本文關(guān)鍵詞：小鼠腦內(nèi)TIGAR水平與缺血復(fù)灌損傷耐受的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀(guān)察TIGAR在小鼠腦各區(qū)域的表達(dá)差異性、細(xì)胞定位以及在發(fā)育和成熟不同階段小鼠腦皮層內(nèi)表達(dá)的變化,比較TIGAR表達(dá)量與小鼠對(duì)腦缺血損傷耐受性的關(guān)系。方法:采用小鼠短暫性大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注(transient middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型和體外培養(yǎng)原代神經(jīng)元缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧(oxygen glucose dripivation/reoxygenation,OGD/R)模型。在動(dòng)物腦組織中,使用免疫熒光法和Western blot檢測(cè)TIGAR表達(dá)含量的差異性。使用免疫電鏡檢測(cè)TIGAR在亞細(xì)胞內(nèi)的定位變化。以腦梗死體積,行為學(xué)癥狀評(píng)分和存活率等指標(biāo)比較TIGAR不同表達(dá)量和腦缺血損傷耐受性的關(guān)系。在培養(yǎng)原代神經(jīng)元中,用Western Blot檢測(cè)不同胎齡神經(jīng)元在H2O2處理后TIGAR表達(dá)的變化;使用CCK-8檢測(cè)TIGAR不同表達(dá)量的神經(jīng)元對(duì)H2O2損傷的耐受性差異。用DHE探針標(biāo)記檢測(cè)神經(jīng)元的ROS變化。運(yùn)用NADPH/NADP+,GSH/GSSG和LD試劑盒檢測(cè)腦皮層和神經(jīng)元內(nèi)NADPH,GSH和LD表達(dá)水平。Western Blot和免疫熒光法檢測(cè)γ-H2A.X的含量變化,彗星實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步比較DNA損傷變化。Western Blot和免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞色素C在不同年齡小鼠和不同胎齡神經(jīng)元內(nèi)的逸出變化,從而比較線(xiàn)粒體損傷變化。結(jié)果:TIGAR在小鼠各腦區(qū)均有表達(dá),并且在嗅球,皮層及海馬等腦區(qū)表達(dá)含量尤為顯著。免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TIGAR在神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞均有表達(dá),但在神經(jīng)元內(nèi)表達(dá)量更高。免疫電鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn),TIGAR在線(xiàn)粒體,內(nèi)質(zhì)網(wǎng),胞漿,細(xì)胞核等亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)均有表達(dá),而缺血復(fù)灌3 h后,TIGAR在線(xiàn)粒體以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的表達(dá)水平顯著增多。在小鼠的整個(gè)發(fā)育過(guò)程中,TIGAR在胚胎期的表達(dá)含量顯著高于其它時(shí)期,在整個(gè)胚胎發(fā)育階段,表達(dá)量呈下降趨勢(shì),并在出生后下降至最低。在1-7天的新生鼠腦皮層內(nèi),TIGAR表達(dá)量逐漸回升。但在新生第7天后開(kāi)始逐漸下降,在之后的發(fā)育過(guò)程中,TIGAR表達(dá)量逐漸下降,并在3 M后,TIGAR維持在較低水平。腦缺血復(fù)灌損傷后,TIGAR在發(fā)育不同時(shí)程動(dòng)物體內(nèi)調(diào)節(jié)具有差異性。1 M小鼠在腦缺血復(fù)灌后,TIGAR表達(dá)水平下降;2 M和3 M齡小鼠腦缺血復(fù)灌后,TIGAR表達(dá)上調(diào),但在復(fù)灌3 h后,1 M,2 M和3 M小鼠TIGAR表達(dá)調(diào)節(jié)至相似水平,這可能與TIGAR在腦缺血復(fù)灌損傷中起到的保護(hù)作用機(jī)制有關(guān)。除此以外,在TTC染色腦缺血復(fù)灌后的小鼠腦片中,3 M小鼠比1 M小鼠具有更大的腦梗死面積。腦缺血復(fù)灌損傷后,3 M小鼠比1 M和2 M小鼠有更嚴(yán)重的神經(jīng)行為學(xué)損傷和和更高的死亡率。同樣地,在胚胎小鼠腦皮層培養(yǎng)的神經(jīng)元中,TIGAR調(diào)節(jié)與在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。