本文關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌溶栓酶的分離純化及性質(zhì)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：血栓類疾病是威脅人類生命健康的頭號(hào)殺手。血栓形成后會(huì)對(duì)腦、心臟、肺等血液循環(huán)系統(tǒng)造成栓塞,從而導(dǎo)致多種疾病,如冠心病、腦血栓、動(dòng)脈硬化等。血栓性疾病由于其致殘、致死率非常高,所以一直是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。血栓性疾病的發(fā)病與年齡相關(guān),隨著我國(guó)老齡化問題的日益嚴(yán)重,血栓類疾病的預(yù)防和治療顯得尤為重要。溶栓是血栓類疾病最有效、應(yīng)用最廣的治療與預(yù)防方法之一。通過溶栓藥物的應(yīng)用以達(dá)到溶解治療血栓的目的。目前臨床上應(yīng)用的主要溶栓藥物有尿激酶(UK)、鏈激酶(SK)和組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)等。這些溶栓藥物雖然溶栓效果明顯,但依然存在半衰期較短、價(jià)格昂貴等缺點(diǎn),所以仍需要尋找療效好、安全、經(jīng)濟(jì)的溶栓藥物。溶栓酶廣泛來源于動(dòng)物、植物和微生物。微生物作為溶栓酶藥物的來源,具有培養(yǎng)容易、產(chǎn)量高、所需設(shè)備簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),一直都是溶栓藥物研究開發(fā)的一個(gè)重點(diǎn)。本研究在實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上,對(duì)枯草芽孢桿菌發(fā)酵液中的溶栓酶進(jìn)行分離純化。建立了硫酸銨鹽析、離子交換層析的純化方法,制備了較純的枯草芽孢桿菌溶栓酶。研究了酶的穩(wěn)定性及降解特異性。在此基礎(chǔ)上,初步研究該酶在動(dòng)物體內(nèi)的溶栓活性。研究結(jié)果如下：1.純酶樣品的制備：將發(fā)酵液用60%飽和度的硫酸銨進(jìn)行鹽析,離心收集蛋白沉淀,溶解后,在醋酸鹽緩沖液(0.02 M pH 5.6)中透析。樣品透析后經(jīng)陽(yáng)離子交換層析(CM-sepharose Fast Flow)進(jìn)行進(jìn)一步分離純化,制得純化酶制品。通過蛋白質(zhì)電泳(SDS-PAGE)和酶活檢測(cè),評(píng)價(jià)與檢測(cè)純化過程中溶栓酶組分的純度及活性。2.穩(wěn)定性及降解特異性研究：在不同溫度(4℃、37℃)下,研究該酶在溶液狀態(tài)下的穩(wěn)定性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在4℃條件下,酶活在9天的降解實(shí)驗(yàn)中保留了90%的活性。而在37℃條件下,在9天降解實(shí)驗(yàn)中,其酶活在前3天迅速下降,5天后基本沒有檢測(cè)到酶活。說明該酶在4℃條件下具有較好的穩(wěn)定性。此外,通過纖維蛋白“加熱”平板實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)該酶具有直接降解纖維蛋白的能力。3.體內(nèi)溶栓活性的初步研究：初步的體內(nèi)溶栓研究表明,該酶在體內(nèi)具有較強(qiáng)的溶栓效果。該酶通過股靜脈注射40分鐘后,取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液,待血液凝固后,藥物注射組仍具有良好的溶解血栓能力,顯微鏡下觀察紅細(xì)胞形態(tài)完整,溶解血栓能力與酶濃度呈正相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：枯草芽孢桿菌 溶栓酶 分離純化 穩(wěn)定性 溶栓
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R914
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 1. 前言12-26
• 1.1 枯草芽孢桿菌簡(jiǎn)介及其應(yīng)用12-15
• 1.1.1 枯草芽孢桿菌簡(jiǎn)介12
• 1.1.2 枯草芽孢桿菌的應(yīng)用12-15
• 1.2 血栓疾病概述15-19
• 1.2.1 血栓疾病的分類及其危害15-16
• 1.2.2 血栓的成因及其分子機(jī)理16-19
• 1.3 血栓疾病的治療方法19-20
• 1.4 抗血栓藥物的發(fā)展20-24
• 1.4.1 抗血小板類藥物20
• 1.4.2 抗凝藥物20-21
• 1.4.3 溶栓藥物21-24
• 1.5 微生物來源的溶栓酶類24-25
• 1.5.1 芽孢桿菌產(chǎn)生的纖溶酶24
• 1.5.2 鏈霉菌產(chǎn)生的纖溶酶24-25
• 1.5.3 根霉產(chǎn)生的纖溶酶25
• 1.5.4 海洋假單胞菌產(chǎn)生的纖溶酶25
• 1.6 立題依據(jù)及研究意義25-26
• 2. 枯草芽孢桿菌溶栓酶的發(fā)酵及分離純化26-35
• 2.1 引言26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器26-27
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法27-31
• 2.3.1 溶栓酶粗酶液的制備27-28
• 2.3.2 溶栓酶酶活的測(cè)定28
• 2.3.3 鹽析曲線的制作28-29
• 2.3.4 溶栓酶的純化29-30
• 2.3.5 溶栓酶蛋白含量的測(cè)定30-31
• 2.3.6 SDS-PAGE檢測(cè)蛋白質(zhì)純度及大致分子量31
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-34
• 2.4.1 溶栓酶粗酶的提取31-32
• 2.4.2 溶栓酶的純化結(jié)果32-34
• 2.5 討論34-35
• 3. 溶栓酶穩(wěn)定性及降解特異性研究35-43
• 3.1 引言35
• 3.2 材料、試劑及儀器35-36
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法36-37
• 3.3.1 溶栓酶溶解纖維蛋白研究36-37
• 3.3.2 不同溫度下(4℃、37℃)溶栓酶9天降解實(shí)驗(yàn)37
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-41
• 3.4.1 溶栓酶溶解纖維蛋白的研究結(jié)果37-39
• 3.4.2 4℃條件下溶栓酶9天降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-40
• 3.4.3 37℃條件下溶栓酶9天降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-41
• 3.5 討論41-43
• 4. 溶栓酶體內(nèi)溶栓性質(zhì)初步研究43-54
• 4.1 引言43
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器43-44
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法44-45
• 4.3.1 實(shí)驗(yàn)材料、組別及劑量44
• 4.3.2 實(shí)驗(yàn)流程44
• 4.3.3 指標(biāo)的觀察與分析44-45
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-53
• 4.4.1 右股靜脈注射給藥后大鼠狀態(tài)變化45-46
• 4.4.2 不同組別凝血時(shí)間的差異46
• 4.4.3 不同時(shí)間點(diǎn)下血塊變化情況46-49
• 4.4.4 游離紅細(xì)胞數(shù)及紅細(xì)胞形態(tài)觀察49-52
• 4.4.5 血塊剩余情況52-53
• 4.5 討論53-54
• 5. 全文總結(jié)54-55
• 論文的創(chuàng)新點(diǎn)55
• 論文的不足之處55-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 中英文縮略語(yǔ)對(duì)照表63-64
• 致謝64-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷65

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  本文關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌溶栓酶的分離純化及性質(zhì)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：266449