目的:研究鈣激活中性蛋白酶(Calpain)抑制劑Calpeptin對雌二醇(E2)誘導(dǎo)人乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A轉(zhuǎn)化及干性標(biāo)志物表達(dá)的影響,并探討其作用機(jī)制。方法:以人乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A為研究對象,采用E2誘導(dǎo)制備轉(zhuǎn)化細(xì)胞模型。將細(xì)胞分為對照組[0.1%二甲基亞砜(DMSO)]、E2轉(zhuǎn)化組(50 nmol/L)、E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組(50 nmol/L E2+1μmol/L Calpeptin),以相應(yīng)含藥培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)15代。然后采用MTT法檢測細(xì)胞的增殖率(24、48 h),采用平板克隆試驗(yàn)檢測細(xì)胞的克隆形成率,采用懸浮成球試驗(yàn)檢測細(xì)胞的成球數(shù);采用實(shí)時熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測細(xì)胞中干性標(biāo)志物(CD44、Nanog、OCT4)和細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)m RNA表達(dá)水平,并采用Western blotting法檢測細(xì)胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表達(dá)水平。另取E2轉(zhuǎn)化細(xì)胞分為對照組(0.1%DMSO)和U0126(ERK抑制劑)組(10μmol/L),按上述方法測定細(xì)胞的克隆形成率、成球數(shù)以及細(xì)胞中CD44...

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圖1各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征顯微圖（×200)

細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，E2轉(zhuǎn)化組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯變化，細(xì)胞呈長梭形貼壁生長，細(xì)胞體積變大，具有一定的間質(zhì)細(xì)胞樣特征；E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組細(xì)胞形態(tài)與對照組接近。各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征顯微圖見圖1。3.2Calpeptin對E2轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖能力的影響

圖2各組細(xì)胞克隆形成情況平板圖

與對照組比較，E2轉(zhuǎn)化組細(xì)胞的克隆形成率顯著升高（P<0.01）；與E2轉(zhuǎn)化組比較，E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組細(xì)胞的克隆形成率顯著降低（P<0.01）。各組細(xì)胞克隆形成情況平板圖見圖2，克隆形成率測定結(jié)果見表3。3.4Calpeptin對E2轉(zhuǎn)化細(xì)胞自我更新能力的影響

圖3各組細(xì)胞成球情況顯微圖（×40)

與對照組比較，E2轉(zhuǎn)化組細(xì)胞的成球數(shù)顯著增加（P<0.01）；與E2轉(zhuǎn)化組比較，E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組細(xì)胞的成球數(shù)顯著減少（P<0.05）。各組細(xì)胞成球情況顯微圖見圖3，成球數(shù)測定結(jié)果表4。3.5Calpeptin對E2轉(zhuǎn)化細(xì)胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK....

圖4各組細(xì)胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK、p-ERK蛋白表達(dá)電泳圖

與對照組比較，E2轉(zhuǎn)化組細(xì)胞中CD44、Nanog、OCT4和p-ERK蛋白的表達(dá)水平均顯著升高（P<0.01）；與E2轉(zhuǎn)化組比較，E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組細(xì)胞中CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01);3組細(xì)胞中ER....

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