本文關(guān)鍵詞：搭載阿霉素與p53基因的支鏈狀聚乙烯亞胺—環(huán)糊精超分子體系抑制HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：抗腫瘤藥物通常存在半衰期短、易產(chǎn)生耐藥性等局限。傳統(tǒng)的化療方法要達(dá)到一定的治療效果往往需要在短時(shí)間內(nèi)頻繁給藥,導(dǎo)致全身性血藥濃度高、毒副作用大,易產(chǎn)生耐藥性等問題。基因治療是將目的基因通過載體系統(tǒng)導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞或組織,并表達(dá)出有療效作用的產(chǎn)物,在體內(nèi)發(fā)揮治療疾病的目的。由于基因與藥物協(xié)同治療具有療效好,通過給與特定的基因,可以降低化療藥物的劑量,減少其毒副作用,逆轉(zhuǎn)腫瘤的多耐藥現(xiàn)象,提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性�；蛑委煹年P(guān)鍵的技術(shù)是建立高效、安全、低副作用的基因載體。聚乙烯亞胺(PEI)作為最典型的陽(yáng)離子聚合物之一,目前已經(jīng)廣泛用作基因轉(zhuǎn)染的載體,但其細(xì)胞毒性大,血液相容性差等缺點(diǎn)嚴(yán)重制約了其進(jìn)一步的應(yīng)用。并且,直接體內(nèi)應(yīng)用會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞的聚集,與血液中的白蛋白等發(fā)生非特異性結(jié)合,導(dǎo)致聚合體的形成,對(duì)人體有巨大傷害。所以,PEI一般不單獨(dú)做為基因藥物的載體。因此,對(duì)PEI進(jìn)行修飾是極其必要的。p-環(huán)糊精由于其特殊的結(jié)構(gòu)使其在水溶液中可以識(shí)別和包結(jié)一系列的底物。 由葡萄糖單元構(gòu)成,使其成為超分子化學(xué)中一種便宜易得、生物相容性良好的重要主體分子。并在催化、自組裝、分子識(shí)別、藥物運(yùn)輸?shù)阮I(lǐng)域應(yīng)用廣泛。本研究選取β-環(huán)糊精為改性材料,與支鏈狀BPEI連接反應(yīng)形成BPEI-β-CD復(fù)合材料。合成的復(fù)合材料具有毒性低、安全性高和轉(zhuǎn)染效率好等特點(diǎn)。結(jié)構(gòu)中p-環(huán)糊精上的羥基可以改善載體的細(xì)胞膜的黏附作用。抑癌基因p53將通過靜電作用被BPEI吸附。同時(shí),將抗腫瘤藥物doxorubicin(DOX)與AD-COOH反應(yīng)形成AD-DOX,其可以與空腔的p-CD通過主客體反應(yīng)而結(jié)合。這樣,載體材料BPEI-β-CD將同時(shí)搭載上抑癌基因p53與抗腫瘤藥物DOX,從而實(shí)現(xiàn)基因與藥物的協(xié)同治療。在此研究中,我們利用基于BPEI-β-CD的釋放體系重點(diǎn)考察了抗腫瘤藥物DOX與抑癌基因p53分別單獨(dú)作用和同時(shí)作用的效果對(duì)比。最后發(fā)現(xiàn),DOX與p53雖然同時(shí)進(jìn)入HeLa細(xì)胞,但是兩者在抑制HeLa細(xì)胞的增殖上存在先后次序,具有協(xié)同治療的效果,且這種結(jié)果要優(yōu)于其他組分的情況。可見這種新的抗癌藥物遞送體系能有效控制兩種物質(zhì)的分步釋放,能在微酸性腫瘤病灶部位釋放兩種物質(zhì)從而協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),提高腫瘤治療效率。
【關(guān)鍵詞】：聚乙烯亞胺 β-環(huán)糊精 阿霉素 p53抑癌基因 控制釋放 協(xié)同治療
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 本文所用英文縮寫詞表11-12
• 第1章 緒論12-23
• 1.1 引言12
• 1.2 逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的方法12-14
• 1.2.1 納米藥物載體13
• 1.2.2 RNA干擾(RNAi)技術(shù)13
• 1.2.3 基因與藥物協(xié)同治療13-14
• 1.3 納米藥物載體在腫瘤治療中的發(fā)展及應(yīng)用14-15
• 1.3.1 藥物搭載體系的發(fā)展14
• 1.3.2 納米藥物控釋系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)14-15
• 1.4 基因與藥物協(xié)同治療在腫瘤治療中的發(fā)展及應(yīng)用15-16
• 1.5 聚乙烯亞胺在腫瘤治療中的發(fā)展及應(yīng)用16-18
• 1.6 環(huán)糊精在腫瘤治療當(dāng)中的作用18-19
