥物遞釋及抗腫瘤藥效43-51
• 4.1 儀器與試劑43-44
• 4.1.1 儀器43
• 4.1.2 試劑43-44
• 4.2 實驗方法44-45
• 4.2.1 荷瘤裸鼠模型的建立44
• 4.2.2 載藥納米粒體內(nèi)藥物釋放44-45
• 4.2.3 載藥納米粒的模型動物藥效學研究45
• 4.2.4 載藥納米粒模型動物心臟毒性評價45
• 4.3 結(jié)果與討論45-49
• 4.3.1 載藥納米粒體內(nèi)藥物釋放46-47
• 4.3.2 載藥納米粒模型動物藥效47-48
• 4.3.3 載藥納米粒安全性評價48-49
• 4.4 本章小結(jié)49-51
• 結(jié)論51-53
• 參考文獻53-57
• 文獻綜述57-77
• 參考文獻71-77
• 作者簡歷77

【參考文獻】

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1 倪蘋;張經(jīng)緯;劉嘉莉;陳倩瑩;王廣基;周芳;;細胞藥代動力學研究進展[J];藥學進展;2014年12期

  本文關鍵詞：病灶細胞內(nèi)藥物pH敏感釋放的糖脂納米給藥系統(tǒng)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：275303