并且在OGD復(fù)灌24 h后,E 12胚胎神經(jīng)元存活率高于E 16和E 20胚胎神經(jīng)元。在使用NADPH給予治療OGD復(fù)灌損傷后,E 12,E 16和E 20胚胎神經(jīng)元的存活率都有所升高。在胚胎神經(jīng)元中加入H2O2后,E 20胚胎神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)ROS含量顯著高于E 12胚胎神經(jīng)元。在動(dòng)物和細(xì)胞缺血模型中,TIGAR通過(guò)抑制糖酵解,增加磷酸戊糖途徑,從而增加細(xì)胞內(nèi)NADPH,GSH水平,降低LD水平。在缺血復(fù)灌后,3 M小鼠(E 20胚胎神經(jīng)元)比1 M小鼠(E 12原代神經(jīng)元)DNA和線(xiàn)粒體損傷更嚴(yán)重。結(jié)論:TIGAR對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用,且具有高表達(dá)量的青年小鼠和早期胚胎神經(jīng)元對(duì)腦缺血有更強(qiáng)的耐受性,其作用機(jī)制可能與產(chǎn)生更多內(nèi)源性抗氧化劑NADPH,降低神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)ROS含量,從而抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡有關(guān)。外源性給予NADPH對(duì)胚胎神經(jīng)元OGD誘導(dǎo)的損傷具有保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血再灌注 TIGAR 氧化應(yīng)激 神經(jīng)保護(hù) NADPH
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 前言12-15
• 一、研究背景12-14
• 1. 腦缺血再灌注損傷的病理生理機(jī)制12
• 2. 腦缺血再灌注損傷與發(fā)育耐受性關(guān)系12-13
• 3. TIGAR的研究現(xiàn)狀13
• 4. 本課題的研究?jī)?nèi)容13-14
• 二、本課題的創(chuàng)新點(diǎn)14
• 三、本課題的研究意義及價(jià)值14-15
• 第一部分 小鼠腦內(nèi)TIGAR水平與缺血復(fù)灌損傷耐受性的關(guān)系15-36
• 第一節(jié)TIGAR在各腦區(qū)的表達(dá)差異及亞細(xì)胞定位15-20
• 材料與方法15-19
• 1 藥品與試劑15
• 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15-16
• 3 主要儀器16
• 4 溶液配制16-17
• 5 方法與步驟17-18
• 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析18-19
• 結(jié)果19-20
• 1 TIGAR在各腦區(qū)均有表達(dá)19
• 2 TIGAR在細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞定位19-20
• 小結(jié)20
• 第二節(jié)TIGAR在不同發(fā)育階段小鼠腦中的表達(dá)差異20-25
• 材料與方法20-22
• 1 藥品與試劑20-21
• 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21
• 3 主要儀器21
• 4 溶液配制21-22
• 5 方法與步驟22
• 結(jié)果22-25
• 1 TIGAR在不同發(fā)育階段的表達(dá)水平22-23
• 2 TIGAR在不同類(lèi)型細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)變化23-25
• 小結(jié)25
• 第三節(jié) TIGAR的表達(dá)水平與腦缺血損傷的耐受性關(guān)系25-32
• 材料與方法25-28
• 1 藥品與試劑25
• 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物25
• 3 主要儀器25-26
• 4 溶液配制26-27
• 5 方法與步驟27-28
• 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28
• 結(jié)果28-31
• 1 不同發(fā)育期小鼠tMCAO大腦皮層缺血區(qū)TIGAR水平的時(shí)程變化28-29
• 2 TIGAR對(duì)不同發(fā)育期t MCAO小鼠腦梗死體積的影響29
• 3 TIGAR對(duì)不同發(fā)育期t MCAO小鼠神經(jīng)癥狀的影響29