• 1.6.1 環(huán)糊精簡(jiǎn)介18
• 1.6.2 環(huán)糊精的應(yīng)用18-19
• 1.7 p53抑癌基因以及阿霉素DOX在腫瘤治療中的應(yīng)用19-20
• 1.7.1 p53抑癌基因在腫瘤治療中的應(yīng)用19-20
• 1.7.2 阿霉素DOX在腫瘤治療當(dāng)中的應(yīng)用20
• 1.8 本論文擬開展的工作20-23
• 第2章 控釋體系的制備及其表征23-33
• 2.1 引言23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分23-26
• 2.2.1 試劑與儀器23-24
• 2.2.2 基因藥物載體刺激響應(yīng)型控釋體系的合成24-25
• 2.2.3 AD-DOX的合成25
• 2.2.4 BPEI-β-CD的合成25
• 2.2.5 p53/BPEI-β-CD/AD-DOX復(fù)合體系的合成25-26
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論26-31
• 2.3.1 控釋載體紫外表征26
• 2.3.2 控釋載體傅立葉紅外光譜表征26-28
• 2.3.3 控釋載體質(zhì)子核磁共振(~1H-NMR)表征28-29
• 2.3.4 控釋載體表面電位與粒徑表征29-31
• 2.4 小結(jié)31-33
• 第3章 控釋體系基因載體的研究33-45
• 3.1 前言33
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分33-38
• 3.2.1 儀器與試劑33-34
• 3.2.2 細(xì)菌的培養(yǎng)以及質(zhì)粒的提取34-35
• 3.2.3 細(xì)胞的培養(yǎng)35
• 3.2.4 凝膠電泳實(shí)驗(yàn)35
• 3.2.5 基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以及載體毒性實(shí)驗(yàn)35-36
• 3.2.6 細(xì)胞內(nèi)示蹤實(shí)驗(yàn)36-38
• 3.2.7 DOX的體外釋放實(shí)驗(yàn)38
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論38-44
• 3.3.1 DNA凝膠電泳實(shí)驗(yàn)38-39
• 3.3.2 基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以及載體毒性實(shí)驗(yàn)39-41
• 3.3.3 細(xì)胞內(nèi)示蹤實(shí)驗(yàn)41-43
• 3.3.4 DOX體外釋放結(jié)果分析43-44
• 3.4 小結(jié)44-45
• 第4章 阿霉素和p53聯(lián)用對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的影響45-56
• 4.1 前言45-46
• 4.2 實(shí)驗(yàn)46-49
• 4.2.1 試劑與儀器46
• 4.2.2 細(xì)胞形態(tài)及臺(tái)盼藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)46-47
• 4.2.3 細(xì)胞毒性MTT實(shí)驗(yàn)47-48
• 4.2.4 流式細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)48-49
• 4.2.5 RTCA細(xì)胞增殖與毒性實(shí)時(shí)監(jiān)控實(shí)驗(yàn)49
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論49-55
• 4.3.1 細(xì)胞形態(tài)及臺(tái)盼藍(lán)染色結(jié)果分析49-50
• 4.3.2 細(xì)胞毒性MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析50-52
• 4.3.3 流式細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析52-53
• 4.3.4 RTCA細(xì)胞增殖與毒性實(shí)時(shí)監(jiān)控結(jié)果分析53-55
• 4.4 小結(jié)55-56
• 結(jié)論56-58
• 參考文獻(xiàn)58-66
• 附錄A 攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄66-67
• 致謝67

  本文關(guān)鍵詞：搭載阿霉素與p53基因的支鏈狀聚乙烯亞胺—環(huán)糊精超分子體系抑制HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：269337