本文關(guān)鍵詞：海藻酸鈉水凝膠用于神經(jīng)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：中樞神經(jīng)難以再生使得中樞系統(tǒng)損傷疾病嚴(yán)重影響著人類(lèi)的健康,干細(xì)胞具有自我更新和分化為多種細(xì)胞的潛能為治療中樞神經(jīng)損傷性疾病提供了新的治療方案。然而干細(xì)胞移植面臨著成活率低和有效分化率低的難題。本課題針對(duì)干細(xì)胞移植的兩大難題,研究了兩套神經(jīng)干細(xì)胞三維移植的水凝膠系統(tǒng),從多個(gè)方面解決干細(xì)胞移植問(wèn)題。制備不同氧化度的部分氧化的海藻酸鈉,利用部分氧化的海藻酸鈉與明膠形成可注射的水凝膠,通過(guò)顯微形貌、流變力學(xué)進(jìn)行篩選,并對(duì)篩選的低氧化度部分氧化海藻酸鈉水凝膠材料進(jìn)行生物相容性測(cè)試。并結(jié)合包覆小分子藥物TWS119的明膠納米微球形成生物活性復(fù)合水凝膠,并制作不同載藥梯度進(jìn)行測(cè)試對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用,結(jié)果表明可定向誘導(dǎo)90%左右向神經(jīng)元分化。生物活性復(fù)合水凝膠系統(tǒng)可以提高移植細(xì)胞的成活率和有效分化率,但無(wú)法誘導(dǎo)分化為多巴胺能神經(jīng)元,尤其是針對(duì)帕金森作用的A9多巴胺能神經(jīng)元。針對(duì)帕金森疾病A9多巴胺能神經(jīng)元的缺乏和干胞移植的兩大難題,課題設(shè)計(jì)了雙層智能水凝膠系統(tǒng),課題研究了神經(jīng)球的定向誘導(dǎo)分化水凝膠并作為雙層系統(tǒng)的外層,并制備了促進(jìn)細(xì)胞增殖、粘附和細(xì)胞遷移一體的智能水凝膠材料作為雙層系統(tǒng)的內(nèi)核。外層分化層固定化Cripto-1封閉性抗體可實(shí)現(xiàn)神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元尤其A9多巴胺能神經(jīng)元分化,并形成神經(jīng)元的網(wǎng)絡(luò)。內(nèi)層材料接枝RGD多肽促進(jìn)了神經(jīng)干細(xì)胞增殖、粘附,根據(jù)細(xì)胞增殖情況和MMP分泌情況接枝MMP底物促進(jìn)細(xì)胞遷移躲避炎癥反應(yīng)高發(fā)期,炎癥反應(yīng)高發(fā)期后細(xì)胞遷移至外層被誘導(dǎo)分化,從而行使功能。
【關(guān)鍵詞】：定向誘導(dǎo)分化 神經(jīng)干細(xì)胞 帕金森 水凝膠
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R943;R96
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 緒論8-22
• 1.1 課題的研究背景和意義8
• 1.2 中樞神經(jīng)損傷相關(guān)疾病8-10
• 1.2.1 外傷性腦損傷8-9
• 1.2.2 脊髓損傷9
• 1.2.3 腦中風(fēng)9
• 1.2.4 帕金森疾病9-10
• 1.3 神經(jīng)干細(xì)胞用于中樞神經(jīng)再生10-12
• 1.3.1 內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞11
• 1.3.2 外源性神經(jīng)干細(xì)胞移植11-12
• 1.4 神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化水凝膠工程化設(shè)計(jì)12-19
• 1.4.1 合成水凝膠材料12-13
• 1.4.2 天然成分的水凝膠材料13-15
• 1.4.3 復(fù)合材料15-16
• 1.4.4 水凝膠材料決定神經(jīng)干細(xì)胞的行為16-19
• 1.5 本課題主要的研究?jī)?nèi)容19-22
• 第2章 材料和方法22-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22-25
• 2.1.1 細(xì)胞系與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑22-23
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器23-24
• 2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制24
• 2.1.5 實(shí)時(shí)定量PCR引物24-25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法25-28
• 2.2.1 氧化海藻酸鈉的制備25
• 2.2.2 納米粒子的制備25-26
• 2.2.3 抗體固定化26
• 2.2.4 掃描電子顯微鏡觀察26
• 2.2.5 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)26-27
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)分析27-28
• 2.3 本章小結(jié)28-29
• 第3章 神經(jīng)元定向誘導(dǎo)復(fù)合水凝膠系統(tǒng)29-39
• 3.1 引言29
• 3.2 復(fù)合水凝膠系統(tǒng)的表征29-33
• 3.2.1 凝膠的顯微形貌觀察30-31
• 3.2.2 凝膠的流變力學(xué)研究31-32
• 3.2.3 納米粒子的制備及其表征32-33
• 3.3 水凝膠系統(tǒng)的生物相容性檢測(cè)33-35
• 3.3.1 細(xì)胞死活染色分析33-34
• 3.3.2 水凝膠系統(tǒng)三維培養(yǎng)掃描電鏡觀察34-35
• 3.4 復(fù)合水凝膠系統(tǒng)定向誘導(dǎo)分化作用分析35-36
• 3.5 討論36-37
• 3.6 本章小結(jié)37-39
• 第4章 雙層智能水凝膠系統(tǒng)39-57
• 4.1 引言39-40
• 4.2 外層分化材料40-50
• 4.2.1 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察41-43
• 4.2.2 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)43-45
• 4.2.3 免疫熒光染色分析45-49
• 4.2.4 體內(nèi)分化實(shí)驗(yàn)49-50
• 4.3 內(nèi)層智能材料的探索50-53
• 4.3.1 RGD梯度追蹤測(cè)試50-51
• 4.3.2 MMP底物梯度追蹤測(cè)試51-53
• 4.4 雙層智能水凝膠系統(tǒng)的表征53-54
• 4.5 討論54-55
• 4.6 本章小結(jié)55-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其它成果64-66
• 致謝66

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本文編號(hào)：266051