• 4 TIAGR對(duì)t MCAO小鼠生存率的影響29
• 5 不同胚胎期OGD/R皮層原代神經(jīng)元內(nèi)TIGAR水平的時(shí)程變化29-30
• 6 不同胚胎期OGD/R小鼠原代皮層神經(jīng)元活性的變化30-31
• 小結(jié)31-32
• 第四節(jié) 氧化應(yīng)激損傷對(duì)不同時(shí)程胚胎神經(jīng)元的損傷影響32-36
• 材料與方法32-33
• 1 藥品與試劑32
• 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物32
• 3 主要儀器32-33
• 4 溶液配制33
• 5 方法與步驟33
• 6 數(shù)據(jù)處理33
• 結(jié)果33-35
• 1 H_2O_2 (雙氧水) 誘導(dǎo)不同胚胎期培養(yǎng)皮層神經(jīng)元內(nèi)TIGAR的表達(dá)33-34
• 2 TIGAR對(duì)H_2O_2 干預(yù)不同胚胎期培養(yǎng)皮層神經(jīng)元活性的影響34
• 3 TIGAR對(duì)H_2O_2 干預(yù)不同胚胎期培養(yǎng)皮層神經(jīng)元內(nèi)ROS的影響34-35
• 小結(jié)35-36
• 第二部分TIGAR抵抗不同發(fā)育期小鼠腦缺血損傷耐受性的分子機(jī)制36-50
• 第一節(jié) TIGAR表達(dá)與PPP代謝途徑相關(guān)36-41
• 材料與方法36-37
• 1 藥品與試劑36
• 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物36
• 3 主要儀器36-37
• 4 溶液配制37
• 5 方法與步驟37
• 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理37
• 結(jié)果37-41
• 1 不同發(fā)育期小鼠腦缺血皮層區(qū)NADPH/NADP+的變化37
• 2 不同發(fā)育期小鼠腦缺血皮層區(qū)GSH/GSSG的變化37-38
• 3 不同發(fā)育期小鼠腦缺血皮層區(qū)LD的變化38
• 4 青年鼠與老年鼠腦內(nèi)NADPH/NADP+水平比較38
• 5 青年鼠與老年鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激水平比較38-41
• 小結(jié)41
• 第二節(jié) DNA 損傷在不同時(shí)程小鼠腦內(nèi)的比較41-45
• 材料與方法41-43
• 1 試劑與材料41
• 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物41
• 3 主要儀器41-42
• 4 溶液配制42
• 5 方法與步驟42-43
• 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析43
• 結(jié)果43-45
• 1 不同時(shí)程小鼠在腦缺血損傷后DNA的損傷變化43
• 2 不同胚胎期小鼠神經(jīng)元在OGD復(fù)灌損傷后DNA的損傷變化43-45
• 小結(jié)45
• 第三節(jié) 不同時(shí)程小鼠腦內(nèi)線(xiàn)粒體損傷比較45-50
• 材料與方法45-47
• 1 藥品與試劑45
• 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物45
• 3 主要儀器45-46
• 4 溶液配制46
• 5 方法與步驟46-47
• 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析47
• 結(jié)果47-49
• 1 不同時(shí)程小鼠缺血復(fù)灌損傷后線(xiàn)粒體的損傷變化47
• 2 不同時(shí)程胚胎期小鼠神經(jīng)元在氧化應(yīng)激損傷后線(xiàn)粒體的損傷變化47-49
• 小結(jié)49-50
• 討論50-52
• 總結(jié)52-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 綜述58-63
• 參考文獻(xiàn)61-63
• 英文縮寫(xiě)詞表63-64
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文64-65
• 致謝65-66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 洪荔枝;趙曉媛;張慧靈;;p53介導(dǎo)缺血性腦損傷的神經(jīng)元死亡(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2010年03期

  本文關(guān)鍵詞：小鼠腦內(nèi)TIGAR水平與缺血復(fù)灌損傷耐受的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：262407